血清白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B2水平在结直肠癌患者中的诊断价值

目的探讨白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B2(LILRB2)水平在结直肠癌(CRC)患者中的诊断价值。方法选取2021年1月至2022年5月于潍坊医学院附属医院(以下简称“我院”)确诊的CRC患者125例为CRC组,筛选同期于我院进行健康检查人群120名为对照组。采用酶联免疫吸附试验法及电化学发光法分别检测CRC组和对照组血清LILRB2、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)水平。对所得数据进行统计学处理,分析LILRB2在CRC患者中的诊断价值。结果CRC组血清LILRB2、CA199、CEA水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、淋巴结转移、脉管癌栓、浸润深度、TNM分期患者血清LILRB2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。受试操作特征曲线结果显示,血清LILRB2、CA199、CEA及三者联合检测的曲线下面积分别为0.7593、0.5727、0.7234、0.7889;三者联合检测的诊断效能高于CA199、CEA单独检测,差异有统计学意义(P<0.05);而其与LILRB2比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TNMⅠ+Ⅱ期患者的LILRB2诊断敏感度高于TNMⅢ+Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CRC患者血清LILRB2水平对CRC诊断具有一定的临床价值。

白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B在肿瘤发生发展中的作用

白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B,LILRB)在骨髓细胞、造血干细胞、神经细胞等多种机体细胞广泛表达。有研究发现,LILRB受体可以与多种配体结合并具有多种生物学功能,包括调节炎症反应、免疫耐受、细胞分化和神经系统的可塑性等。近年来研究发现,LILRB在多种实体瘤和血液系统肿瘤表达增高并与患者预后显著相关,同时LILRB与免疫抑制、肿瘤细胞生长和自我更新直接相关,具有肿瘤支持因子和免疫检查点分子的双重作用。此外,肿瘤细胞表达的LILRB与肿瘤微环境中的免疫细胞相互作用,调节机体对肿瘤的免疫反应,敲除小鼠的LILRB同源基因后,小鼠的正常造血功能未受到明显影响。上述研究结果提示,LILRBs可能是肿瘤治疗的理想靶点。本文就LILRB与实体瘤和血液系统肿瘤的发生机制、LILRB在肿瘤细胞中的信号转导方式、LILRB与肿瘤的免疫治疗及需要解决的问题进行阐述,以期为后续的深入研究提供参考。

白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B生物学功能研究进展

白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B(LILRB)属于I型跨膜糖蛋白,为免疫抑制性受体。目前,已知的LILRBs受体包括5种类型,分别为LILRB1、2、3、4、5。LILRBs在免疫细胞、破骨细胞、神经细胞和肿瘤细胞等多种细胞广泛表达,并能够识别多种配体。LILRBs具有调节炎症反应、免疫耐受、细胞分化和神经系统的可塑性等多种生物学功能,并在炎症性疾病、自身免疫性疾病、传染性疾病、神经系统疾病和恶性肿瘤等多种疾病中发挥重要作用。本文就最近发现的LILRBs的表达部位、配体、生物学功能及其在相关疾病中的研究进展进行综述。

