猪链球菌流行病学及亚单位疫苗研究进展

猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是世界范围内流行的主要的猪病原体之一,给养猪业造成了巨大的经济损失。S.suis也是一种新兴的人畜共患病原体,会给人类带来严重的疾病甚至死亡。在猪和人身上,S.suis可引起败血症、肺炎、心内膜炎、关节炎和脑膜炎,并有不可逆的后遗症。2005年在中国暴发的S.suis感染导致了大量的人类发病和死亡,促使全球对S.suis的研究增加。近年来,S.suis在病原学、基因组学、毒力基因挖掘、流行病学和疫苗研究等方面取得了重要进展。

新型冠状病毒亚单位疫苗研制及其高效免疫增强剂的筛选

旨为推动新型冠状病毒(2019-nCoV)亚单位疫苗的开发并探索筛选适用于该疫苗的高效免疫增强剂,本试验分别诱导表达2019-nCoV-S和2019-nCoV-N两个蛋白,经纯化后测定目的蛋白含量,并分别加入不同浓度的松花粉多糖(PPPS)(200、400、800 mg/mL)作为佐剂制备基因工程亚单位疫苗,黄芪多糖佐剂作为对照。选取100只SPF级BALB/c小鼠随机分为10组,每种亚单位疫苗使用5组,免疫疫苗后检测各组小鼠免疫指标,探讨PPPS对2019-nCoV-S和2019-nCoV-N两种亚单位疫苗的免疫增强效果。结果显示,重组表达并纯化的目的蛋白分别在55.68 kD和45.64 kD处出现单一条带,经鉴定表达正确,蛋白质量浓度分别为1.12 mg/mL和0.66 mg/mL。用制作成的含佐剂亚单位疫苗免疫小鼠后发现400 mg/mL PPPS对两种疫苗的免疫效果均有显著的提升效果,并且效果优于黄芪多糖佐剂。综上所述,两种重组蛋白均能诱导较高的抗体水平,PPPS可以作为2019-nCoV亚单位疫苗的候选佐剂。

PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠免疫保护效果的评价

为评价猪圆环病毒2型-副猪嗜血杆菌二联亚单位疫苗(以下简称二联苗)对小鼠的免疫保护效果,本研究将猪圆环病毒2型(PCV2)cap基因克隆至pMAL-c5X载体中,并通过原核系统表达了重组Cap蛋白(rCap)。通过western blot检测显示原核表达的rCap与PCV2单克隆抗体发生特异性结合,表明rCap具有良好的反应原性。利用本研究室已经纯化并保存的副猪嗜血杆菌(HPS)重组蛋白rCdtB、rAfua和rOPPA,与rCap蛋白以及佐剂ISA201VG混合乳化后制成PCV2-HPS二联亚单位疫苗,疫苗中各蛋白(rCdtB、rAfua、rOPPA、rCap)浓度均为50μg/300μL。将60只6周龄BALB/c小鼠随机均分成免疫组和对照组,采用背部多点注射方式免疫,首免后间隔14 d二免。一免后以及二免后的14 d分别通过颌下采血方法采血,通过间接ELISA方法检测各组小鼠血清中的特异性抗体,结果显示,二免后14 d,免疫组小鼠血清中CdtB、OPPA、Afua抗体水平分别与PBS+ISA201VG对照组和免疫之前比较均极显著提高(P<0.0001);利用PCV2免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)抗体检测试剂盒检测各组小鼠血清抗体,结果显示在攻毒前PBS组均未检测到PCV2抗体,免疫组二免后14 d抗体水平为1∶800。二免后14 d,将免疫组和PBS组各随机分为3组(每组10只小鼠)进行攻毒保护试验,结果显示二联苗对PCV2攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,对HPS5型HN10株攻毒组小鼠的免疫保护率为70%,与对照组比较差异极显著(P<0.01);对HPS13型ZD12株攻毒组小鼠的免疫保护率为80%,与对照组比较差异极显著(P<0.001)。上述结果首次表明,原核表达的rCap具有良好的免疫原性,PCV2-HPS二联亚单位疫苗对小鼠具有一定的保护效果,为后续PCV2-HPS二联亚单位疫苗的研究奠定了实验基础。

