毛细管柱气相色谱测定有机酸亚甲基单位值及其应用

应用毛细管柱(DB-1)气相色谱法,对临床上具有重要诊断价值意义的59种标准有机酸的亚甲基单位值(MU)进行了测算,并与填充柱(5％OV-1、4％OV-17)进行了比较,且通过毛细管柱气相色谱法对正常和异常儿童尿液有机酸进行了分析。结果显示:毛细管柱气相色谱法的准确性和可靠性高,稳定性和重复性好,优于填充柱,作者认为:该法可作为国内有机酸尿症化学诊断的主要手段。

单眼斜视和剥夺猫视皮质17区N-甲基-D-天冬氨酸受体1亚单位的表达

目的 :探讨敏感期内单眼斜视 (monocularstrabis mus,MS)和单眼剥夺 (monoculardeprivation ,MD)幼猫视觉系统中有可塑性变化的N 甲基 D 天门冬氨酸受体 1亚单位 (N methyl D aspartatereceptor 1 subunit,NMDAR 1)基因的表达规律 ,为临床防治斜视 (MS)和剥夺性弱视 (MD)提供参考依据。方法 :以 6导程图形视觉诱发电位仪 (6 channel patternvisualevokedpotential,6CPVEP)检测MS和MD弱视的形成 ,应用生物素过氧化物酶标记链酶卵白素复合物 (strept avidinbiotin peroxidaecomplex,SABC)技术处理NMDAR 1单克隆抗体标记的正常 (normal)组、MS组及MD组幼猫的同侧视皮质 17区组织连续切片 ,照相观察并行计算机图像分析和t test处理。结果 :视皮质 17区可见NMDAR 1免疫阳性神经元呈棕褐色 ,神经元胞浆及轴突、树突着色 ,但轴突更明显 ,核色淡或空染 ,具有明显的突触形态学特征。它主要分布在Ⅱ /Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ层。比较各组猫视皮质 17区Ⅳ层NMDAR 1免疫阳性细胞染色浓度和数密度 ,MS、MD与N组比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ,MS组和MD组幼猫视皮质 17区的NMDAR 1与正常组相比 ,其活性 (染色浓度 )减弱 ,数量明显减少。结论 :①敏感期内 ,单眼斜视和剥夺猫视皮质 17区神经元NMDAR 1表达表现?

幼年大鼠脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B的表达及其细胞类型

背景:神经干细胞表达有N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methy-D-aspartic acid receptor,NR)亚单位2B,深入研究其在幼年大鼠脑室下区的表达情况有助于揭示该区神经干细胞增殖、分化、迁移的机制。目的:观察NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达及表达高峰期所在的细胞类型。方法:取出生后7,14,21,28dSD大鼠,制备5μm厚脑组织冰冻切片,观察脑室下区NR2B的表达,及其在出生后14d大鼠脑室下区所在的细胞类型。结果与结论:免疫组化结果显示NR2B在出生后7,14,21,28d大鼠脑室下区存在差异表达,于出生后14d时表达达高峰,以侧脑室外侧角旁表达最高;免疫荧光双标染色可见NR2B在脑室下区与胶质纤维酸性纤维蛋白、巢蛋白、β-Ⅲ微管蛋白共定位,以室管膜细胞最明显;而与NeuN在脑室下区无共定位。说明NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达存在时空变化,可能在神经发生中发挥作用。

