凝血酶调节蛋白联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4预警非瓣膜性房颤合并急性缺血性脑卒中患者缺血事件复发

目的研究凝血酶调节蛋白(TM)联合中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PAD4)预警非瓣膜性心房颤动(NVAF)合并急性缺血性脑卒中(AIS)患者缺血事件复发风险。方法纳入2020年8月至2023年2月期间于天津市西青医院就诊的NVAF合并AIS患者164例为患者组,男71例,女93例,年龄51~83岁。采用Shine i2900型全自动化学发光免疫分析仪测定血浆TM水平;采用TECAN Sunrise酶标仪测定血清PAD4水平。以Kruskal-Wallis H检验进行多组间比对,以Mann-Whitney U检验进行两组间数据比对;用Friedman秩和检验进行同组内各时间节点数据比较;用ROC曲线分析诊断性能;用Logistic回归进行关联性分析;用Kaplan-Meier曲线进行生存分析,Cox比例风险回归模型获得HR值。结果在治疗前和治疗后,复发组血浆TM水平均高于未复发组(P值均<0.001);未复发组在治疗后血浆TM水平显著低于治疗前(P<0.001),复发组治疗后TM水平与治疗前差异无统计学意义(P=0.166)。AIS患者组在治疗前、后的血清PAD4水平均显著高于健康对照组(P值均<0.001)。治疗前,未复发组血清PAD4水平与复发组间的差异无统计学意义(P=0.093);治疗后,复发组显著高于未复发组(P<0.001);未复发组在治疗后血清PAD4水平低于治疗前(P<0.001),复发组在治疗后显著高于治疗前间(P<0.001)。治疗前,血浆TM的ROC曲线下面积(AUC^(ROC))为0.885,临界值为13.04TU/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.909,临界值为10.52TU/mL。治疗前,血清PAD4的AUC^(ROC)为0.606,临界值为11.45ng/mL;治疗后,AUC^(ROC)为0.939,临界值为10.00ng/mL。TM与PAD4联合评估的治疗前AUC^(ROC)为0.877,治疗后AUC^(ROC)为0.976。用Logistic回归做多元分析,AIS患者治疗后的TM和PAD4水平均与充血性心力衰竭和高血压有显著相关性(P<0.05)。生存分析显示,治疗后,TM、PAD4以及两项指标联合评估,均可有效预测患者在随访期内缺血事件复发的累积风险(Log-rankχ^(2)分别为20.597、5.836和27.786,P值分别为<0.001、0.016和<0.001)。Cox回归模型显示,TM与PAD4联合评估可有效预测AIS患者随访期内的缺血事件复发风险(HR=1.397)。结论NVAF并发AIS患者TM和PAD4水平显著增高,并随病情发展趋势而改变,通过对上述两项指标的动态监测和联合评估,可有效预警AIS患者缺血事件复发的风险,为临床早期识别和及时干预提供依据。

二乙基乙酰苯胺亚氨二醋酸三维显像在肝切除术前肝功能评估中的应用

目的应用锝-99m标记的二乙基乙酰苯胺亚氨二醋酸(99mTc-EHIDA)肝脏显像结合单光子发射型计算机断层显像(SPECT)扫描,为临床肝切除术前建立三维立体肝功能评估方法。方法选取我科肝占位患者16例,分为无肝硬化组(7例)和肝硬化组(9例),于术前2 d和术后5 d进行SPECT扫描,同时行血清学肝功能检查。在SPECT扫描图上画出心、肝感兴趣区,计算术前EHIDA在肝区达到峰值的时间(Tpeak)、术前、术后的5 min心肝相关指数(HLI5)、清除指数(HH15)、受体指数(LHL15)。应用剩余肝功能放射性指数,计算相应的切除术后预测值。结果无肝硬化组与肝硬化组相比,Tpeak差异无显著性;而HLI5、HH15、LHL15差异具有显著性(P=0.033,P=0.001,P=0.005)。术前HLI5、LHL15与血清总蛋白(TP)、前白蛋白(PA)存在显著相关性(P=0.003,P=0.015,P=0.022,P=0.038)。而术后HLI5、LHL15仅与PA存在相关性(P=0.037,P=0.042)。术前预测的术后HLI5(HLI5p)、术后LHL15(LHL15p)与术后实际测得的HLI5、LHL15存在显著相关性(r=0.675,P=0.016;r=0.629,P=0.028)。结论应用99mTc-EHIDA肝脏显像结合SPECT扫描在临床上进行肝功能的三维立体评估,为进一步建立肝脏可切除范围的风险评估体系奠定一定的基础。