结核分枝杆菌亚单位疫苗研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)是一种重要的人兽共患病原菌,能引起肺结核等严重的传染性疾病。疫苗是防控结核分枝杆菌感染的手段之一,目前获得许可的结核病疫苗仅为卡介苗,相比其他种类疫苗,结核亚单位疫苗具有更佳的安全性,配合佐剂使用可进一步提高保护效力、延长持续时间。亚单位疫苗由一种或多种不含核酸但具有免疫活性的抗原组成,并且作为预防性疫苗已存在多种。制备亚单位疫苗的主要方式是分离纯化与保护性免疫应答相关的特异性抗原,以此适当激活树突状细胞(DC)来启动和/或调节T淋巴细胞。本文通过对已有结核亚单位疫苗进行汇总分析,着重阐述了用于亚单位疫苗的抗原、佐剂及目前的临床试验进展,为后续开展结核相关疫苗研究提供有价值的参考。

酵母表达系统制备的猪圆环亚单位疫苗效果评估

猪圆环病毒目前仍然是危害养猪业的重要病原,接种疫苗是目前最有效的预防措施,采用昆虫-杆状病毒或大肠杆菌系统表达制备的猪圆环亚单位疫苗已经在临床上推广使用,免疫效果良好。酵母表达系统因具有成本低、易培养、无内毒素等优势,理论上更适合用于动物疫苗的开发。笔者利用国内自主知识产权的马克斯克鲁维酵母(KM)系统表达猪圆环cap蛋白,蛋白表达水平可达到2g/L;通过对生产工艺的不断优化,可获得高纯度的cap蛋白,且均能自我组装形成VLP。酵母源圆环亚单位疫苗免疫猪后,产生的抗体滴度高于进口的圆环亚单位疫苗,且安全性良好,免疫猪未出现任何不良反应。

猪3型链球菌荚膜多糖亚单位疫苗安全性与免疫效果评价

为评价猪3型链球菌荚膜多糖亚单位疫苗安全性与免疫保护效果,本研究以昆明系小鼠为评价模型,开展了免疫攻毒、组织病理与抗体检测研究。结果显示,荚膜多糖亚单位疫苗安全性高,其中免疫组(50μg/g)同源攻毒保护率可达75%,且肺脏和脑组织病变指数低,可刺激B细胞产生IgM抗体激发免疫反应。本研究表明猪3型链球菌荚膜多糖亚单位疫苗具有良好的安全性及免疫保护效果,具备潜在的临床应用价值。

Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗与全病毒灭活疫苗的免疫效果比较

为了比较不同抗原含量的Ⅰ群禽腺病毒(4型)Fiber-2蛋白亚单位疫苗与全病毒灭活疫苗的免疫效力差异,本研究制备不同抗原含量的亚单位疫苗和全病毒灭活疫苗,采用超低免疫剂量20μL/只免疫SPF鸡,免疫21 d后攻毒,通过死亡率、临床症状、大体剖检病变、免疫组化和泄殖腔拭子排毒等进行免疫效力比较。试验结果表明,亚单位疫苗抗原含量AGP效价不低于1∶8,全病毒灭活疫苗抗原含量为10^(7.0)TCID_(50)/0.1 mL时,可抵抗Ⅰ群禽腺病毒(4型)强毒株的攻击,提供100%的免疫攻毒保护,攻毒后3、5、7 d泄殖腔拭子均未见排毒,且免疫组化均为阴性。亚单位疫苗抗原含量AGP效价为1∶4,全病毒灭活疫苗抗原含量为106.5 TCID_(50)/0.1 mL时,在超低免疫剂量情况下,仍可提供至少80%的免疫攻毒保护,且攻毒后3、5、7 d泄殖腔拭子排毒率仅为2/10~3/10,免疫组化阳性率仅为1/10。但全病毒灭活疫苗抗原含量为106.0 TCID_(50)/0.1 mL时,免疫攻毒保护效果不理想。综合以上结果表明,Fiber-2蛋白具有良好的免疫原性,抗原含量AGP效价不低于1∶4,与全病毒灭活疫苗抗原含量为106.5 TCID_(50)/0.1 mL免疫效力相当,可用于疫苗研制开发。

