贵州都匀牛带绦虫亚洲亚种的调查和虫体内元素及氨基酸的检测

目的 了解贵州省都匀市牛带绦虫病的流行因素及病原虫种 ,并对成虫体内氨基酸组分及元素进行检测。 方法 ①对该市河阳乡的米秀村等 6个村寨进行牛带绦虫病流行病学调查 ,对 70名现症患者 (男性 67,女性 3 )的感染原因、临床症状进行了解分析并作驱虫治疗。②对驱出的成虫作形态学鉴定和测量。③采用氨基酸分析仪、原子吸收光谱仪及分子荧光仪等分别测定成虫体内游离氨基酸组分及各种元素的含量。 结果 ①当地牛带绦虫感染主要是因群众喜吃生的或不熟的猪肝引起 ,患者的临床表现以排节片、肛门瘙痒、腹痛、腹泻等为主。 70位有临床症状的成人中 ,有 2 5人驱出成虫 (男性 2 4人 ,女性 1人 )。②成虫外形与牛带绦虫极其相似 ,头节上无顶突及小钩 ;但虫体较短 ,大小在 0 .61～ 2 .5 8m之间 ,节片较薄而且数量少。③检测了成虫的 16种氨基酸及 12种元素。 结论 贵州省都匀有牛带绦虫病局部流行 ,患者的临床表现与传统的牛带绦虫病相似。根据感染原因和对虫体的测量结果 ,认为病原体应当是牛带绦虫亚洲亚种 (Taeniasaginataasiatica)。

牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶基因的生物信息学分析

利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASY)中有关基因和蛋白的序列和结构信息分析工具,结合其他生物信息学分析软件包进行分析。牛带绦虫亚洲亚种苹果酸脱氢酶(MDH)基因是全长基因,长度为1212bp,编码区为30～1028bp,编码332个氨基酸,无跨膜区,具有多个磷酸化位点,蛋白理化性质稳定;预测3个主要的抗原表位(aa95～aa100、aa322～aa327和aa117～aa122)在MDH空间结构上相距较远的分子表面,aa117～aa122属于带绦虫共有的线性抗原表位。预测胞桨型苹果酸脱氢酶是一个潜在的诊断抗原。

牛带绦虫亚洲亚种乳酸脱氢酶基因的克隆表达及免疫原性分析

目的对牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因(LDH)进行克隆、表达和免疫原性分析。方法将牛带绦虫亚洲亚种成虫TaLDH克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH用蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均显示重组质粒pET-30a(+)-TaLDH构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白,浓度为0.9mg/ml。Western blotting分析结果显示,重组蛋白pET-30a(+)-TaLDH能识别感染牛带绦虫亚洲亚种的猪血清和患者血清,在相对分子质量(Mr)35000处有一清晰条带,表明其具有免疫反应性。结论牛带绦虫亚洲亚种成虫乳酸脱氢酶基因可在原核表达系统中获得具有免疫学活性的高效表达。

贵州牛带绦虫亚洲亚种实验感染家猪的研究

目的 观察贵州省牛带绦虫亚洲亚种囊尾蚴在猪体内的发育情况。 方法 用牛带绦虫亚洲亚种孕节直接灌喂当地圈养的 14d龄健康乳猪 8头 ,并以健康乳猪 4头作对照。于感染后 40、5 0、60和 75d分别剖检 ,观察猪体内囊尾蚴的分布、大小、形态及成熟情况。 结果 从感染后 40d起 ,在 6头猪的肝脏表面和实质内共检获 42 1个囊尾蚴 ,多分布在肝实质内 ,其大小为 1.3 4～ 2 .78mm× 1.2 2～ 2 .3 1mm。其余部位未找到囊尾蚴。感染后 40d和 5 0d ,囊尾蚴经胆汁孵育 ,头节翻出率分别为 78.3 %和 93 .4%。感染后 5 0d开始发现钙化的囊尾蚴。囊尾蚴活体观察可见头节上 4个吸盘和活动的顶突。压片染色镜检 ,头节有 4个吸盘和顶突 ,顶突周围发现不完整的两圈点状结构。 结论 根据囊尾蚴的分布、大小、发育时间及形态特征 ,进一步认定贵州省都匀市的带绦虫为牛带绦虫亚洲亚种。家猪是其可能的中间宿主。

