亚栖热菌产海藻糖合酶培养基的优化

对亚栖热菌 CBS-01菌株发酵生产海藻糖合酶的培养基进行了优化.首先通过碳源、氮源实验,选出了适宜的碳、氮源,随后采用 Plackett-Burman 设计法对培养基中的组分进行了筛选,找出影响产酶的主要因素为蛋白胨和酵母膏,最后利用中心组合设计及响应面分析法求出了主要影响因素的最佳浓度,得到优化的发酵培养基配方(g/L):可溶性淀粉5,蛋白胨8.6,酵母膏1.725,NaNO_3 0.7,氨三乙酸0.5,Na_2HPO_4 0.1,MgSO_4·7H_2O 0.2,CaCl_2 0.1.10 L 罐发酵实验表明,CBS-01菌株海藻糖合酶的合成属生长关联型,利用优化的发酵培养基,CBS-01菌株的产酶水平由0.2 U/mL 提高到0.41 U/m L.

红色亚栖热菌海藻糖合酶在大肠杆菌中的表达及其酶学性质分析

利用前期克隆得到的红色亚栖热菌CBS-01(Meiothermus ruber CBS-01)的海藻糖合酶基因(TreS),构建天然蛋白异源宿主表达载体并在大肠杆菌中获得较高的表达量.经纯化后测定该酶在pH 6.5,反应温度为50℃时活性最高.酶学性质的研究表明,TreS的最适底物为麦芽糖,其对麦芽糖的转化效率约是海藻糖的2.5倍;该酶在30～60℃、pH 3.5～9.0范围内都保留较高的酶活;2 mmol/L的一价阳离子Na^+、K^+对TreS有激活作用;低温有利于反应向海藻糖方向进行,并能减少葡萄糖副产物的生成;20℃时,几乎没有葡萄糖生成,麦芽糖至海藻糖的转化率可达65%.为工业化大规模生产海藻糖奠定了理论基础.

亚栖热菌透性化细胞的耦合固定化研究

将海藻酸盐凝胶包埋法与交联法和聚电解质静电自组装覆膜法相耦合,对含有海藻糖合酶活性的亚栖热菌的透性化细胞进行了固定化研究。结果表明,利用重氮树脂和聚苯乙烯磺酸钠对海藻酸凝胶微球交替覆膜,可以显著提高凝胶微球在磷酸盐缓冲液中的稳定性,以碳二亚胺对固定化细胞进行交联处理则可以提高固定化细胞中海藻糖合酶的热稳定性。透性化细胞经包埋-交联-覆膜耦合固定化后,酶活回收率为32%,最适酶反应pH值由6.5左右升至7.0左右,最适反应温度未变,仍为60℃。所得固定化细胞间歇反应时,催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60%,重复使用4次(每次50℃、反应24h),酶活损失小于20%,转化率可保持在50%以上。

云南热泉亚栖热菌质粒与其部分表型关系的初步研究

从云南洱源、腾冲热泉分离到108株专性嗜热非芽孢菌,经形态、革兰氏染色及生理生化实验初步鉴定为亚栖热菌。通过碱裂解及试剂盒抽提质粒,琼脂糖凝胶电泳检测,13株菌含有质粒。用AO、SDS对RH17-H进行化学消除后对比消除前后色素和耐高温性变化,显示与质粒无决定性关系。

红色亚栖热菌耐热木聚糖酶的克隆表达及生物信息学分析

从自主分离的Meiothermus.rubber菌株的基因组中克隆到木聚糖酶基因,并进行了超量表达、重组酶的纯化和酶学性质研究。结果表明,重组木聚糖酶Mru是热稳定性酶,最适反应温度为65℃,能够有效降解木聚糖产生木糖和木二糖。生物信息学分析发现,木聚糖酶Mru与数据库中来自亚栖热菌的木聚糖酶的同源性为60%~100%。在木聚糖酶Mru的结构模型中,GH10木聚糖酶的保守位点大多位于β折叠,α螺旋保守性很低。本研究揭示,木聚糖酶Mru代表一类新型热稳定性GH10木聚糖酶。

传唐代书家释亚栖《论书》考辨

释亚栖,洛阳人,生卒年不详,是晚唐著名的僧人书法家。他擅长草书,与同为晚唐僧人书家的?光齐名,惜无作品传世。后代对他的评价褒贬不一,例如《宣和书谱》本传谓其"得张颠笔意",因而"对殿庭草书,两赐紫袍"^([1]),受到了不小的恩宠。然而同书在李霄远条下又谈道:"至于字法之坏,则实由亚栖……俗子之所深喜,而未免夫知书者之所病也。"^([2])可谓贬斥至极。对此,北宋书家周越也有类似的看法,桑世昌《兰亭考》引用了《周子发帖》(即周越的法书)对亚栖的评价。