无针免疫猪圆环病毒2型亚单位疫苗效果评价

为评价用无针注射器接种猪圆环病毒2型亚单位疫苗的安全性及免疫效果,为无针免疫的使用、推广提供数据支撑,将40头3~5周龄三元猪随机均分为4组,即有针注射1头份剂量组以及无针注射低(1/4头份)、中(1/2头份)、高(1头份)剂量组,分别于第1、21天开展两次免疫,观察试验前后动物的临床症状、体重变化,并对第7、14、21、28、42天各组动物体内抗体水平变化及免疫效率等进行研究。结果显示:采用无针注射器进行免疫时动物疼痛反应较小,注射速度快,免疫后各组动物精神状态、饮食、饮水、自发活动等无异常;与有针注射组动物相比,减量注射(1/4头份)可以显著促进仔猪增重(P<0.05),同时可以达到和有针注射同样的免疫效果(P>0.05);同等剂量亚单位疫苗注射免疫后,无针免疫组动物体内抗体水平更高(P<0.01),且各组动物体内抗体阳性率均可有效维持至试验结束。结果表明,用无针注射器接种猪圆环病毒2型亚单位疫苗安全性高、耐受性好、有效性稳定,无针注射器减量免疫可以达到有效保护作用的同时促进了仔猪生长,可尝试推广应用。

Aβ_(42)及其C端亚单位疫苗接种正常SD大鼠后产生高滴度的抗Aβ_(42)抗体

目的 探讨Aβ4 2 及其C端亚单位肽疫苗接种正常成年SD大鼠后能否产生高滴度的抗Aβ4 2 抗体。 方法 将Aβ36～ 4 2 与不同载体偶联制成的亚单位疫苗和Aβ4 2 全肽疫苗分别接种于SD大鼠。用Westernblotting方法和间接ELISA法检测其血清和脑匀浆上清液中的抗体的特异性以及滴度 ,并用HE染色对大鼠的脑、肝、脾和肾进行形态学观察。 结果 第 2次接种后各实验组的血清均开始有抗Aβ4 2 抗体产生 ,且抗体滴度随接种次数的增多而增高 ,第 4次接种后各实验组血清的抗Aβ4 2 抗体滴度均达到 1∶10 0 0 0以上 ,同时脑匀浆上清液也检测到低滴度的抗Aβ4 2 抗体 ;实验鼠的大脑、肝、脾和肾均未发现病理性变化。 结论 Aβ4 2 及其亚单位疫苗 (Aβ36～ 4 2 )接种于正常SD大鼠后 ,均能产生高滴度的抗Aβ4 2 抗体 。

牛腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察

以大肠杆菌表达系统表达并纯化的牛源坏死杆菌H05菌株5个截短的重组白细胞毒素蛋白PL1(1aa～174aa)、PL2(311aa～644aa)、lktA3(1319aa～2026aa)、PL4(1960aa～2287aa)和PL5(3077aa～3241aa)为抗原分别免疫昆明系小白鼠,同时将灭活的天然坏死杆菌白细胞毒素和PBS作为免疫对照。ELISA结果显示,经4次免疫后5个重组蛋白和天然白细胞毒素均能介导小鼠产生抗白细胞毒素蛋白的特异性抗体,抗体效价分别为1∶6400、1∶12800、1∶6400、1∶12800、1∶3200和1∶800。免疫鼠活菌攻击观察结果和免疫鼠肝脏组织学变化结果一致证明,PL1、PL2、lktA3、PL4、PL5重组蛋白和天然白细胞毒素对小鼠均具有保护作用,5个重组蛋白的免疫保护作用均优于天然白细胞毒素,在5个重组蛋白中PL1、lktA3和PL4对鼠的免疫保护效果最好。