杀伤细胞凝集素样受体B1对类风湿关节炎外周血CD8^(+)T细胞功能的影响

目的研究杀伤细胞凝集素样受体B1(CD161)对类风湿关节炎(RA)病人外周血CD8^(+)T细胞及其亚群功能的影响。方法自2023年5―8月,整合基因组学数据库(GEO)不同数据集中对照组及RA组病人的外周血单细胞数据、Bulk转录组测序数据及临床相关数据,观察CD161在对照组及RA组中的表达差异情况。通过相关性分析指出CD161与RA病人临床炎症指标及治疗反应预后的相关性。运用单细胞无监督聚类、细胞注释方法观察CD161主要表达的细胞亚群及不同细胞亚群在对照组及RA组中的变化趋势。利用单细胞生物学评分功能计算不同亚群细胞的生物学功能评分,结合基因差异表达分析和功能富集分析,探索RA病人CD8^(+)T细胞及其亚群关键生物学功能与CD161基因表达的潜在关系。结果在人体外周全血中,与对照组相比,RA组中CD161高表达(8.779±0.657)(P<0.05),且CD161的表达与RA病人炎症因子C反应蛋白(CRP,r=−0.21)及血沉(ESR,r=−0.25)呈负相关(P<0.05)。CD161主要表达于NK细胞1.35±0.87、CD4^(+)T细胞0.62±0.82及CD8^(+)T细胞0.85±1.01,但在CD8^(+)T细胞中表达异质性最显著(标准差1.01大于平均数0.85),且CD161在CD8^(+)记忆T细胞中表达丰度最高1.38±0.34。与对照组相比,RA组中CD8^(+)T及CD8^(+)记忆T细胞频率均下降。与对照组相比,在RA病人外周血CD8^(+)记忆T细胞中,CD161表达降低(1.46±0.33比0.97±0.37,P<0.05),CD161与CD8^(+)记忆T细胞迁移(0.24±0.12比0.16±0.11)、细胞毒作用(0.52±0.27比0.45±0.38)呈正相关(均P<0.05),与趋化及促炎能力(0.15±0.04比0.17±0.02)呈负相关(P<0.05),与细胞增殖(0.02±0.04比0.03±0.04)或凋亡(0.12±0.22比0.18±0.18)相关性差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD161介导CD8^(+)记忆T细胞细胞毒作用及促炎功能改变促进RA发生、发展。

LILRB4在肿瘤微环境中的作用及其在肿瘤治疗中的应用进展

人类白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)是一种免疫抑制性受体,正常生理情况下,其在单核细胞、巨噬细胞及树突状细胞上表达。LILRB4在多种肿瘤组织中的肿瘤细胞及巨噬细胞、自然杀伤细胞等免疫细胞中的表达高于相应正常组织,能够影响肿瘤细胞的生物学行为及肿瘤免疫微环境,显著促进肿瘤进展,且LILRB4的肿瘤免疫治疗显示出良好的疗效。该文对LILRB4在血液系统肿瘤、实体肿瘤中的表达与作用,以及靶向LILRB4治疗肿瘤的策略进行综述。

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因多态性与癫痫耐药相关性研究进展

ATP结合盒B亚家族1转运蛋白基因(ABCB1)编码产物是P-糖蛋白(P-gp)。目前的诸多研究表明ABCB1基因单核苷酸多态性(SNPs)及其表达产物P-gp与癫痫耐药有关。但也有研究认为,ABCB1_SNPs及P-gp与癫痫耐药之间没有关联。可能是由于ABCB1_SNPs的种族差异性,造成了各项研究结果不相一致。亦有研究认为ABCB1_3435C>T、1236C>T及2677G>T\A\A的多态性或许与癫痫耐药无关,但是其单体型与癫痫耐药有一定关联。因此,应在不同种族中进行ABCB1_SNPs及其单体型的进一步研究,将有助于发现真正的癫痫耐药机制。

ABCB1基因C3435T多态性对苯巴比妥透过癫痫患者血-脑屏障的影响

目的探讨ABCB1基因C3435T多态性对苯巴比妥(PB)透过癫痫患者血-脑屏障(BBB)及癫痫发作的影响。方法选择62例接受PB单药治疗的全身强直-阵挛发作癫痫患者,记录6个月治疗期间的癫痫发作次数。对患者进行ABCB1基因C3435T多态性基因分型,测定脑脊液(CSF)及血清(S)中PB的药物浓度,计算CSF/S-PB浓度比作为PB透过BBB的指标。结果62例患者经ABCB1基因C3435T基因测序分型,其中CC型17例,CT型32例和TT型13例;CC型、CT型和TT型患者CSF-PB分别为(44.71±10.95)μmol/L、(52.75±13.24)μmol/L、(65.64±14.34)μmol/L,CSF/S-PB分别为0.47±0.12、0.53±0.17、0.66±0.19,差异有统计学意义(P<0.05)。CC型发作9次2例,8次1例,7次3例,6次2例,发作超过5次CT型和TT型仅有1例,CC基因型和低CSF/S-PB与癫痫发作频率增加相关(P<0.05)。结论ABCB1基因C3435T多态性显著影响癫痫患者CSF/S-PB浓度比和癫痫发作频率,可能是癫痫耐药的机制之一。

GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

YTHDC1介导ABCB6上调诱导AD小鼠神经元细胞铁死亡促进认知功能障碍机制的实验研究

目的研究ATP结合盒B亚家族转运蛋白6(ATP-binding cassette subfamily B transporter 6,ABCB6)对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠认知功能障碍的影响及其可能的潜在调控分子机制。方法通过注射β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)构建体内AD小鼠模型;采用水迷宫测试和Y迷宫测试评估大鼠学习与记忆能力、空间探索能力。通过神经元HT22细胞和Aβ构建体外AD细胞模型;采用RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)分析YTH结构域包含蛋白1(YTH domain containing proteins 1,YTHDC1)与ABCB6的结合关系;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测过表达和敲低转染效率;Western blot检测YTHDC1和ABCB6蛋白,以及铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]表达水平;CCK-8检测细胞活力;检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及Fe^(2+)含量。结果AD小鼠海马组织及Aβ诱导的HT22细胞中ABCB6 mRNA(3.51±0.17 vs 1.02±0.01,3.45±0.21 vs 1.02±0.01)和蛋白(3.25±0.14 vs 1.01±0.01,3.14±0.16vs 1.01±0.01)水平均显著上调,差异具有统计学意义(t=-46.238,-20.349;-50.468,-23.013,均P<0.001)。敲低ABCB6显著降低AD小鼠抵达平台的时间、到达平台距离,增加小鼠自发交替率和进入新异臂次数的比值(t=27.007,11.264,24.414,19.901,均P<0.001)。敲低ABCB6促进HT22细胞增殖,抑制Aβ诱导的MDA,Fe^(2+)水平上调和GSH水平下调,减少ROS生成,促进SLC7A11和GPX4蛋白表达(t=2.883~26.122,均P<0.05)。YTHDC1蛋白通过与ABCB6 mRNA结合促进其稳定性,上调ABCB6蛋白表达。敲低YTHDC1显著降低ABCB6蛋白水平(t=18.504,P<0.001),促进HT22细胞增殖,升高GSH含量及SLC7A11和GPX4蛋白水平,降低MDA和Fe^(2+)含量,抑制ROS生成(t=4.404~14.486,均P<0.05)。敲低YTHDC1可以改善AD小鼠学习与记忆能力和空间探索能力。过表达ABCB6可逆转敲低YTHDC1对HT22细胞铁死亡和AD小鼠认知功能障碍的影响。结论YTHDC1可能通过介导ABCB6上调,诱导神经元细胞铁死亡,进而促进AD小鼠的认知功能障碍发生。

哺乳动物CYP2B亚家族基因的研究进展

细胞色素P450(CYP)是一组血红蛋白,在临床使用的药物和其他异生素的氧化代谢(第一阶段)中起着重要作用。CYP2B亚家族是CYP超家族的一个成员,目前在哺乳动物中的灵长目、啮齿目、食肉目、有蹄类及兔形目中都有发现。哺乳动物CYP2B是一种药物代谢酶,能代谢8%临床上重要药物,如抗肿瘤药物环磷酰胺和异环磷酰胺、抗逆转录病毒药物奈韦拉平和依法韦仑等,因此越来越受到人们的关注。本文主要对哺乳动物CYP2B亚家族基因的分布部位、药物代谢、同源性、诱导、抑制和基因多态性方面进行综述。