贵州都匀牛带绦虫亚洲亚种的流行病学调查

目的 :了解贵州省都匀市河阳乡牛带绦虫病的流行因素及病原虫种 ,为防治措施的制定提供依据。方法 :对该市河阳乡米秀村等 7个村寨进行牛带绦虫病流行病学调查 ,对 1 0 6例现症病人 (男 95例 ,女 1 1例 )的感染原因、临床症状进行分析并作驱虫治疗 ;对驱出的成虫作形态学鉴定和测量。结果 :当地牛带绦虫感染主要是因群众喜吃生的或不熟的猪肝引起 ,患者的临床表现以排节片、肛门搔痒、腹痛、腹泻等为主 ;1 0 6例有临床症状的成人中 ,有 37例驱出成虫 (男 35例 ,女 2例 ) ;成虫外形与牛带绦虫极其相似 ,头节上无顶突及小钩。虫体较短 ,大小在 0 6 1～ 4 1 9m。节片较薄而且数量少 (链体节片数 :2 32～ 82 8) ,孕节子宫分支数每侧为 1 7～ 2 8支。结论 :贵州省都匀有牛带绦虫病局部流行 。

牛带绦虫亚洲亚种感染乳猪肝脏的病理学和组织化学观察

目的：观察牛带绦虫亚洲亚种感染乳猪后肝脏的病理学和组织化学改变。方法：以牛带绦虫亚洲亚种虫卵感染乳猪，封闭饲养；采用HE染色及组织化学染色观察不同时期肝组织的病理学变化并测定脂肪、糖原、蛋白质的含量，定量图像分析和SPSS统计学处理。结果：感染组感染4d时，肝脏开始有炎性细胞浸润；10—20d时，炎症反应加剧，Kupffer细胞增生，肝细胞水肿、部分气球样变，肝细胞有点片状坏死，中央静脉、肝血窦扩张和淤血；40-60d时，肝脏肉芽肿形成，肝脏呈早期肝硬化改变；70-80d时，部分肝脏呈肝硬化改变，胆管增生；感染不同时期均有不同程度脂肪含量的增多，糖原、蛋白质含量的减少，与正常对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）；对照组乳猪无感染。结论：乳猪是牛带绦虫亚洲亚种的适宜中间宿主，牛带绦虫亚洲亚种感染可引起肝组织严重的病理学损害和组织化学改变。

松鼠单蚤亚洲亚种三龄幼虫形态描述

对松鼠单蚤亚洲亚种 (Monopsyllus sciurorum asiaticus)三龄幼虫的形态进行描述。大颚 8齿 ,前头刚毛 6对 ,后头刚毛 6对。自第一胸节至第 9腹节主刚毛列毛数依次为 8(2 )、8(2 )、8(2 )、10 (2 )、10 (2 )、10 (2 )、10 (2 )、10 (2 )、10 (2 )、10(2 )、10 (2 )和 12根。第 10腹节肛梳 2列 ,前列 8～ 12根 ,后列 14根。肛柱宽短 ,末端钝圆 ,基部有 8或 9根支柱毛。与同属的不等单蚤 (Monopsyllusanisus)幼虫形态比较略有差别。

亚洲黑熊四川亚种(Ursus thibetanus mupinensis)线粒体ATP合酶和亚基基因克隆及序列分析

根据已报道的部分哺乳动物线粒体ATP合酶F0亚基的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种(Ursus thibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中成功克隆了线粒体ATP合酶F0亚基8(ATP8)和亚基6(ATP6)的序列,并对其进行了初步分析。结果表明:PCR扩增产物的总长度为942 bp,其中842 bp为四川黑熊ATP8和ATP6基因的编码区。ATP8和ATP6基因存在一段长43 bp的重叠区域。ATP8基因长204 bp,编码67个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为7.9 KD,等电点为10.35;ATP6基因长682 bp,编码226个氨基酸残基的蛋白质,其蛋白分子质量为24.8 KD,等电点为10.63。四川黑熊线粒体ATP合酶F0亚基8和亚基6与其他已报道的部分哺乳动物具有很高的同源性。以基因序列为数据构建的进化树表明四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近。本研究为在分子水平上探究黑熊线粒体基因组的遗传特点,探究物种进化关系和物种多样性提供了科学参考。