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B在大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察N 甲基 D 门冬氨酸受体亚单位 1 (N methyl D aspartatereceptorsubunit 1 ,NR1 )、亚单位 2A(NR2A)和亚单位 2B(NR2B)在成年大鼠海马结构各区的表达特点 ,为研究三者在海马生理和病理过程中的作用提供形态学资料。方法 :大鼠脑 2 0 μm厚冰冻切片 ,免疫组织化学ABC法显色 ,图像分析。结果 :NR1、NR2A和NR2B在海马CA1～CA3区锥体细胞以及齿状回颗粒细胞普遍表达 ,三者中以NR1免疫组织化学反应最强 ,NR2A最弱 ,NR2B居中。NR1与NR2A在海马各区间的表达水平都无显著差异 ;NR2B在海马CA1区的表达明显强于其在CA3区及齿状回的表达 ,尤其是CA1区锥体细胞的顶树突在贯穿辐射层及腔隙分子层的全长中都呈高表达。结论 :NR1、NR2A和NR2B在正常海马结构各区的表达强度和形式存在差异 ,提示各区间天然N 甲基 D 门冬氨酸(N methyl D aspartate ,NMDA)

慢性脑缺血模型大鼠神经突触可塑性与N-甲基-D-天门冬氨酸型受体

背景:N-甲基-D-天门冬氨酸型受体是与神经突触可塑性密切相关的离子型谷氨酸受体,且由N-甲基-D-天门冬氨酸型受体启动突触的可塑性调节。目的:探索N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位2A(NR2A)和N-甲基-D-天门冬氨酸型受体亚单位2B(NR2B)在脑缺血后对神经突出的可塑性调节机制。方法:60只Wistar大鼠随机等分为假手术组和脑缺血组,脑缺血组大鼠依据改良型2VO模型方法构建大鼠慢性脑缺血模型,假手术组大鼠不结扎颈总动脉和迷走神经。结果与结论:慢性缺血后0-12 h大鼠大脑海马中NR2A表达水平逐渐降低,而NR2B慢性缺血后4 h达到峰值,且在脑缺血的情况下,无论低频或高频刺激均不能诱导长时程增强的形成。提示NR2B对条件刺激诱导的长时程增强形成有抑制作用;而NR2A对条件刺激长时程增强形成具有促进作用。

电针对吗啡戒断大鼠杏仁核内N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2B蛋白及基因表达的影响

目的:观察电针对吗啡戒断大鼠空间学习记忆的影响,通过对杏仁核脑区N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR 2B表达的检测,探讨电针改善大鼠吗啡戒断后学习记忆能力的分子生物学机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、针刺组以及电针组,每组10只。以每日20,30,40,50,50mg/kg剂量,连续5d背部皮下注射盐酸吗啡,建立吗啡依赖大鼠模型,末次注射后3h给予纳洛酮快速戒断。两个治疗组选取"足三里""肾俞"穴分别施以手针和电针,每次15min,每日1次,连续治疗6d。应用Morris水迷宫测试戒断大鼠空间学习能力,应用蛋白印记(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测戒断大鼠杏仁核NR 2B蛋白与基因的表达水平。结果:模型组大鼠的逃避潜伏期较空白组明显延长(P<0.01),针刺及电针组则较模型组显著缩短(P<0.01),电针组较针刺组缩短更明显(P<0.05);模型组大鼠的杏仁核NR 2B蛋白表达较空白组显著降低(P<0.01),针刺组、电针组则较模型组表达升高(P<0.01),电针组高于针刺组(P<0.01);模型组NR 2BmRNA表达较空白组显著降低(P<0.01),电针组较模型组表达升高(P<0.05)。结论:吗啡戒断后大鼠空间学习能力受损,针刺及电针可以恢复大鼠学习能力且电针组疗效优于针刺组,推测可能与其对杏仁核NR 2B表达的调节有关。

