柑橘黑斑病新病原亚洲柑橘叶点霉生物学特性

亚洲柑橘叶点霉Phyllosticta citriasiana是近年发现的侵染柚类柑橘的黑斑病病原菌新种,其生物学特性尚不明确,为此测定了培养基种类、光照、温度、pH值等培养条件对该菌菌丝及分生孢子的影响。结果表明：该病菌在燕麦琼脂培养基和含柚叶汁液的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上生长较快,黑暗不利于病菌生长,菌丝适宜生长温度为25-30℃,菌丝最适生长pH值是6-7,菌落在碱性的燕麦培养基上生长有黄色晕圈,试验研究中分生孢子萌发率较低,菌丝致死温度为55℃,分生孢子致死温度为55℃。

琯溪蜜柚黑斑病侵染循环及防治适期研究

琯溪蜜柚黑斑病(pomelo black spot)的病原菌为亚洲柑橘叶点霉Phyllosticta citriasiana。田间系统观察和病原菌侵染试验结果表明,蜜柚黑斑病是一种潜伏侵染病害,上年度被侵染的带菌叶片为次年病害的侵染源,蜜柚花期至幼果期是病菌侵染盛期和病害防治适期。如果错过这两个时期,将难以达到理想的防治效果。

柚黑斑病菌的生长特性及寄主范围测定

【目的】明确‘琯溪蜜柚’黑斑病菌（Phyllosticta citriasiana）的分生孢子萌发和菌丝生长的最佳条件及寄主范围,为了解病害的发生规律及制定防控策略提供理论参考。【方法】测定P.citriasiana分生孢子在疏水性基层表面及不同萌发条件下的萌发率差异;分析菌丝在不同培养条件下的生长速率差异;并采用人工刺伤接种法测定菌丝对28份芸香科植物的致病性。【结果】P.citriasiana分生孢子在水溶液和1%葡萄糖溶液中24 h的萌发率低（8.3%和25.3%）,而48 h的萌发率高（52.7%和61.4%）。0.7 mol·L-1Na Cl溶液对分生孢子萌发具有显著抑制作用,72 h的萌发率仅为16.4%。菌丝在2%山梨醇燕麦培养基（SOA）生长最快,菌落直径达4.9 cm（9 d）,在燕麦培养基基（OA）、马铃薯蔗糖培养基（PSA）和完全培养基（CM）上的生长速率次之。菌丝在25~30℃、黑暗或光照（24 h·d-1）条件下生长快,而在温度≤20℃或≥35℃条件下,菌丝生长速率显著降低或停止生长。菌丝或分生孢子悬浮液经55℃水浴处理15 min后,均失活。人工接种试验表明,P.citriasiana除侵染‘琯溪蜜柚’外,还可侵染柚类的‘龙柚1号’‘龙柚2号’和‘坪山柚’,柠檬类的‘费米耐劳白花2号’柠檬、‘五峰2号’柠檬和‘海南药用’柠檬以及葡萄柚。【结论】连续阴雨天气和25~30℃的气候条件有利于果园中P.citriasiana分生孢子的萌发和菌丝生长,以及病原菌的侵染和传播。在自然条件下部分柚类、柠檬类植物以及葡萄柚是P.citriasiana的潜在寄主,有待进一步的田间调查验证。

蜜柚黑斑病症状及病原鉴定

症状观察结果确认平和县琯溪蜜柚黑斑病出现2种症状类型:黑星型和黑斑型.通过病原菌分离培养、形态特征观察和ITS序列分析,果实黑斑病的病原鉴定为亚洲柑橘叶点霉,叶片黑斑有亚洲柑橘叶点霉和中华柑橘叶点霉.采用科赫氏法则证实亚洲柑橘叶点霉是琯溪蜜柚黑斑病的病原菌,中华柑橘叶点霉未能对琯溪蜜柚果实致病.

漳州琯溪蜜柚果实黑斑病菌的分子鉴定

2008年从漳州采集到疑似由柑橘球座菌(Guignardia citricarpaKiely)引起的黑斑病症状的溪琯蜜柚(Citrus grandis(Linn.)Osbeck cv.guanxi-miyou)果实。使用柑橘球座菌(G.citricarpa)特异引物对该果实上的病斑进行PCR检测及序列分析。PCR检测结果表明从溪琯蜜柚果实病斑上扩增到约490bp的条带。序列分析结果表明,与已知的亚洲柑橘叶点霉(Phyllosticta citriasiana)、G.citricarpa和G.mangif-erae的相应序列同源性分别为99.8%、98.2%和94.0%。该序列含有部分的内转录间隔区1(ITS1)、5.8S核糖体RNA基因(5.8S rRNA)和部分的内转录间隔区2(ITS2)序列。结果表明,引起溪琯蜜柚果实病害的病原菌并不是G.citricarpa,而是一种新描述的病原菌——亚洲柑橘叶点霉(Phyllosticta citriasianaWulan-dari,Crous&Gruyter),该病原菌引起的病害称为柑橘褐斑病。