免疫抑制性受体LILRB2对白血病细胞系增殖和凋亡的影响

目的探讨免疫抑制性受体—白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(LILRB2)在人白血病细胞系中的表达、功能和相关机制,为白血病的靶向治疗提供新的方向。方法采用流式细胞术和Western blotting等方法确定LILRB2在THP1、U937、K562等白血病细胞系中的表达情况;以LILRB2高表达的THP1细胞为研究对象,利用特异性靶向LILRB2的shRNA慢病毒载体(带GFP标记)包装病毒并感染THP1细胞,使用流式细胞分选技术获得GFP+的稳定表达细胞株,并分别在mRNA水平和蛋白水平检测shRNA干扰效率,同时监测LILRB2敲除后不同时间点细胞增殖、凋亡等细胞命运的变化,分析LILRB2敲除后其下游调控信号改变等相关分子机制。结果 3株细胞系均表达LILRB2,其中又以THP1的表达最高;通过Real-Time PCR及Western blotting方法表明所构建的4个shRNA慢病毒干扰质粒中,shLILRB2-717及shLILRB2-1312能显著下调LILRB2的表达;抑制LILRB2在THP1细胞中的表达可导致细胞增殖明显减缓并出现大量坏死细胞。流式细胞术分析显示:shLILRB2-717和shLILRB2-1312组细胞早期凋亡率分别为(7.90±1.61)%和(24.80±1.32)%,显著高于对照组(Scramble组)的(3.96±0.64)%(P<0.05);两组细胞的晚期凋亡率分别为(13.80±0.98)%和(23.60±1.03)%,均显著高于Scramble组的(10.80±0.48)%(P<0.05);LILRB2敲除可导致SHP1和磷酸化SHP1(p-SHP1)表达的显著下调,提示LILRB2可能通过SHP1调控白血病细胞系的增殖和凋亡。结论免疫抑制性受体LILRB2可表达在多种白血病细胞系,抑制LILRB2的表达可引起THP1细胞中SHP1和p-SHP1的显著下调并导致细胞大量凋亡,揭示SHP1可能对白血病的演变具有正向调控作用。

Wnt/β-catenin信号通路参与化疗药物诱导的转基因斑马鱼abcb4基因的表达和耐药

目的探讨斑马鱼耐药基因ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)与Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法取野生型斑马鱼和转基因斑马鱼均设置空白对照组、阿霉素处理组、长春碱处理组、吉非替尼处理组、阿霉素联合吉非替尼处理组、长春碱联合吉非替尼处理组。每组100枚胚胎分别进行药物处理至第5天,每组取第5天斑马鱼幼鱼50枚进行实验。采用罗丹明123实验检测野生型斑马鱼耐药程度,酶标仪检测转基因的斑马鱼荧光强度,活细胞工作站检测荧光分布位置。Western blot法检测转基因的斑马鱼β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、 ATP结合盒亚家族B成员4(ABCB4)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的蛋白水平。结果罗丹明123实验证实经阿霉素和长春碱药物暴露后的斑马鱼体内产生耐药, EGFP荧光强度检测结果表明经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼荧光强度高,经阿霉素和长春碱药物暴露后的转基因斑马鱼体内β-catenin的累积升高伴随着EGFP和ABCB4蛋白的增加。结论斑马鱼体内Wnt/β-catenin信号通路参与斑马鱼abcb4基因的激活与耐药。

汉族癫痫患者ABCB1基因C3435T多态性与血清、脑脊液P-gp表达的关系

目的探讨汉族癫痫(EP)患者ATP结合盒蛋白B亚家族成员1(ABCB1)基因C3435T多态性与脑脊液、血清P-gp表达的关系。方法选择汉族EP患者118例,其中对抗癫痫药物(AEDs)敏感57例、耐药61例;AB-CB1基因CC型39例、非CC型79例。采用ELISA法检测患者的脑脊液及血清P-gp,PCR-RFLP分析ABCB1C3435T基因型。结果 CC型、非CC型,CC型或非CC型对AEDs敏感及耐药患者的脑脊液、血清P-gp及其比值比较,均无统计学差异(P均>0.05)。结论 ABCB1基因C3435T多态性与EP患者的P-gp表达、AEDs耐药均无相关性。