铅暴露对仔鼠学习记忆能力及发育早期海马组织中N-甲基-D天门冬氨酸受体亚单位表达的影响

目的探讨铅暴露对仔鼠学习记忆能力及发育早期各阶段海马组织中N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)亚单位表达的影响。方法将24只清洁级妊娠昆明小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组及0.5、1.0、2.0 g/L铅暴露组,每组6只。采用自由饮水方式进行染毒,母鼠从妊娠第1天起开始饮用含铅水,仔鼠于出生后(PND)21天断乳,继续饮含铅水至实验结束。水迷宫测定PND 40仔鼠学习记忆能力;并分别于PND10、PND20和PND40,测定海马组织中NMDA各受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)蛋白和m RNA的表达水平。结果与对照组比较,各剂量乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR1和NR2A蛋白及m RNA的表达水平均较低,除PND 10的0.5 g/L乙酸铅暴露组外,差异有统计学意义(P<0.05);且随着乙酸铅暴露剂量的升高,仔鼠海马组织中NR1和NR2A蛋白及m RNA的表达水平呈下降趋势。与对照组比较,PND 10时各剂量乙酸铅暴露组及PND 20时1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR2B蛋白的表达水平均较低,差异有统计学意义(P<0.05);而PND 40时各剂量乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR2B蛋白的表达水平均无明显改变。且随着乙酸铅暴露剂量的升高,PND 10、PND 20时仔鼠海马组织中NR2A蛋白的表达水平均呈下降趋势。各剂量乙酸铅暴露不同发育阶段仔鼠海马组织中NR2B m RNA的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论发育早期铅暴露可损伤仔鼠的学习记忆能力,并且抑制仔鼠海马组织中NMDA受体各亚单位的表达。

N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B特异性拮抗剂对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响

目的:研究N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚单位2B(NR2B)特异性拮抗剂(Ro 25-6981)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法:7 d龄新生SD大鼠随机分为Ro 25-6981组(HIBD前2 h,腹腔注射Ro 25-6981 10 mg.kg-1)、HIBD组(HIBD前2 h,腹腔注射等剂量生理盐水)和假手术组(仅游离右侧颈总动脉,不结扎)。采用免疫组化学染色检测SVZ Nestin表达量及BrdU阳性细胞数的变化。结果:HIBD组12h后Nestin表达量开始增多,48 h达峰值,之后缓慢下降;与其相比,Ro 25-6981组在12 h和24 h时下降明显(P<0.05)。HIBD组BrdU阳性细胞数在缺氧缺血3 h后缓慢上升,72 h达高峰;与其相比,Ro 25-6981组在各时间点BrdU阳性细胞表达均有所下降,以24、48和72 h减少明显,尤以72 h为著(P<0.05)。结论:Ro 25-6981能够降低HIBD新生大鼠SVZ Nestin的表达及Brdu阳性细胞数,对SVZ NSCs增殖起抑制作用,提示NR2B参与并促进HIBD引起的SVZ NSCs的增殖。

骨髓间充质干细胞外泌体对神经病理性大鼠镇痛、病理及anx1-Src-NMDAR-2B的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体对神经病理性大鼠镇痛作用、病理形态及Panx1-Src-NMDAR-2B的影响。方法 30只SD雄性大鼠,随机分为正常(NO)组,模型(MO)组,BMSCs外泌体(BE)组,各10只,对MO组、BE组采用坐骨神经慢性压迫性损伤建立神经病理性大鼠模型,NO组不建立该模型,建模成功后,对BE组鞘内注射0.5 mL 200 mg/L的BMSCs外泌体,NO组、MO组同期鞘内注射同体积生理盐水,用自发疼痛行为学评分、热痛阈值、机械疼痛阈值评价镇痛作用,苏木精-伊红(HE)染色检测脊髓组织病理形态,免疫印迹法检测Panx1-Src-NMDAR-2B蛋白表达。结果 NO组、MO组、BE组建模成功后、给药1周末、给药2周末自发疼痛行为学评分、热痛阈值、机械痛阈值差异均有统计学意义(P<0.05);NO组脊髓组织形态正常,MO组出现明显变化,与MO组相比,BE组病理形态明显改善;NO组、MO组、BE组脊髓组织Panx1蛋白表达分别为0.96±0.06、2.36±0.21、1.54±0.16(F=20.270,P<0.01),Src蛋白表达分别为1.24±0.12、2.29±0.24、1.61±0.19(F=12.370,P<0.001),NMDAR-2B蛋白表达分别为1.25±0.11、2.32±0.26、1.59±0.18(F=11.990,P<0.001),NO组、MO组、BE组脊髓组织Panx1、Src、NMDAR-2B蛋白表达异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs外泌体对神经病理性大鼠具有显著疗效,具有显著的镇痛作用,并可有效改善大鼠病理形态,抑制Panx1-Src-NMDAR-2B通路表达。