亚氨二乙酸型复合材料IDAA-PGMA/SiO_2对重金属及稀土离子的吸附行为与吸附热力学

将甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝于硅胶微粒表面,制得了接枝微粒PGMA/SiO2;使亚氨二乙酸(IDAA)与接枝PGMA的环氧基团发生开环反应,从而将亚氨二乙酸基团引入接枝微粒表面,制得了复合螯合微粒材料IDAA-PGMA/SiO2.本文研究了IDAA-PGMA/SiO2对重金属及稀土离子的螯合吸附行为,深入地研究了吸附机理与吸附热力学.研究结果表明:凭借亚氨二乙酸基团与重金属离子之间的静电作用与配位螯合作用的协同,复合微粒材料IDAA-PGMA/SiO2对重金属离子可产生强的螯合吸附作用,尤其对Pb2+离子表现出很强的螯合吸附能力,常温下吸附容量可达0.235g·g-1;IDAA-PGMA/SiO2对重金属离子的吸附过程为一放热过程,且为焓驱动的过程,升高温度,吸附容量降低;对稀土离子的吸附过程则为熵驱动的过程;在可抑制金属离子水解的pH范围内,介质的pH值越高,IDAA-PGMA/SiO2的螯合吸附能力越强;IDAA-PGMA/SiO2对重金属离子的吸附容量远高于对稀土离子的吸附容量.

基于PEI的亚氨乙酸型复合螯合吸附材料IAA-PEI-SiO_2的制备及其螯合吸附特性

以偶联剂γ-氯丙基三甲氧基硅烷为媒介,将聚胺大分子聚乙烯亚胺(PEI)以偶合接枝的方式,接枝于微米级硅胶微粒表面,制得接枝微粒PEI-SiO2,然后以氯乙酸为试剂,通过亲核取代反应将亚氨乙酸(IAA)基团键合于硅胶微粒表面,形成了具有多齿配基的亚氨乙酸型螯合微粒IAA-PEI-SiO2。重点研究了螯合微粒IAA-PEI-SiO2的制备过程,初步探讨了其对重金属离子及稀土离子的螯合吸附特性。研究结果表明:接枝微粒PEI-SiO2与氯乙酸之间的亲核取代反应遵循SN2反应历程;反应温度较高或缚酸剂用量过多时,会促进氯乙酸的水解,减缓亲核取代反应,使亚氨乙酸的键合率下降;适宜的反应温度为60℃,适宜的缚酸剂NaHCO3用量是使体系中NaHCO3与氯乙酸物质的量之比为1∶1。与接枝微粒PEI-SiO2相比,螯合微粒IAA-PEI-SiO2对Cu2+及Eu3+的吸附容量大幅度提升,显示出强螯合吸附特性。

青海地区回族类风湿关节炎患者抗环瓜氨酸抗体与血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶基因多态性关系的研究

目的探讨青海地区回族类风湿关节炎(RA)患者抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体水平与血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)基因多态性的关系,及两者在RA发病机制中的意义。方法选择我院风湿科2009年6月—2011年11月住院及门诊回族RA患者63例为病例组,选择同期我院回族健康体检者54例为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测两组受试者抗CCP抗体水平,魏氏法检测红细胞沉降率(ESR),免疫散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)和类风湿因子(RF)水平。根据GenBank号NT_004610序列查找PADI4基因多态性位点,即PADI4-94、PADI4-104、PADI4-92,其基因多态性分型采用聚合酶链反应(PCR)产物扩增后收集DNA片段进行测序。采用RA疾病活动评分(DAS28评分)评价病例组患者疾病活动性,HAQ生活质量问卷(HAQ评分)评价其生活质量。结果 (1)两组ESR、CRP水平、抗CCP抗体水平及RF水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)病例组患者DAS28评分平均为(4.89±0.17)分,HAQ评分平均为(8.07±1.03)分。(3)PADI4-94位点的基因型为A/A、G/G、A/G,PADI4-104位点为A/A、G/G、A/G,PADI4-92位点为C/C、G/G、G/C。3个位点不同基因型RA患者抗CCP水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(4)Pearson相关分析显示,RA患者抗CCP抗体水平与DAS28评分(r=0.25,P=0.018)、HAQ评分(r=0.22,P=0.04)及ESR(r=0.81,P=0.001)均呈正相关,与CRP、RF无相关性。结论青海地区回族RA患者血清抗CCP抗体水平高于回族健康人群,并与DAS28评分、HAQ评分及ESR呈正相关,提示抗CCP抗体可作为评价回族RA患者疾病活动度的指标,PADI4基因多态性可能与抗CCP抗体形成无相关性。

