J-亚群禽白血病JL-2株的分离鉴定

近年来 ,J_亚群禽白血病的暴发流行在国内时有报道 ,在本研究中 ,自吉林某患病鸡群分离出一株病毒 ,采用特异性引物 ,经RT_PCR扩增出长度为 5 4 5bp的J_亚群禽白血病病毒特异性核苷酸片段 ;将病毒经SPF鸡胚成纤维细胞增殖 ,获取其前病毒DNA ,依据原型毒株HPRS_10 3cDNA序列设计并合成一对引物 ,经PCR扩增得到包括gp85、gp37、E_element基因在内的近 1.8kb的DNA片段 ,将其连到pMD18_T载体上 ,转化大肠杆菌JM10 9,培养后提取质粒分别用HindIII,BamHI进行单酶切和双酶切鉴定 ,得到了阳性重组质粒pMD18_T_JL2 /env ,核苷酸序列测定结果表明 ,该片段为J_亚群禽白血病病毒囊膜基因 ,其中亚型特异性片段gp 85和标准对照毒株HPRS_10 3的同源率为 94 % ,所编码氨基酸的同源率为 87%。

在抗体免疫选择压作用下鸡J亚群白血病病毒gp85基因的变异

将鸡J亚群白血病病毒(ALV—J)中国分离株NX0101接种到已长成单层鸡胚成纤维细胞(CEF)的六孔细胞培养板上,分为A组(培养基中无抗体)和B组(培养基中含抗体),每组设3个独立的传代系列,分别对第10代、20代和30代病毒的囊膜糖蛋白基因(env)进行了克隆和测序,序列比较结果表明:原始病毒与无抗体A组不同传代系列的不同代次之间gp85氨基酸序列同源性为97.7%-99.7%;而原始病毒与有抗体B组不同传代系列的不同代次之间gP85的氨基酸序列同源性为93.8%-96.1%.对gp85高变区上有义突变(NS)与沉默突变(S)的比例计算分析表明,无抗体A组三个传代系列在110-120,141-151和189-194aa这3个高变区域上NS/S的值分别为2(8/4),1(3/3)和1.3(4/3);有抗体B组三个传代系列在110—120,140—150和188—193aa这3个高变区域上NS/S的值分别为4.1(13/3),4.7(14/3)和3.3(11/3).该结果是在严格实验条件下显示特异性抗体这一免疫选择压对gp85基因变异的影响.