鸡新城疫病毒HN基因亚单位疫苗诱导免疫保护的实验研究

实验分别将应用Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８ ℃培养７２ ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０ ℃冻融３次。用ＨＡ－ＨＩ实验和ＨＮ单抗中和试验测定表达产物的活性。将表达的重组蛋白作为亚单位疫苗免疫鸡。用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ试验测定鸡体内抗体效价。免疫后第１５ ｄ用国家标准强毒ＮＤＶ Ｆ４８Ｅ８攻毒，统计免疫保护率。结果表明，表达的ＮＤＶ ＨＮ重组蛋白能够诱导鸡体产生抗ＮＤＶ 特异性ＩｇＧ抗体和ＨＩ抗体。实验Ⅰ组（四平株）雏鸡保护率为６５％，实验Ⅱ组（长春株）雏鸡保护率为１００％。

新型鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研究

为评价真核表达的鸭坦布苏病毒(DTMUV)融合表位蛋白的免疫原性,本研究通过生物信息学技术,对DTMUV E蛋白序列进行分析,筛选2段T细胞表位和8段B细胞表位,采用柔性肽将10条多肽进行拼接,人工合成串联表位基因,利用杆状病毒表达系统对该融合表位蛋白(rTBE)进行表达。经western blot和间接免疫荧光试验证明rTBE能够在在Sf9细胞中有效表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用Al(OH)3乳化(0.1μg/mL),分别以0.3 mL、0.6 mL和0.8 mL的剂量免疫雏鸭,ELISA抗体检测结果表明,rTBE可以诱导雏鸭产生高水平的IgG血清抗体;MTT结果表明,rTBE能够刺激雏鸭脾脏T淋巴细胞增殖;中和抗体试验结果表明,表达的rTBE和DTMUV病商品活疫苗均能够刺激机体产生针对DTMUV的中和抗体。Al(OH)3对照组雏鸭均未产生IgG血清抗体与中和抗体。攻毒保护试验结果显示,0.3 mL rTBE免疫组对雏鸭的保护率为70%,0.6 mL、0.8 mL和商品化疫苗免疫组对雏鸭的保护率均为100%,而Al(OH)3对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上结果表明,本研究预测及表达的DTMUV E蛋白融合表位蛋白rTBE具有免疫原性及保护力。以上研究结果为DTMUV新型亚单位疫苗的研究奠定了基础。

猪圆环病毒2型Rep/Rep'和Cap蛋白亚单位疫苗免疫保护性试验

猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因编码的Rep/Rep'蛋白与病毒复制酶相关,ORF2编码的Cap蛋白为病毒核衣壳,是病毒保护性抗原。为比较这3种蛋白作为亚单位疫苗的免疫保护性,本研究以重组杆状病毒表达的PCV2-rRep、-rRep'和-rCap蛋白制备亚单位疫苗及PCV2灭活苗,分组免疫BALB/c鼠进行攻毒,以评价疫苗的免疫保护力。对PCV2-rRep和-rRep'亚单位疫苗免疫鼠血清ELISA抗体检测表明,于免疫后第14 d抗体全部转阳,第35 d抗体效价分别达到1∶42 667和1∶51 200。PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫组于第21 d抗体转阳,第35 d抗体效价分别达1∶2 133和1∶333。攻毒试验表明,PCV2-rCap亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠获得完全保护;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫组无保护作用。血清中和试验表明,PCV2-rCap蛋白亚单位疫苗和PCV2灭活苗免疫鼠血清中和抗体效价达1∶1 600和1∶800;而PCV2-rRep和-rRep'蛋白亚单位疫苗免疫鼠血清无中和病毒能力。该研究表明,PCV2-Cap蛋白亚单位疫苗具有良好的免疫保护力,可以与PCV2自然感染猪产生的抗Rep蛋白抗体相鉴别,具有良好的开发前景。

鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊抗体产生动力曲线

目的观察鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫羊后产生的动力学曲线。方法用不同剂量鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白基因工程亚单位疫苗免疫绵羊,免疫前及免疫后不同时间采血检测抗体情况,观察绵羊抗体的产生和变化水平。结果免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,具有良好的免疫效果。结论鹦鹉热衣原体基因工程亚单位疫苗免疫剂量为0.5mg/只颈部肌肉多点注射,在绵羊整个妊娠期内具有保护作用。