从二氧化碳和环氧丙烷及异氰酸酯合成聚亚氨碳酸酯

研究了二氧化碳，环氧丙烷和异氰酸酯的共聚合反应．并考察了反应条件，异氰酸酯加入量对共聚产率及共聚物的特性粘数、分子量分布及热稳定性的影响．实验发现，引入异氰酸酯具有扩链作用，而引入二异氨酸酯则具有明显的文化交联作用．由共聚物水解试验和光谱研究结果表明，共聚反应生成的是聚亚氨碳酸酯，而不是聚氨基甲酸酯．这种聚亚氨碳酸酯比聚碳酸亚丙酯具有较高的热稳定性．

基于PGMA的亚氨乙酸型复合螯合吸附材料IDAA-PGMA-SiO_2的制备

凭借偶联剂γ-(甲基丙烯酰氧)丙基三甲氧基硅烷的媒介作用,在溶液聚合体系中,采用"接出"法将单体甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)接枝于微米级硅胶微粒表面,制得了接枝微粒PGMA-SiO2,使亚氨二乙酸(IDAA)与接枝PGMA的环氧基团发生开环反应,将IDAA基团引入接枝微粒表面,制得了复合螯合微粒IDAA-PGMA-SiO2。重点考察了接枝聚合的影响因素,并初步考察了螯合微粒IDAA-PGMA-SiO2对稀土离子的吸附行为。研究结果表明:已接枝到硅胶表面的聚合物层,会对后续的接枝聚合产生阻隔作用。温度及引发剂用量等因素显著影响接枝度,在适宜条件下可制得接枝度为17.48 g/100 g的接枝微粒PGMA-SiO2。在配位螯合作用下,接枝微粒对稀土Eu3+呈现强吸附能力。

猪链球菌国内分离株精氨酸脱亚氨酶的克隆表达及其活性分析

根据GenBank上精氨酸脱亚氨酶(arginine deiminase,AD)序列AF546864,设计并合成一对引物,用PCR检测29株猪链球菌和7株马链球菌兽疫亚种的ad基因,发现29株猪链球菌均能检出此基因,而7株马链球菌兽疫亚种均未检出。扩增出的猪链球菌2型(SS2)强毒株HA9801的ad基因片段,定向克隆至pBAD/Myc-HisC严紧型质粒并转化TOP10。阳性重组菌经L-阿拉伯糖诱导,表达出分子量约47000Da的重组蛋白。经镍柱亲和层析,获得纯化的重组酶。活性分析显示,该酶具有巯基酶和金属酶的特征,其最适反应温度为37℃,最适pH值为6.5。Western blot分析显示,该酶能与SS2-HA9801全菌制备的兔抗血清发生特异性反应,表明其具有一定的免疫原性。检测该酶有助于进一步分析猪链球菌可能的毒力因子。

