棉花抗黄萎病相关基因筛选与亚克隆文库构建

以黄萎病菌诱导下差异表达的棉花抗病相关基因片段PR8为探针，利用杂交方法，对优质、抗病海岛棉品种Pima90—53BAC文库进行筛选。从30336个BAC克隆中筛选到含有PR8基因片段的4个阳性克隆，分别为127K13，128D14，169J3和178C5。用Sau3AI对其中的169J3克隆进行酶切，回收2—4kb的DNA片段并连接到载体pUCI18BamHI—BAP上，构建了含有该基因片段的亚克隆文库，共含有4224个克隆。经电泳检测，插入片段在1．3kb，平均为2kb。该亚克隆文库的构建为克隆PR8基因奠定了基础。

长片段小麦细菌人工染色体DNA亚克隆文库的构建

为了加快小麦基因组的测序,以Langdon库中的一个BAC克隆（BAC790O10）为材料,利用HydroShear DNA剪切仪将其打断,产生许多大小不同的DNA随机片段,回收其中3-5 kb的片段,并将这些片段随机克隆入TOPO载体,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆文库。

大白菜抗霜霉病同源基因的筛选与亚克隆文库的构建

根据植物抗霜霉病基因保守区设计简并引物,利用三维PCR方法对大白菜（Brassica campestris ssp.pekien-sis）‘85-1’BAC文库进行筛选,从19 200个BAC克隆中筛选到含有目的基因的10个阳性克隆。利用HindⅡ对其中的94-G-17克隆进行酶切,回收1~5 kb的DNA片段并连接到载体pUCHindⅡ？BAP上,构建了含有6 200个克隆的亚克隆文库。经电泳检测,插入片段在1~5 kb。该亚克隆文库的构建为克隆大白菜抗霜霉病同源基因全长奠定了基础。

凡纳滨对虾兰尼定受体基因亚克隆文库的构建及部分序列的测定

将一个含有凡纳滨对虾兰尼定受体基因的fosmid克隆用DNA剪切仪进行片段化处理,回收3～5kb之间的DNA片段连接到pUC118HincⅡ/BAP载体上,构建了适合于鸟枪法测序的亚克隆文库.经鉴定,该文库滴度为5.0×104 cfu.mL-1,重组率达到90%,插入片段大小在3～5kb范围内.随机挑取100个阳性克隆进行两端测序,通过拼接得到一条兰尼定受体基因部分片段,该片段长2 550bp.通过比对分析,发现该基因片段推导的氨基酸序列与果蝇兰尼定受体基因有较高的相似性.