2000μW/cm^2电磁辐射对大鼠海马NR2A蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨2000μW/cm2电磁辐射对大鼠海马N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位2A(NR2A)蛋白及其mRNA水平表达的影响,揭示电磁辐射对大鼠学习记忆功能的损伤机制。方法:实验分为空白对照组,假辐射组,1h/d、2h/d、3h/d辐射组。将辐射组大鼠固定体位,头部接受功率密度为2000μW/cm2的近场辐射,连续辐射30d。通过Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力,采用免疫组化法和Western blot法检测大鼠海马组织NR2A蛋白表达的变化,RT-PCR法检测大鼠海马组织NR2A mRNA表达的变化。结果:假辐射组大鼠各项指标与空白对照组相比均无统计学差异(P>0.05);而各辐射组大鼠寻找安全平台的逃避潜伏期较空白对照组明显延长(P<0.05);各辐射组大鼠海马神经元排列紊乱,NR2A阳性细胞比率显著下降,海马组织NR2A蛋白及其mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:2000μW/cm2电磁辐射可导致大鼠学习记忆功能下降,其机制可能与大鼠海马组织NR2A蛋白及其mRNA的表达降低有关。

人参皂苷Rg_1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白及NMDA受体亚单位NR1,NR2B表达的影响

目的:观察人参皂苷Rg1对大鼠脑片AD模型磷酸化Tau蛋白(Phosphory protein Tau,P-Tau)及N-甲基-D-门冬氨酸受体亚单位1(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 1,NR1)、亚单位2B(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)的表达影响。方法:将5周龄雄性Wistar大鼠脑片(含皮层和海马)随机分为5组:空白对照组、模型组和低、中、高剂量人参皂苷Rg1组,每组10张脑片,脑片放置盛有人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)的6孔板中培养,温度(32.0±0.5)℃,整个过程ACSF中持续通入混合氧气(95%O2+5%CO2)。人参皂苷Rg1各组ACSF中首先加入人参皂苷Rg1(60,120,240μmol.L-1)作用2 h,然后模型组和人参皂苷Rg1各组ACSF中分别加入冈田酸(okadaic acid,OA)1μmol.L-1作用3 h,空白对照组不加任何处理因素。采用免疫组织化学、图像分析技术等方法,检测皮层和海马P-Tau,NR1,NR2B表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠脑片P-Tau的表达增加(P<0.05或P<0.01),NR1,NR2B的表达降低(P<0.01);人参皂苷Rg1各组与模型组比较,大鼠脑片P-Tau的表达降低(P<0.01或P<0.05),NR1,NR2B的表达增加(P<0.01或P<0.05),其中以高剂量人参皂苷Rg1组效果最佳。结论:人参皂苷Rg1可以降低大鼠脑片AD模型P-Tau表达水平,并能上调学习记忆相关蛋白NR1,NR2B的表达,以此途径发挥抗痴呆作用。