类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因的相关性分析

目的探讨类风湿关节炎患者滑膜抗环瓜氨酸肽（CCP）表位表达与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（PADI4）基因的相关性。方法2013年2月～2015年选择在湖北医药学院附属东风医院风湿免疫科住院的类风湿关节炎患者110例作为观察组，同期选择在该院进行体检的健康者110例作为对照组，两组都进行滑膜抗 CCP表位表达阳性率检测与 PADI4基因表达检测，同时进行相关性分析。结果观察组与对照组的滑膜抗 CCP表位表达阳性率分别为70.9％和9.1％，观察组明显高于对照组（χ2＝23.289，P＜0.05）。观察组 PADI4-104基因型的表达频率与对照组对比差异有统计学意义（χ2＝2.984，P＜0.05），多为 G／G表达，而对照组多为C／G表达。Pearson相关性分析显示在观察组中，滑膜抗 CCP表位阳性表达情况与PADI4-104基因型表达频率之间存在明显相关性（r＝0.344，P＜0.05）；logistic逐步回归分析显示 PADI4-104基因型表达频率是影响滑膜抗CCP表位表达的主要因素（P＜0.05）。结论类风湿关节炎患者的滑膜抗 CCP表位表达阳性率明显增加，同时也存在PADI4基因多态性紊乱情况，两者也存在明显的相关性，从而影响类风湿关节炎的发病状况。

高原地区汉、藏、回族人群类风湿关节炎与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因多态性的相关性

目的探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)基因4中-92位点(PADI4-92)、94位点(PADI4-94)和104位点(PADI4-104)的单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)易感性的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、测序方法鉴定90例RA患者(汉族、藏族、回族)和90名健康体检者(汉族、藏族、回族)基因及基因型,计算其频率,用χ2检验统计分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA外周血抗CCP抗体水平。结果PADI4-92、PADI4-94及PADI4-104位点存在A和G、C三种等位基因,A/A、C/C、G/G、A/G,G/C五种基因型,汉族、回族、藏族RA及健康对照组PADI4-94的A/A、G/G和A/G基因型,两组差异无统计学意义(χ2=1.105,P=0.949;χ2=1.105,P=0.949;χ2=0.657,P=0.720);PADI4-104,表现为A/A、G/G和A/G基因型两组差异无统计学意义(χ2=0.617,P=0.734;χ2=0.617,P=0.734;χ2=1.198,P=0.549);PADI4-92,表现为C/C、G/G和G/C基因型,两组差异无统计学意义(χ2=1.105,P=0.949;χ2=1.105,P=0.949;χ2=0.234,P=0.889)。RA组PADI4-94/PADI4-104/PADI4-92各基因型间红细胞沉降率(ESR),RA疾病活动关节评分28(DAS28)评分,生活质量评分,抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论汉族、藏族、回族人群PADI4-92、PADI4-94和PADI4-104位点存在多态性,但其与RA的易感性无关。

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因多态性与汉族人群类风湿关节炎的相关性

目的研究肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PADI4)基因多态性与类风湿关节炎(RA)的相关性。方法应用聚合酶链反应结合连接酶检测反应技术检测92例类风湿关节炎患者和116例正常人的 PADI4基因型。结果 PADI4_94和 PAD14_104位点 A/G 杂合子频率(P=0.012,P=0.030)和 A 等位基因频率(P=0.040,P=0.043)在 RA 组显著高于对照组。结论 PADI4_94、PADI4_104位点基因多态性与 RA 相关。

牙龈卟啉单胞菌肽酰精氨酸脱亚氨酶的克隆与表达

目的:构建牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)克隆表达重组子,转化于大肠杆菌BL21中,并在最适宜条件下诱导表达。方法:以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277全基因组DNA为模板,利用PCR技术获得目的基因PAD,将扩增得到的PAD基因定向插入线性克隆载体PMD18-T Vector中,得到克隆重组子PMD18-T-PAD。经PCR和双酶切鉴定正确的克隆重组子PMD18-T-PAD与表达载体PET-28a经Xhol和Ncol双酶切后,在一定连接体系下,连接构建表达质粒PET-28a-PAD。鉴定正确的原核重组表达质粒PET-28a-PAD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)及时间诱导下表达融合蛋白。以抗His Tag单克隆抗体为一抗,Western免疫印迹鉴定。结果:DNA测序结果表明,PAD与NCBI核酸数据库中收录的PAD序列同源性达100%;37℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,250r/min振摇培养6h的诱导条件下,PAD可高效表达。结论:本实验成功构建了PAD的克隆表达重组子,并在大肠杆菌中表达了PAD蛋白,为进一步研究PAD的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础。