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗在小鼠体内的免疫机制及其保护效力

【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu)进行攻毒保护试验。【结果】试验Ⅱ组的4种抗体水平(ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和OMP)和脾淋巴细胞诱生IL-2水平显著高于其它3组(P<0.05),脾淋巴细胞增殖水平也一直高于其它3组(P>0.05)。且试验Ⅱ组对APP1型保护作用(9/10)明显高于试验I组(6/10)、试验Ⅲ组(5/10)和对照组(0/10),而对APP2型保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它3组(典型肺部损伤),显示出细胞免疫和体液免疫水平与免疫攻毒保护之间存在着正相关性。【结论】试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对不同血清型APP的攻击提供了很好的交叉保护作用。

奶牛乳房炎无乳链球菌Fc-Sip和金黄色葡萄球菌Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗的免疫试验研究

为探究由IgG FcRn介导奶牛乳房炎无乳链球菌(S.agalactiae,Sgc)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sau)保护性抗原亚单位疫苗的免疫效果,在本实验室前期研究基础上,本研究按体积11的比例将Sgc的Fc-Sip和Sau的Fc-FnBPB-ClfA两种蛋白分别与1%的盐酸左旋咪唑(1%LH)充分混合,制备两种亚单位疫苗。将即将干奶(妊娠220 d)、CMT试验为"++"以上的奶牛随机分为4组,分别将Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA二联亚单位疫苗(A组)、Fc-Sip亚单位疫苗(B组)、Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗(C组)通过首次肌肉免疫和二次乳头管灌注免疫方式进行免疫试验。通过免疫前后对乳样细菌分离、体细胞数测定及免疫血清抗体滴度测定,评价上述亚单位疫苗的免疫效果。结果显示,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛的乳样细菌分离率分别为80%、90%、80%,其中Sgc检出率分别为20%、30%、10%,Sau检出率分别为30%、20%、10%;首免90 d后3个免疫组奶牛乳样细菌分离率分别降至20%、20%、40%,其中Sgc的检出率分别降至0、0、10%,Sau的检出率分别降至10%、10%、0,对照组免疫前后以上各项检测无明显变化。使用利拉伐牛奶体细胞检测仪检测免疫前后试验奶牛乳样中的体细胞数,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛体细胞数均值分别为6.19×105个/mL、5.16×105个/mL、5.49×105个/mL,首免90 d后3个免疫组奶牛乳样中体细胞数均值分别为2.05×105个/mL、2.04×105个/mL、2.52×105个/mL,而对照组奶牛乳样体细胞数与免疫前无明显变化。检测首免后0、7 d、14 d、28 d、60 d、90 d的血清抗体滴度,结果显示,首免后7 d,免疫组(A、B、C)80%的奶牛血清抗体滴度为11024;第14 d后,免疫组(A、B、C)90%奶牛血清抗体滴度达到12048;第28 d后,免疫组(A、B、C)80%奶牛血清抗体滴度在14096~18192,比对照组平均上升3~4个抗体滴度,对照组奶牛血清抗体滴度一直保持在1256~1512。综合分析以上试验结果显示免疫A组(Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA)综合免疫效果在各免疫组中最佳。本研究结果表明Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA二联亚单位疫苗对无乳链球菌和金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎具有较好的治疗和预防作用,为奶牛隐形乳房炎的防治提供了实验依据。

猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护效果的评价及其免疫机制的研究

分别表达了rApxⅠr、ApxⅡr、ApxⅢ、rApxⅣr、Apfa和rOMP 6种重组蛋白,以不同组合分组免疫小鼠,分别以APP1型菌(5×109CFU)和APP7型菌(1×1011CFU)进行攻毒。结果显示,试验Ⅱ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP)的APXⅠ抗体水平、细胞免疫水平及对APP1和APP7型菌的保护效果均显著高于其他各试验组及对照组;试验Ⅰ组(灭活疫苗)、Ⅲ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApxⅣ)、Ⅳ组(rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rApfa)与对照组差异显著,但均显著低于试验Ⅱ组;APXⅠ抗体水平和细胞免疫水平与攻毒保护率呈正相关。证实rApxⅠ+rApxⅡ+rApxⅢ+rOMP组免疫效果最好,可对2个血清型APP的攻击提供有效保护。