亚洲黑熊四川亚种Ursus thibetanus mupinensis线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ基因的克隆与初步分析

根据已报道的部分哺乳动物线粒体细胞色素C氧化酶(Cytochrome C Oxidase)亚基Ⅲ基因(mtCOXⅢ)的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种(以下简称四川黑熊,Ursus thibetanus mupinensis)的肌肉组织总DNA中成功克隆了mtCOXⅢ基因的编码序列,并对其进行了初步分析.结果表明:四川黑熊mtCOXⅢ基因序列全长784 bp,ORF是783 bp,编码261个氨基酸的蛋白质,该蛋白的等电点为6.47,分子量为29840.6 Da.四川黑熊的mtCOXⅢ与已报道的部分哺乳动物的mtCOXⅢ基因具有很高的同源性.进一步分析发现,四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅲ功能位点的位置、种类和数量均与已报道的部分哺乳动物具有很高的相似性.

亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH脱氢酶亚基5和亚基6基因的克隆与初步分析

[目的]克隆与分析亚洲黑熊四川亚种线粒体NADH的脱氢酶亚基5和亚基6基因(ND5和ND6)。[方法]根据已报道的部分熊科动物ND5和ND6基因序列的相关信息设计引物,运用PCR技术,首次从亚洲黑熊四川亚种的肌肉组织总DNA中成功克隆了ND5和ND6基因的编码序列,分析了其序列特征,并与已报道的9种熊科动物进行比较分析。[结果]该克隆片段包括ND5和ND6两个基因共2456bp,共编码781个氨基酸,与9种熊科动物的ND5和ND6具有很高的同源性;该克隆片段ND5和ND6的蛋白分子量分别为68.2621和19.0386kDa,等电点分别为9.19和4.25,与9种熊科动物的均十分接近。[结论]四川黑熊与9种熊科动物的ND5和ND6基因及其编码蛋白具有很高的相似性,在功能上具有一致性,尤其与东北黑熊在功能上具有高度一致性。

驱出14条亚洲带绦虫的病例报告

作者于2007年7月在云南省香格里拉县虎跳峡镇宝山村调查带绦虫病，在77人中有1例查出14条亚洲带绦虫（牛带绦虫亚洲亚种），报告如下。

亚洲带绦虫实验感染家猪的病理学观察

目的:观察牛带绦虫感染家猪脏器组织的病理学改变。方法:采用贵州都匀市的牛带绦虫孕节灌喂14d龄健康乳猪8头,以4头健康乳猪作对照,隔离喂养。分别于感染后40、50、60、75d剖解, 切取病变病变组织制片、HE染色,作病理组织学检查。结果:对照组无感染,实验组6头猪在肝脏内发现大量囊尾蚴,部分肝小叶结构基本正常,中央静脉、血窦扩张充血、肝细胞水样变性、小灶性坏死。门管区肉芽肿形成,大量纤维组织增生,并向肝小叶内延伸。结论:牛带绦虫囊尾蚴寄生肝脏,导致肝组织不同程度的病理变化,特别是肉芽组织形成及肝纤维化。

都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫实验感染牛和猪的比较研究

目的:观察贵州省都匀亚洲带绦虫与从江牛带绦虫在牛和猪体内的发育情况。方法:用都匀牛带绦虫孕节和从江牛带绦虫孕节分别灌喂5-33d龄健康乳牛2头和3头、17-23d龄健康乳猪各2头。于感染后25-85d分别剖解,观察牛和猪体内囊尾蚴的分布、大小、形态及成熟情况。结果:在感染都匀牛带绦虫2、85d的2头乳牛肝脏共检获28个囊尾蚴,其大小为(1.16-1.19/1.03-1.50)mm。在感染都匀牛带绦虫50、62d的2头乳猪肝脏共检获67个囊尾蚴,其大小为(1.28-2.84/1.28-2.57) mm。两组囊尾蚴仅分布在肝脏且形态特征相同,活体观察成熟囊尾蚴均可见到头节上4个吸盘和伸缩活动的顶突。压片染色镜检:31%囊尾蚴的顶突略凸,69%的顶突略凹,56%的顶突周围有两圈退化的小钩;在感染从江牛带绦虫25、35、67d的3头乳牛体内共检获2 847个囊尾蚴,为全身分布,其大小为(0.96-6.52/0.66-4.39)mm。在感染从江牛带绦虫50、67d的2头乳猪体内共检出106个囊尾蚴, 仅分布于肝脏,其大小为(1.08-2.68/0.96-2.68)mm。从江牛带绦虫在牛和猪体内的囊尾蚴,活体观察及压片染色镜检,其原头节均未发现顶突和小钩。结论:都匀牛带绦虫为牛带绦虫亚洲亚种,在牛和猪体内囊尾蚴仅分布于肝脏,其囊尾蚴常具有退化小钩。从江牛带绦虫为传统牛带绦虫,在牛体内囊尾蚴为全身分?