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠海马GluR1蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察补阳还五汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马α-氨基羟甲基恶丙酸受体(AMPA)GluR1亚单位蛋白及mRNA表达的影响,探讨补阳还五汤治疗VD的机制。方法:四血管阻断法制备VD大鼠模型。设立假手术组、VD模型组、尼莫地平组(20mg·kg-1.d-1,灌胃30d)和补阳还五汤治疗组(50g·kg-1.d-1灌胃30d)。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力的改变,免疫组化和Westernb lotting技术检测大鼠海马神经元GluR1蛋白的变化,实时荧光定量PCR技术检测大鼠海马GluR1mRNA表达的变化。结果:与假手术组相比,VD模型组大鼠逃避潜伏期延长和平均探索次数减少(P<0.05);补阳还五汤明显改善了模型大鼠上述学习、记忆成绩(P<0.05);假手术组、尼莫地平组与补阳还五汤治疗组之间差异无显著(P>0.05)。VD模型组大鼠的GluR1蛋白及其mRNA表达水平较假手术组明显降低(P<0.05);补阳还五汤治疗组大鼠海马的GluR1蛋白及其mRNA表达水平较模型组的表达明显升高(P<0.05);假手术组、尼莫地平组与补阳还五汤治疗组之间差异无显著(P>0.05)。结论:补阳还五汤可以改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与减轻脑缺血再灌注对海马CA1区神经元的损伤及恢复海马组织GluR1蛋白及其mRNA的表达有关。

负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中谷氨酸及其受体的表达

目的观察谷氨酸及其离子型受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)功能亚单位NR2A在近视豚鼠视网膜上的动态表达,探讨其在近视发病过程中的作用。方法选取3周龄健康三色短毛豚鼠120只,采用随机数字表法分为0周正常组、2周正常组、2周近视组、4周正常组、4周近视组,每组24只;正常组不作任何干预,近视组右眼均戴-10 D透镜,左眼不戴镜作为对照。入组前与处死前均进行屈光度及眼轴长度检测,腹腔注射过量水合氯醛处死,并分离视网膜,采用高效液相色谱分析检测视网膜中谷氨酸的含量变化,实时荧光定量PCR以及ELISA分别检测豚鼠视网膜中NR2A m RNA及其蛋白水平的表达变化。结果造模前各组屈光度及眼轴长度差异均无统计学意义(均为P>0.05)。造模后各组与造模前比较,眼轴长度及屈光度差异均有统计学意义(2周正常组P<0.05,2周近视组P<0.005,4周正常组P<0.01,4周近视组P<0.001)。造模后,正常组间眼轴长度和屈光度比较差异均有统计学意义(F=20.32,P<0.01;F=199.65,P<0.01);2周近视组与4周近视组比较,右眼眼轴长度和屈光度差异均有统计学意义(F=78.96,P<0.001;F=252.10,P<0.001),左眼眼轴长度和屈光度差异均无统计学意义(F=13.66,P>0.05;F=21.20,P>0.05);2周近视组与4周近视组右眼分别与相应的左眼比较,眼轴长度差异均有统计学意义(2周近视组:t=9.515,P<0.005;4周近视组:t=9.449,P<0.001),屈光度差异同样均有统计学意义(2周近视组:t=8.897,P<0.001;4周近视组:t=17.235,P<0.001)。视网膜中谷氨酸含量正常组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05);造模后2周近视组与4周近视组比较,右眼视网膜中谷氨酸含量逐渐增加,差异有统计学意义(t=36.230,P<0.01)。造模后2周近视组较2周正常组右眼谷氨酸含量增加,差异有统计学意义(t=-23.240,P<0.05);同样4周近视组较4周正常组右眼谷氨酸含量亦增加,差异亦有统计学意义(t=-53.690,P<0.01)。视网膜中NR2A m RNA的表达量,正常组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。造模后4周近视组与2周近视组比较,右眼视网膜NR2A m RNA表达量明显上调,差异有统计学意义(t=55.660,P<0.001);2周近视组与2周正常组右眼比较表达量增加,差异有统计学意义(t=-15.086,P<0.005),同样4周近视组与4周正常组右眼比较差异亦有统计学意义(t=-43.276,P<0.001)。正常组之间视网膜中NR2A蛋白表达量,差异无统计学意义(均为P>0.05)。4周近视组与2周近视组比较,右眼视网膜NR2A蛋白表达量明显上调,差异有统计学意义(t=43.210,P<0.005);2周近视组与2周正常组右眼比较NR2A蛋白表达量增加,差异有统计学意义(t=-2.365,P<0.05),同样4周近视组与4周正常组右眼比较差异亦有统计学意义(t=-5.518,P<0.01)。结论负透镜诱导型近视豚鼠视网膜中谷氨酸及其NMDAR受体亚单位NR2A在透镜诱导眼中表达上调,并随透镜诱导时间的延长和近视程度的加深而增加。

邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响

目的:探讨邓铁涛教授健脑1方对血管性痴呆大鼠的海马NMDAR-CaMKⅡ通路的影响。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎建立VD动物模型,将60只SD雄性大鼠随机分为假手术组、VD模型组、高剂量组、低剂量组及尼莫地平组,给药30天后采用免疫组化方法测定大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平。结果:模型组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ的表达水平与假手术组相比明显降低(P<0.01)。与模型组相比较,高剂量组大鼠海马CAl区NR2B及CaMKⅡ表达水平均显著提高(P<0.05),尼莫地平组大鼠海马CAl区CaMKⅡ表达水平也明显提高(P<0.05)。结论:NMDAR-CaMKⅡ通路在VD的发生机制中发挥了重要作用。健脑1方可能通过上调VD大鼠海马NR2B及CaMKⅡ的表达,从而改善大鼠学习和记忆功能,起到治疗血管性痴呆的作用。

盐酸多奈哌齐对拟VD大鼠模型海马神经元保护作用机制的研究

目的观察盐酸多奈哌齐对血管性痴呆(VD)大鼠模型海马NMDA受体亚单位NPR1的免疫组织化学表达的变化,及对GSH-PX、CAT的影响,探讨其在血管性痴呆中的神经保护作用机制。方法采用双侧颈总动脉反复夹闭、再通, 并腹腔注射硝普钠法制备模型,药物组用盐酸多奈哌齐溶液灌胃;用Y-型迷宫试验观察其行为学改变;用免疫组织化学技术观测大鼠海马神经元N-甲基-D -天门冬氨酸受体-R1的表达变化;GSH-PX、CAT分别采用DTNB法及紫外分光光度法测定其活力。结果盐酸多奈哌齐组大鼠学习、记忆成绩优于模型组 (P<0．01),其海马CA1区NMDA受体-R1表达明显降低,与模型组比较有显著性差异(P<0．01);GSH-PX、CAT较模型组明显增高(P<0．01),与假手术组相比无显著性差异(P>0．05)。结论盐酸多奈哌齐可通过降低NMDAR1的表达,提高GSH-以、CAT的活力来保护VD大鼠海马神经元。

调督安神胶囊对PTX致痫大鼠海马神经元NMDAR1的影响

目的探讨调督安神胶囊对PTX致痫大鼠海马N-甲基D-天冬氨酸受体亚单位NR1(NMDAR1)的影响。方法建立PTX癫痫大鼠模型,再随机分为模型对照组、中药低剂量组、中药高剂量组、西药组。分别给予双蒸水和调督安神胶囊、西药灌胃。然后进行NMDAR1免疫组织化学染色和免疫阳性细胞记数。结果PTX致痫大鼠海马NMDAR1表达显著增强,而经过中药治疗后的癫痫大鼠海马NMDAR1阳性细胞数明显减少,接近于正常组。结论调督安神胶囊可以抑制海马组织中NMDAR1的过度表达,这可能是其改善癫痫大鼠学习和记忆障碍的机制之一。