免疫抑制性受体LILRB2促进新型冠状病毒刺突蛋白介导的炎症过程

目的·探究免疫抑制性受体白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员2(leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 2,LILRB2)在新型冠状(新冠)病毒感染所导致的免疫细胞炎症因子释放中的作用及机制,为新冠病毒肺炎治疗提供潜在靶点。方法·收集包含刺突蛋白胞外段(S-ECD)的细胞上清液,分别使用Western blotting及流式细胞术检测上清液中蛋白表达情况及活性;通过流式细胞术及免疫共沉淀技术检测该上清液中S-ECD与LILRB2的结合;用刺突蛋白处理人单核细胞系THP1或人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),24 h后收集细胞,使用实时定量PCR技术检测相关炎症因子基因mRNA水平改变,同时使用酶联免疫吸附法检测细胞培养液中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及IL-1β含量;将si LILRB2通过Lipofectamine 3000试剂转染至人外周血CD33~+髓系细胞中,24 h后使用流式细胞术检测基因干扰效果;在对照组及LILRB2敲低的CD33~+髓系细胞中加入刺突蛋白培养24 h,使用酶联免疫吸附试剂盒检测细胞培养液中IL-6的含量变化。结果·实验成功构建可分泌具有生物活性的新冠病毒S-ECD的293T细胞转染体系;免疫共沉淀实验显示刺突蛋白与LILRB2蛋白存在相互作用,且流式细胞术结果提示刺突蛋白胞外段能够与细胞表面的LILRB2结合;与对照组相比,经刺突蛋白处理24 h的THP1细胞中IL-6、IL-8、精氨酸酶(arginase 1)及IL-2基因表达水平均有明显上调(均P<0.05);PBMC经刺突蛋白处理24 h后,IL-6、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、IL-8、IL-10及IL-1β的mRNA水平均显著上升(均P<0.05);酶联免疫吸附实验结果显示,在PBMC培养液中加入刺突蛋白能够提高上清液中IL-6及IL-1β的浓度(均P<0.05);使用S-ECD或刺突蛋白处理CD33~+髓系细胞,IL-1β及IL-6含量随之升高(均P<0.05);并且过表达LILRB2的THP1细胞经刺突蛋白刺激后展现了更强的IL-6分泌能力(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,2条siRNA均能敲低CD33~+髓系细胞中的LILRB2,且si LILRB2-1敲除效果更好;LILRB2缺失后,刺突蛋白则不能促进CD33~+髓系细胞的IL-6分泌。结论·新冠病毒刺突蛋白通过与细胞表面分子LILRB2结合,引起髓系细胞释放IL-6、IL-1β等炎症因子,导致患者出现细胞因子释放综合征。

ABCB1 rs10276036、TLR4 rs11536889和IL-10 rs1554286位点基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐药及肺部感染的关系

目的 分析ATP结合盒B亚家族成员1 (ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1) rs10276036、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)rs11536889和白细胞介素10(interleukin 10,IL-10) rs1554286基因多态性与尤文肉瘤患者化疗耐药及并发肺部感染的关系。方法 选取2017年1月至2019年1月就诊的80例尤文肉瘤患者为研究对象,采集各患者外周血并提取DNA,定量PCR检测ABCB1 rs10276036、TLR4 rs11536889和IL-10 rs1554286位点基因多态性。分别对ABCB1 rs10276036 CC、CT和TT基因型,TLR4 rs11536889位点CC、CT和TT基因型以及IL-10 rs1554286位点GG、GA和AA基因型进行分析,并探究其与尤文肉瘤患者化疗耐药及并发肺部感染的关系。结果 80例尤文肉瘤患者的ABCB1 rs10276036、TLR4 rs11536889和IL-10 rs1554286位点分布符合Hardy-Weinberg平衡(χ^(2)=4.253,P>0.05),具有群体代表性。ABCB1 rs10276036位点中CC基因型占比高于CT和TT基因型(χ^(2)=93.863,P<0.001),TLR4 rs11536889位点中GG基因型占比高于GC和CC基因型(χ^(2)=60.788,P<0.001),IL-10 rs1554286位点中GG基因型占比高于GA和AA基因型(χ^(2)=41.213,P<0.001)。依据化疗耐药的界定,ABCB1 rs10276036位点CC基因型和CT/TT基因型的化疗耐药分别为78.33%和55.00%,两组间差异有统计学意义(χ^(2)=4.096,P=0.043)。TLR4 rs11536889位点GG基因型和GC/CC基因型患者肺部感染发生率分别为50.94%和25.93%,两组间差异具有统计学意义(χ^(2)=4.581,P=0.032)。IL-10 rs1554286位点GG基因型和GA/AA基因型患者肺部感染发生率分别为58.33%和28.13%,两组间差异具有统计学意义(χ^(2)=6.123,P=0.013)。连锁不平衡测试结果显示,ABCB1 rs10276036、TLR4 rs11536889和IL-10 rs1554286位点之间存在连锁不平衡(D′:0.88~0.91,P<0.05)。结论 ABCB1 rs10276036位点的多态性影响尤文肉瘤患者的化疗耐药,TLR4 rs11536889位点和IL-10 rs1554286位点的多态性则与尤文肉瘤患者并发肺部感染相关。