我国4省区5地牛带绦虫rDNA-ITS2序列分析

目的采用PCR克隆测序方法对贵州都匀、从江,云南大理及新疆乌什4地牛带绦虫标本进行研究,与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种地理株作比较,为贵州株、云南株和新疆株的鉴别提供分子生物学证据,并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种的分类学地位。方法取贵州都匀株(DY1)、贵州从江株(CJ1),云南大理株(DL1),新疆乌什株(XJ1)和台湾桃园株(TW1)成虫节片,分别抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS2区段,克隆rDNA-ITS2区段后作序列分析,构建不同地理株系统发育树。结果根据ITS2序列构建的系统发育树显示:系统发育树分为3支,XJ1占据上方1支;CJ1占据中间1支;而TW1、DY1和DL1组成下方1支。结论1.DY1、DL1与TW1属于牛带绦虫亚洲亚种,CJ1、XJ1属于传统牛带绦虫;2.rDNA-ITS2序列分析可用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学之研究。

用mtCO技术测定云南及贵州四地区的牛带绦虫

目的 用 mt CO 技术鉴定云南省大理及贵州省都匀、从江等地所发现的是牛带绦虫或牛带绦虫亚洲亚种。 方法 采集成虫样本 ,抽提 DNA,PCR扩增线粒体细胞色素 C氧化酶 (mt CO )部分基因片段并测序 ,经PHYL IP软件包处理 ,计算遗传距离并构建系统发育树状图。 结果 云南省兰坪、大理和贵州省都匀的标本 mt CO 基因片段序列与已知牛带绦虫亚洲亚种的序列相同。贵州从江的标本 mt CO 基因片段序列与已知牛带绦虫的序列相同。两组基因片段的同源性达 97.4 4 % ,氨基酸序列同源性达 99.16 %。系统发育树状图显示 ,牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫最为接近 ,远离猪带绦虫及其他绦虫。 结论 云南省兰坪、大理及贵州省都匀存在牛带绦虫亚洲亚种 ,贵州省从江发现的虫种为牛带绦虫。

贵州都匀、从江两地牛带绦虫感染家猪的比较研究

目的通过两地牛带绦虫感染家猪,了解贵州省都匀是否存在牛带绦虫亚洲亚种。方法对都匀、从江两地绦虫病患者进行驱虫,从孕节分离虫卵感染家猪,收集囊尾蚴并观察其特征。结果两地牛带绦虫均可在家猪体内发育为囊尾蚴,感染率分别为87.5%和62.5%。囊尾蚴回收率分别为0.266%和0.028%,囊尾蚴只分布在肝脏,并以肝实质为多见。都匀囊尾蚴比从江的稍大,其外壁有小的疣状物,头节可见伸缩的顶突和两圈逗点样结构,但无明显小钩。结论①家猪可作为两地牛带绦虫的中间宿主。②形态学研究显示都匀牛带绦虫是牛带绦虫亚洲亚种,而从江牛带绦虫是传统牛带绦虫。③贵州省都匀存在牛带绦虫亚洲亚种的局部流行病区。