红色亚栖热菌TPS/TPP海藻糖合成途径中相关基因的克隆、表达及功能鉴定

通过构建红色亚栖热菌(Meiothermus ruberCBS-01)的基因组DNA文库,克隆得到该嗜热菌海藻糖合成途径中的磷酸海藻糖合成酶(TPS)和磷酸海藻糖磷酸酯酶(TPP)基因。以pET21a为表达载体,将磷酸海藻糖合成酶和磷酸海藻糖磷酸酯酶在大肠杆菌中进行表达并纯化,利用薄层层析的方法验证了这两个酶的活性。同时,本研究检测了红色亚栖热菌在各种环境压力下细胞内含物成分的变化情况,发现在高渗环境压力的诱导下,该菌会在胞内积累大量的6-磷酸海藻糖,而并非海藻糖,这为进一步研究TPS/TPP和TreS途径在细胞体内的作用奠定了基础。

晚唐草书僧亚栖书法研究三题

笔者通过对晚唐草书僧亚栖相关书法资料的收集、整理,试从亚栖的书法创作类型及相关书法活动、亚栖的书学思想、亚栖书法的接受三个方面加以研究,以期全面、立体的展现晚唐草书僧亚栖的书法世界。

透性化细胞海藻糖合酶的制备及其性质研究

研究了亚栖热菌CBS-01菌株细胞的渗透处理工艺,并对所得透性化细胞海藻糖合酶的性质进行了考察.结果表明:以2%的甲苯为渗透剂,对10%浓度的菌悬液,50℃渗透处理30～60 min即得透性化细胞海藻糖合酶.该透性化细胞酶的最适反应pH为6.2～7.2,最适反应温度为50～65℃;50℃时,催化麦芽糖生成海藻糖的转化率为70%.

海藻酸锶凝胶固定化含海藻糖合酶细胞的研究

含有海藻糖合酶的亚栖热菌CBS-01菌株细胞经过透性化处理后,以海藻酸锶凝胶对透性化细胞进行了固定化,当加酶量为12U/g海藻酸钠时,所得固定化细胞的载酶量可达6U/g海藻酸钠。细胞固定化后,最适酶反应pH值由6.5升至7.0,最适酶反应温度未变,为60℃,但热稳定性有所提高,70℃保温60min时,固定化细胞的残存酶活为60%,而未固定化细胞的残存酶活约30%。间歇反应时,固定化细胞催化麦芽糖转化为海藻糖的转化率可达60%,重复使用10次,仍可保持约70%的酶活。

产结晶纤维素酶的嗜热菌鉴定及其酶学性质

从云南腾冲热海温泉采集的样品中,分离出一株产结晶纤维素酶的嗜热菌TC-1.该菌株呈杆状,革兰氏阴性,生理生化特征分析和16S rDNA序列同源性比对表明它属于亚栖热菌属Meiothermus.结晶纤维素、木聚糖和葡萄糖可以诱导该菌产生结晶纤维素酶,其中结晶纤维素诱导的酶活力最高.对其产生的结晶纤维素酶进行了初步纯化与酶学性质研究,该酶的最适反应温度为70℃,最适pH为6.0,在50℃～70℃和pH5.5～6.5之间酶活力相对稳定.

分段DNA shuffling:一种大分子海藻糖合酶有效的定向进化方法

【目的】红色亚栖热菌(Meiothermus ruber)海藻糖合酶(Trehalose synthase,M-TreS)将麦芽糖转化生成海藻糖只需一步反应,且具有很好的热稳定性及pH耐受性,是潜在的工业生产海藻糖的酶源。为了提高该酶的性能,有必要对其进行定向进化。【方法】M-TreS基因(M-treS)大小为2 889 bp。该蛋白质分子本身具有很大的进化空间,但是却不宜进行全长基因Shuffling。分段DNA shuffling是为大分子蛋白质(基因≥2 000 bp)的进化而设计的一种方法。该方法分为三步:(1)用两对引物分别扩增目的基因的上游片段和下游片段;(2)上下游片段各自进行Shuffling;(3)利用重叠延伸PCR连接上下游突变群,建立完整基因的突变文库。【结果】结合易错PCR,通过该方法经一轮进化获得一株酶活力是野生型1.6倍、催化效率是野生型2倍的突变株。序列分析表明,该突变株共有6个位点发生了氨基酸的替代,其中一个来自易错突变,2个来自同源重组,3个为随机突变。【结论】分段DNA shuffling是进化大分子蛋白质的有效方法。

宋人书论小札(三) 笔实:黄庭坚的审美理想

一 黄庭坚大约是历史上第一位在使用文字时不避讳＂书家＂一词的士人。 在他之前,只有三个人在自己的著录中使用过这一概念：唐贞元年间的韩方明、晚唐的亚栖,以及北宋中期的朱长文。并且,三人使用这一概念统共四次。（[1]）这其中,韩方明生平事迹不详,亚栖为一介僧人,唯有朱长文中过进士,却几乎终身隐居不仕,