ABCB1介导HDAC非选择性抑制剂panobinostat耐药的机制研究

目的:探究ABCB1介导非选择性HDAC抑制剂panobinostat(PBST)在肿瘤细胞中耐药的机制。方法:以KB-3-1、SW620、HEK293/pcDNA3.1以及其对应的耐药细胞株KB-C2、SW620/Ad300、HEK293/ABCB1细胞为研究对象,利用MTT法评价panobinostat对上述细胞系中的增殖抑制活性,并利用基于MTT的逆转实验评价已报道的ABCB1逆转药物对PBST的耐药逆转效果。将PBST作用于耐药细胞,利用Western blot方法检测ABCB1蛋白表达情况。并通过免疫荧光法探究PBST对耐药细胞中ABCB1质膜定位的影响。以氚标记的紫杉醇为探针评价PBST在上述细胞中蓄积水平的差异。通过钒敏感的ATP酶活性实验探究PBST对ABCB1的ATP酶活性影响,并采用计算机辅助分子对接模拟PBST和ABCB1活性口袋的结合情况。结果:PBST的抗肿瘤活性在肿瘤多药耐药细胞中显著下调,已报道的ABCB1逆转药物,如verapamil、ibrutinib、nilotinib、lapatinib以及erlotinib,均可不同程度地逆转PBST耐药。在PBST处理后,肿瘤多药耐药细胞中ABCB1的蛋白表达水平上调,但ABCB1的质膜定位未发生显著改变。PBST作用于KB-C2细胞可显著增加氚标紫杉醇的蓄积水平,但不改变亲本细胞KB-3-1中的蓄积。此外,PBST上调ABCB1的ATP酶活性,并可与ABCB1活性口袋稳定结合。结论:PBST可通过上调ABCB1在肿瘤细胞中的表达水平,下调其药物蓄积,介导其耐药,联合ABCB1抑制剂是潜在的逆转耐药策略。

外周血CD3^+CD161^+淋巴细胞检测在结核病诊断中的价值初探

目的检测外周血CD3^+CD161^+淋巴细胞在结核病人中的表达水平,探讨其应用价值。方法选择菌阳结核病人40例、菌阴结核病人37例、潜伏感染者20例、健康对照者30例。采用流式细胞仪检测各组人群外周血CD3^+CD161^+淋巴细胞水平。通过绘制ROC曲线,评价其对结核病的诊断效能。结果菌阳组和菌阴组CD3^+CD161^+淋巴细胞表达水平分别为(17.59±1.36)%和(16.89±0.83)%,均明显低于对照组[(30.05±1.27)%]和潜伏感染组[(26.88±1.30)%],差异有统计学意义(F=30.77,P<0.01)。根据绘制的ROC曲线,CD3^+CD161^+淋巴细胞在分辨对照组和菌阳组时曲线下面积(AUC)为0.945,敏感度为82.5%,特异度为93.33%;在分辨潜伏感染组和菌阳组时AUC为0.913,敏感度为82.5%,特异度为95%;在分辨对照组和菌阴组时AUC为0.892,敏感度为81.08%,特异度为96.67%;在分辨潜伏感染组和菌阴组时AUC为0.868,敏感度为81.08%,特异度为95.0%。结论结核病人CD3^+CD161^+淋巴细胞下降明显,能够较好地分辨菌阳和菌阴结核病患者与健康人和潜伏感染者,可考虑作为诊断结核病的候选分子标志。

