亚甲氨基硝基胍(MANG)的合成、晶体结构及热行为

以氨基硝基胍(ANQ)和甲醛为原料,合成了新的化合物亚甲氨基硝基胍(MANG),并对其反应过程进行了分析。采用X-射线单晶衍射仪分析了MANG的晶体结构,结果表明,其晶体属于正交晶系,空间群为P_(nn)2,每个晶胞中包含4个MANG分子,晶体密度为1.63 g·cm^(-3)。通过差示扫描量热法(DSC)和热重分析技术(TG-DTG)研究了MANG的热行为,其只呈现一个非常剧烈的放热分解过程。在5℃·min^(-1)的升温速率下,MANG的分解峰温和放热量分别为170.9℃和1440 J·g^(-1)。计算得到MANG的标准摩尔燃烧热和生成焓分别为-1526.09 kJ·mol^(-1)和33.81 kJ·mol^(-1)。用Kamlet-Jacobs方程预估MANG的爆速(7.1 km·s^(-1))和爆压(20.9 GPa)均小于ANQ,但高于三硝基甲苯(TNT)。MANG的撞击感度(>7.9 J)低于ANQ(3J)和黑索今(RDX)(7.4 J)。

芳亚甲基硝基缩氨基胍类化合物的合成及杀虫活性

依据活性亚结构拼接原理,以硝基胍为原料,合成了一系列具有新烟碱类和缩氨基脲类杀虫剂共同结构特征的芳亚甲基硝基缩氨基胍类化合物,其结构通过1H NMR、IR和元素分析等方法进行了确证.杀虫活性测定结果表明,在600μg/mL浓度下,目标化合物对桃蚜[Myzuspersicae(Sulzer)]具有较优异的活性,其中化合物4-2,4-8,4-10,4-16,4-27,4-31和4-34的校正死亡率均在90%以上.进一步以桃蚜、棉蚜(Aphis gossypii)和桃粉蚜(Hyalopterusamygdali blanchard)为对象,测定了化合物4-2,4-8和4-34的精密毒力.结果表明,它们在低浓度下仍然具有很高的活性,其中化合物4-8对棉蚜的活性甚至优于对照药剂吡虫啉,在3.13μg/mL浓度下致死率仍高达95.7%(吡虫啉为79.4%),具有进一步研究开发的价值.

GC-MS/MS法测定复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中N-亚硝基二甲胺与N-亚硝基二乙胺

目的建立复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中N-亚硝基二甲胺(NDMA)与N-亚硝基二乙胺(NDEA)的检测方法。方法色谱柱为Agilent VF-WAXms,载气为氦气,流速为1.2 mL·min^(-1),进样口温度250℃,柱温为程序升温。电子轰击电离方式,离子源温度:230℃;定量测定采用MRM模式。以8批复方盐酸二甲双胍格列吡嗪胶囊为测定对象,测定其NDMA和NDEA含量。结果NDMA、NDEA及相邻色谱峰之间的分离良好,分别在0.1966~39.32 ng·mL^(-1)(r=0.9990)和0.1870~37.41 ng·mL^(-1)(r=0.9995)内与峰面积线性关系良好,检测限分别为0.0983 ng·mL^(-1)和0.0935 ng·mL^(-1),加样回收率分别为82.3%和85.4%。结论该法分离效果好、操作简便、灵敏度高,可同时检测复方二甲双胍格列吡嗪胶囊中NDMA和NDEA的含量。

甲硝基亚硝胍诱发大鼠胃癌的实验研究

作者自行合成N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG),并以100μg/mlMNNG稀释液喂以100只Wistar大鼠,以诱发胃癌。结果发现喂药6个月内,死亡20只,均无消化道癌肿发生;第7～8个月内,死亡18只,发生胃癌3只(16.7%);第9个月时,处死全部剩余大鼠共62只,其中50只发生胃癌(80.7%)。癌肿均位于腺胃小弯侧,多呈隆起结节型或溃疡型;组织学类型包括乳头状腺癌、分化或未分化管状腺痛;癌肿可侵犯胃壁各层,与人类胃癌病理特征颇为相似。作者还发现,纯系雄性Wistar大鼠是诱发实验性胃癌的理想对象。且以100μg/mlMNNG液,喂药9个月为适宜。

甲基硝基亚硝胍处理的vero细胞中磷酸化蛋白的差异显示

目的：初步了解哺乳类细胞非定标性突变形成是否与以蛋白质磷酸化级联反应为主要形式的细胞信号传导通路有关；方法：采用［３２Ｐ］体内预标记及凝胶双向电泳方法差异显示甲基硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）处理组和对照组磷酸化蛋白，蛋白质免疫印迹杂交试验初步鉴定差异显示蛋白斑点性质；结果：在处理组发现两个与对照组不同的蛋白斑点，分子量分别在６８×１０３和４３×１０３附近，与抗酪氨酸磷酸化蛋白抗体未发生阳性反应；结论：根据差异显示蛋白斑点的分子量和印迹杂交试验结果，初步认为所见蛋白斑点可能为丝／苏氨酸磷酸化蛋白。