A组牛轮状病毒基因工程亚单位疫苗的初步研究

目的构建轮状病毒外膜蛋白VP4、VP7基因与大肠杆菌LTB蛋白基因的重组表达载体,研究重组表达蛋白的免疫原性,为研制犊牛腹泻基因工程亚单位疫苗奠定基础。方法克隆A组牛轮状病毒临床分离株CHLY的VP4、VP7基因和大肠杆菌LTB基因,插入pET32a中构建了4个原核表达载体pET32a/VP7、pET32a/VP4、pET32a/VP7-LTB、pET32a/VP4-LTB,转化到BL21(DE3)中进行表达纯化,纯化蛋白与弗氏佐剂混合免疫10 w龄雌鼠,在实验期间对雌鼠进行交配,对其所产乳鼠用150μL10-6.5/0.1 mL TCID50的轮状病毒进行攻毒以研究重组蛋白免疫原性和攻毒保护性。结果重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式存在,Bandscan扫描分析结果显示,它们分别占菌体总蛋白的35%、20%、30%、18%,利用Ni-NTA Agarose在变性条件下成功纯化得到高纯度重组蛋白。10 w龄雌鼠免疫试验表明rVP4-LTB组激发了最强的免疫反应,rVP4组次之,rVP7-LTB组略高于rVP7,各个免疫组间的差异性不显著(P>0.05),各实验组IgG抗体水平显著高于空质粒对照组(P<0.01)。雌鼠所产乳鼠的攻毒实验表明,免疫组雌鼠所产乳鼠腹泻率为13.35%～23.8%,腹泻持续时间为48h～72h,较空质粒对照组明显降低,腹泻症状较轻且症状持续时间明显缩短。四个重组蛋白组攻毒保护率为76.2%～86.7%,rVP7-LTBr、VP4-LTB两组略高于rVP7r、VP4组,但相互间差异不显著(P>0.05)。结论重组蛋白具有较好的免疫原性,被免疫雌鼠体内产生的中和性抗体可以经被动免疫过程传递至子代,并为仔鼠提供保护。本研究为犊牛轮状病毒基因工程疫苗的研究奠定了一定的基础。

杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域应用的研究进展

杆状病毒表达系统是以杆状病毒为蛋白质表达载体,昆虫细胞或幼虫为受体的真核表达系统。与原核细胞相比,昆虫细胞可对外源蛋白进行翻译后修饰,如多肽折叠、糖基化、酰基化、磷酸化、二硫键形成及蛋白质水解等。因杆状病毒对畜禽无致病性,这使得杆状病毒表达系统成为一种安全有效的兽用亚单位疫苗生产平台。作者对杆状病毒表达系统在兽用亚单位疫苗领域中的应用作了简要综述。

禽多杀性巴氏杆菌PtfA重组亚单位疫苗免疫效果的检测

为评价禽多杀性巴氏杆菌(P.multocida)PtfA重组蛋白(rPtfA)的免疫效果,本研究通过PCR扩增禽P.multocida的ptfA基因,将其克隆于pET-32a载体中并在大肠杆菌中表达。表达的rPtfA纯化后制备油乳剂亚单位疫苗,经3次免疫20只4周龄雏鸡,并设弱毒活疫苗组和PBS对照组。免疫后定期采血检测免疫鸡体液和细胞免疫水平,并进行攻毒试验评价rPtfA保护效率。结果显示动物免疫后,rPtfA免疫组和弱毒活疫苗免疫组血清抗体水平持续上升,与PBS对照组相比差异极显著(p<0.01),并且弱毒活疫苗组血清抗体水平高于rPtfA免疫组。淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌试验的结果也表明,rPtfA组和弱毒活疫苗组的SI值及分泌的IFN-γ水平均极显著高于对照组(p<0.01),并且弱毒活疫苗组稍高于rPtfA组。攻毒后rPtfA组和弱毒活疫苗组的保护率分别为40%和70%,表明rPtfA亚单位疫苗虽然可为免疫鸡提供一定的保护,但效果不及弱毒活疫苗,仍需采取措施进一步增强其免疫保护效果。