人原发性肝癌相关抗原的蛋白质组学初步研究

目的检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的相关抗原,并予以验证。方法分别提取15例HCC组织及其癌旁组织总蛋白。Western blot分别检测各总蛋白与其HCC患者自体血清的杂交情况。双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术将15例混合总蛋白中的各蛋白进行分离与染色。图像分析法比对染色胶上HCC组织及其癌旁组织蛋白的表达差异,基质辅助激光解吸/电离飞行时间二级质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time-of-flight with two mass analyzers for tandem mass spectrometry,MALDI-TOF MS/MS)技术及生物信息学网络数据库分别对表达差异蛋白予以分析鉴定与检索匹配,免疫组织化学与Western blot分别检测该差异蛋白在人HCC组织及其癌旁组织中的变化情况。结果 2-DE染色胶图像分析比对结果显示,HCC及其癌旁组织蛋白表达差异斑点共90个,MALDI-TOF MS/MS与数据库对其中19个蛋白斑点分析鉴定与检索匹配发现15个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调。免疫组织化学与Western blot检测结果显示,与对照比较,上调蛋白中的Dna J同源B亚家族成员11(dna J homolog subfamily B member 11,DNAJB11)在HCC组织中的表达明显增强,下调蛋白中的蛋白酶体亚基α3(proteasome subunit alpha type 3,PSMA3)在HCC组织中的表达则相反。结论人原发性肝癌相关抗原DNAJB11在HCC组织中的表达上调,PSMA3在HCC组织中的表达下调。

P-糖蛋白表达阳性对癌痛病人舒芬太尼或喷他佐辛PCIA效果的影响

目的:评价P-糖蛋白表达阳性对癌痛病人舒芬太尼或喷他佐辛PCIA的效果。方法:本研究为回顾性队列研究。收集2020年1月至2024年1月于南京市溧水区人民医院进行治疗的癌痛病人的病历资料,年龄54~71岁,体质量49~67 kg,性别不限,TNM分期Ⅱ-Ⅳ期。采用免疫组织化学法测定肿瘤组织P-糖蛋白表达情况。将肿瘤组织P-糖蛋白表达阴性的病人分为2组:舒芬太尼组(S_(1)组)和喷他佐辛组(P_(1)组);将肿瘤组织P-糖蛋白表达阳性的病人分为2组:舒芬太尼组(S_(2)组)和喷他佐辛组(P_(2)组)。当VAS>5 cm时行PCIA,S_(1)组和S_(2)组采用枸橼酸舒芬太尼2μg/kg+托烷司琼10 mg;P_(1)组和P_(2)组采用喷他佐辛3 mg/kg+托烷司琼10 mg,4组均以生理盐水稀释成100 ml,负荷量5 ml,背景输注速率2 ml/h,PCA剂量1 ml,锁定时间10 min。镇痛期间VAS>3 cm时,静脉注射氟比洛芬酯50 mg补救。记录PCIA 4 h内、>4~12 h、>12~24 h及>24~48 h时段舒芬太尼、喷他佐辛用量和氟比洛芬酯使用情况。记录镇痛期间呼吸抑制(SpO_(2)<90%)、恶心呕吐、皮肤瘙痒及心动过缓等不良反应的发生情况。结果:最终纳入100例患者,每组25例。S_(1)组与S_(2)组各时段舒芬太尼用量、氟比洛芬酯使用率及镇痛期间呼吸抑制、恶心呕吐、皮肤瘙痒及心动过缓发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05);与P_(1)组比较,P_(2)组PCIA 4 h内、>4~12 h及>24~48 h时段喷他佐辛用量升高(P<0.05),各时段氟比洛芬酯使用率和镇痛期间呼吸抑制、恶心呕吐、皮肤瘙痒及心动过缓发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P-糖蛋白表达阳性可能会减弱癌痛病人喷他佐辛PCIA的效果,而对舒芬太尼PCIA的效果可能无影响。

LILRB1在口腔鳞癌中的表达及其与EMT的关系

目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B1(LILRB1)的表达及其与上皮-间充质转化(EMT)的关系。方法采用免疫组织化学法检测20例OSCC和20例正常口腔上皮组织中LILRB1、波形蛋白(Vimentin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)的表达,并计算其相关性及与临床参数的关系。结果与对照组相比,OSCC中E-cadherin的表达明显降低,Vimentin的表达明显升高,LILRB1表达也显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,LILRB1与E-Cadherin的表达呈中等强度负相关(r=-0.495,P<0.05),与Vimentin的表达呈中等强度正相关(r=0.471,P<0.05)。E-Cadherin、Vimentin、LILRB1的表达与口腔鳞癌患者性别、年龄、分化程度、转移情况均无相关性。结论OSCC中LILRB1表达升高,并可能参与调控EMT。