猪链球菌2型分离株精氨酸脱亚氨酸酶遗传变异分析

为了分析猪链球菌2型(SS2)发病原因、流行趋势,为预防和控制猪链球菌2型提供理论依据,根据GenBank发表的猪链球菌精氨酸脱亚氨酸酶(arginine dei minase,ADS)基因序列,设计并合成引物,采用RT-PCR技术,对阳性病料进行扩增,回收扩增产物并将其克隆入pMD18-T载体中,提取质粒测序。应用DNAStar软件分析核苷酸序列的同源性,并绘制系统进化树。结果显示,分离株HN1-HN8核苷酸的同源性为94.9%～100%,来自同一地区的分离株HN5和HN6同源性为100%,而河南分离株与GenBank发表的SX332同源性为95.9%～99.2%。因此,同一地域分离株间ADS基因序列同源性较高且亲缘关系较近,不同地域则较远。

精氨酸脱亚氨酶的表达、纯化和活性研究

目的:建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线。方法:人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶(arginine deiminase,ADI)的基因,构建pBV220-ADI原核表达载体,转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白,离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白。采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性。结果:成功构建了原核表达载体pBV220-ADI,基因测序正确。转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株,目标蛋白以包涵体形式存在于胞浆内,表达水平超过全菌体蛋白的35%。采用盐酸胍溶解包涵体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性。顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化,最终获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明,纯化的ADI比活性为80IU/mg。结论:成功构建了ADI的高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化方法。

苯甲亚氨酸乙酯及N—乙氧基羰基亚甲基苯甲亚氨酯乙酯的~1H和^(13)C NMR的研究

本文测定了苯甲亚氨酸乙酯(Ⅰ)和N-乙氧基羰基亚甲基苯甲亚氨酸乙酯(Ⅱ)的~1H和^(13)C NMR谱,归属了共振谱线,得到了这两类化合物的官能团在苯衍生物中的经验增量,讨论了化学位移与Hammett常数的相关性.

氨基酸合成方法研究(Ⅲ)——相转移催化下N-(乙氧基羰基亚甲基)亚氨酸酯的烷基化反应

在氨基酸的合成方法中,利用甘氨酸衍生物合成高级氨基酸,是引人注目的研究课题。我们考虑到N-(乙氧基羰基亚甲基)苯甲亚氨酸乙酯1a和N-(乙氧基羰基亚甲基)乙亚氨酸乙酯1b可以方便地由腈和甘氨酸酯制备,特别是由乙腈制备的1b具有原料价廉易得等优点,为此研究了固-液相转移催化条件下,1a和1b的烷基化反应,合成了一系列碳链增长的α-氨基酸。 烷基化反应在K_2CO_3-或KOH-溴化四正丁铵(TBAB)体系中进行。

固/液相转移催化亚氨二羧酸二乙酯的N-烷基化反应

本文报道亚氨二羧酸二乙酯(1)在固/液相转移催化下,直接进行N-烷基化反应的方法。作用物(1)在DMF中经碳酸钾处理,然后使之与种种烷基化试剂,如:氯乙酸甲酯、氯乙腈、1,3二溴丙烷,+x,x′二氯对二甲苯等,按方法A,B或C反应。生成的N-烷基化产物均经过元素分析和光谱鉴定。

肽酰精氨酸脱亚氨酶催化趋化因子瓜氨酸化

蛋白质分子内精氨酸残基瓜氨酸化是蛋白质翻译后修饰作用之一,肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)催化趋化因子发生瓜氨酸化反应,改变趋化因子的生物学活性,显示出PAD在体内免疫系统中的调节作用。

磺酸基邻苯二甲酰亚氨甲基酞菁铜的合成

酞菁类化合物能改善塑料制品的性能 ,提高其热稳定性。以苯酐、脲为原料进行固相反应合成了邻苯二甲酰亚胺 (N) ,进而与甲醛反应生成 N -羟甲基邻苯二甲酰亚胺 (H) ,然后经过硫酸和发烟硫酸磺化 ,生成了磺酸基邻苯二甲酰亚氨甲基酞菁酮 (S)。对于所合成的产物进行了结构认证 ,对合成条件也进行了优化。固相反应合成 N条件容易控制 ,节省了溶剂 ,避免了溶剂法带来的副反应以及后处理和副产品的分离 ,产率达到了 95 %。用甲醛法合成 H中 ,发现 p H为重要的参数 ,产率为 96% ,条件温和、稳定。合成 S时 。