慢性低水平铅暴露对发育期大鼠海马NMDAR-1 mRNA表达的影响

目的 探讨发育期低水平铅暴露对大鼠学习记忆影响的分子机制。方法 采用原位杂交技术 ,研究低水平铅暴露后发育期海马NMDA受体亚单位 1(NMDAR 1)mRNA表达的变化。结果 铅暴露组大鼠海马区锥体细胞层NMDAR 1mRNA与对照组相比在 16d时CA1区、CA3区分别增加 18 75 %和 13 2 % (P <0 0 5 ) ,而在齿状回颗粒细胞层表达却降低 14 2 9% (P <0 0 1) ;在 3 2、64d除齿状回颗粒细胞层表达降低 9 67%、10 67%外 (P <0 0 1)外 ,其余各海马区未见有明显的光密度变化。结论 发育期铅暴露能导致NMDAR 1mRNA表达的改变 ,进而影响NMDAR 1的表达 ,这可能是铅暴露影响学习记忆的分子机制之一。

NMDA受体与癫痫发病机制的研究现状

癫痫的主要机制为脑内兴奋性氨基酸活性升高。在癫痫发作中,N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体含量增多,表达升高,且其各个亚型之间相互作用,构形发生变化,使突触后膜支架蛋白磷酸化,发生级联发应,使NMDA受体配体离子通道持续开放,神经元持续放电,并向周围神经元放散扩布;长期癫痫反复发作,导致苔藓纤维发芽,神经元缺失;这些形态学和电生理改变,反之,导致癫痫的易感和反复发作。通过多年动物实验和临床应用,提示N-甲基-D-冬氨酸受体亚单位2B(NR2B),高选择性的拮抗剂有广阔的临床应用前景。

癫痫持续状态大鼠海马组织中NR1和TLR4的表达及其相关性

目的探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态(status epilepticus,SE)大鼠模型中N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位1(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR1,NR1)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在海马中的表达及对神经元损伤、坏死的影响。方法雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,应用匹罗卡品致痫产生SE后60min后终止发作,24h后取材,行HE染色观察海马神经元的损伤及坏死情况,用免疫组化和Western blotting检测NR1和TLR4的表达水平。采用Pearson相关分析法分析NR1与TLR4表达的相关性。结果癫痫持续状态后24h,组织学检查发现SE组大鼠海马有显著的神经元损伤,免疫组化和Western blotting可见NR1和TLR4表达水平均显著高于正常组,且两者表达水平呈正相关(r=0.868,P=0.005)。结论大鼠癫痫持续状态后24h,NR1和TLR4在海马组织中表达活性增强,且两者表达呈正相关。

芹菜素介导Caveolin-1对脑缺血大鼠认知功能的改善作用

目的探讨芹菜素对脑缺血大鼠认知功能的改善作用及潜在的分子机制。方法选择清洁级健康雄性SD大鼠32只,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、低剂量芹菜素干预组(低芹菜素组)及高剂量芹菜素干预组(高芹菜素组),每组8只。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,假手术组不阻断大脑中动脉。采用水迷宫来检测大鼠脑缺血后空间学习记忆功能,RT-qPCR法检测缺血侧海马小凹蛋白1(Caveolin-1)、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B(NR2B)mRNA表达,采用Western blot法检测缺血侧海马Caveolin-1蛋白表达,免疫组化法检测缺血侧海马NR2B表达部位及水平。结果模型组大鼠第26、27天逃避潜伏期均大于假手术组,差异均有统计学意义(t=2.138、3.001,均P<0.05)。高、低芹菜素组大鼠第27天逃避潜伏期均小于模型组,差异均有统计学意义(t=2.193、2.283,均P<0.05)。模型组大鼠空间探索时间小于假手术组,差异有统计学意义(t=2.789,P<0.01);高、低芹菜素组大鼠,空间探索时间均大于模型组,差异均有统计学意义(t=2.368、2.060,均P<0.05)。模型组Caveolin-1表达升高,高芹菜素组Caveolin-1 mRNA和蛋白表达较模型组增加,差异均有统计学意义(t=2.321、2.553,P<0.05)。模型组NR2B表达减少,芹菜素干预能上调其表达(P<0.05)。结论芹菜素可通过促进Caveolin-1、NR2B表达,起到改善大鼠脑缺血后认知功能的作用。