我国西部4地牛带绦虫成虫的形态学观察

目的比较观察贵州省都匀、从江、新疆乌什和西藏拉萨等4地牛带绦虫成虫的形态学特征。方法分别测量采自都匀(42条)、从江(41条)、乌什(7条)和拉萨(18条)等4地完整牛带绦虫成虫的长度,计数链体节片数,并采用整体染色封制法观察头节、成节和孕节的形态结构,进行显微测量、计数和摄影。结果都匀的成虫平均长为(1.81±0.69)m,显著短于从江的(3.84±1.32)m、乌什的(2.76±0.86)m和拉萨的(3.72±1.12)m成虫(P<0.05)。都匀成虫的链体平均节片数为(574.64±189.33),也显著少于从江的(913.84±317.41)、乌什的(971.29±168.30)和拉萨的(940.38±368.26)(P<0.05)。都匀牛带绦虫成节的排泄管间距与卵黄腺长度比值平均为(1.71±0.13),明显小于从江的(2.23±0.06)、乌什的(2.03±0.21)和拉萨的(2.31±0.15)比值(P<0.05)。染色观察都匀牛带绦虫10个头节中有3个明显可见发育不良的顶突。结论都匀的牛带绦虫成虫形态特征与牛带绦虫亚洲亚种相似,而从江、乌什和拉萨等3地的牛带绦虫成虫形态特征与牛带绦虫指名亚种相似。

我国西部6省9地牛带绦虫rDNA-ITS1序列测定及分析

目的利用分子生物学技术鉴定我国6省9地是否存在牛带绦虫亚洲亚种。方法取成虫标本孕节2-3片,酚氯仿法提取DNA,PCR法扩增rDNA-ITS1片段,并纯化、克隆此片段后作序列测定。利用BioEdit,clustalx,PHYLIP,Treeview软件处理后构建系统发育树。结果广西融水（RS）、宾阳（BY）牛带绦虫标本与贵州都匀（DY）,云南大理（DL）牛带绦虫标本序列基本一致,同源性为98%-99%;新疆乌什（WS）、西藏拉萨（LS）、内蒙古（NM）、云南西双版纳（BN）牛带绦虫标本与贵州从江（CJ）牛带绦虫标本序列基本一致,同源性为98%-99%。系统发育树显示：RS、BY、DL和DY标本遗传距离较近;WS、LS、CJ、NM和BN标本遗传距离较近。而两组间遗传距离较远。结论RS、BY、DL和DY四地存在牛带绦虫亚洲亚种;WS、LS、CJ、NM和BN五地存在传统牛带绦虫。

我国4省9株牛带绦虫RAPD分子鉴别分析

目的分别对4省9株牛带绦虫标本进行分子鉴别。方法分别取台湾桃园株(TW1),贵州都匀株(DY1、DY2)、贵州从江株(CJ1、CJ2、CJ3、CJ4)、云南大理株(DL1)和新疆乌什株(XJ1)成虫节片,提取DNA,以13条随机引物进行PCR扩增,用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,并构建不同地理株系统发育树。结果13条引物共扩增RAPD片段331个(以相同bp数为依据)。单条引物扩增的RAPD片段数在3～28个之间,13条引物平均扩增RAPD片段在6.11～24.56个,平均14.15个;9个不同地理株牛带绦虫平均RAPD片段在9.85～16.62,平均14.08个。系统发育树显示:9个不同地理株牛带绦虫分为两支,DY1、DY2、DL1和TW1聚为一支,属于牛带绦虫亚洲亚种;CJ1、CJ2、CJ3、CJ4和XJ1聚为另一支,属牛带绦虫指名亚种。结论我国4省9株牛带绦虫分别属于牛带绦虫亚洲亚种和牛带绦虫指名亚种。RAPD分析可用于区分牛带绦虫亚洲亚种与牛带绦虫指名亚种的分类学参考。

云贵两省三地带绦虫的分子鉴定——核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)限制性酶切片段长度多态性(RFLP)分析

目的用PCR-RFLP方法对rDNA-ITS1片段进行分析,以进一步明确云贵地区是否存在牛带绦虫亚洲亚种,并建立一种快速鉴定方法。方法取贵州都匀株(DY)、贵州从江株(CJ)、云南大理株(DL)带绦虫及台湾株(TW)成虫标本,剪取孕节,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1片段,分别用4种限制性内切酶MspI、CfoI、AluI、RsaI对扩增片段作酶切分析。结果PCR产物经AluI、RsaI酶切后,TW、DL、DY和CJ株RFLP图谱一致;经MspI、CfoI酶切后,TW、DL和DY株RFLP图谱一致,CJ株显著不同。结论1)DL和DY株与TW株同属牛带绦虫亚洲亚种;而CJ株是传统牛带绦虫;2)rDNA-ITS1的PCR-RFLP分析方法简便,可以用于带绦虫的分类学研究。