甲硝基亚硝胍和（或）雷尼替丁诱发大鼠腺胃粘膜肠上皮化生

分别采用含０．０３％雷尼替丁（Ｒ）的标准粉末状饲料、５０μｇ／ｍｌ甲硝基亚硝胍（ＭＮＮＧ）溶液及两者联合（ＭＮＮＧ＋Ｒ）喂饲大鼠共２０周，于实验第４３周末处死动物进行观察。ＭＮＮＧ＋Ｒ组腺胃粘膜肠上皮化生诱发率及平均肠化腺体数（１００．０％，６９６．２±１７３．６）显著地高于ＭＮＮＧ组（８６．５％，３３０．６±１４５．６）或Ｒ组（２２．５％、７５．２±３０．９）（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）；各组大鼠幽门腺区和胃底腺区粘膜表面ｐＨ值与肠化腺体数目之间呈显著的正相关（ｒ＝０．９６，ｒ＝０．９９）。结果表明ＭＮＮＧ＋Ｒ是建立大鼠腺胃粘膜肠化模型的一种理想方法；胃内高ｐＨ值可能是诱发胃粘膜肠上皮化生的主要因素之一；慢性胃病抗酸治疗的安全性还需进一步观察。

甲基硝基亚硝基胍诱导的一种全核γH2AX染色的特性研究

目的:明确甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱导的全核γH2AX所代表的DNA损伤的性质。方法:利用免疫荧光方法观察人羊膜FL细胞中MNNG诱导的γH2AX焦点的形成,中性彗星实验检测DNA双链断裂的形成,碱性彗星实验检测DNA单链、双链及其他类型损伤。结果:MNNG在10 m g/L时能诱导一种特殊的全核染色,1 m g/L时能在一部分细胞中诱导这种全核染色,但作用比较微弱。在这类细胞中中性彗星实验不能检测到明显的DNA双链断裂的形成,而碱性彗星实验能显示有DNA损伤的存在。结论:尽管γH2AX焦点被认为是DNA双链断裂的特异性标志,这种全核染色可能代表着另外类型的DNA损伤。

甲基硝基亚硝基胍对人正常胃黏膜GES-1细胞恶变的影响及其机制研究

目的观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对人正常胃黏膜GES-1细胞恶变的影响,并探讨其可能的机制。方法采用不同浓度梯度MNNG作用于人正常胃黏膜GES-1细胞,培养24h后采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞侵袭及迁移能力;48h后采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR及Western blotting检测细胞NF-κB p65 m RNA及蛋白表达情况。结果选择诱导胃黏膜GES-1细胞恶变的MNNG浓度为2×10–4mol/L。MNNG能明显促进GES-1细胞的增殖和侵袭转移,并抑制其凋亡(P<0.01);MNNG诱导胃黏膜GES-1细胞后,细胞内NF-κB p65 m RNA及蛋白表达水平均上调(P<0.05)。结论 MNNG可促进人正常胃黏膜GES-1细胞的增殖及侵袭转移,抑制细胞凋亡,诱导细胞恶变,其机制可能与激活NF-κB有关。

高效液相色谱-串联质谱法测定盐酸二甲双胍及其制剂中痕量N-亚硝基二甲胺

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)检测盐酸二甲双胍原料和制剂中N-亚硝基二甲胺(NDMA)含量的方法。样品以水为提取溶剂,经涡旋混匀、恒温振荡、高速离心、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析。采用ACE EXCEL 3 C18-AR色谱柱(150 mm×4.6 mm,3μm)分离,流动相为均含0.1%甲酸的水和甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温40℃,自动进样器温度10℃。采用阀切换技术保护质谱仪,设置六通阀切换使保留时间2.85~7.00 min的流动相进入质谱,其余时间流动相进入废液。质谱部分采用大气压化学电离(APCI)源,在正离子、MRM模式下扫描,雾化器流量为3 L/min,加热器流量为10 L/min,接口温度为300℃,脱溶剂管温度为250℃,加热块温度为400℃,干燥器流量为10 L/min。NDMA定量离子对为m/z 75.0→43.1,碰撞能量(CE)为-17.0 eV,定性离子对为m/z 75.0→58.2,CE为-16.0 eV。采用外标法定量。对方法进行了详细的方法学验证,结果表明,该法专属性良好,溶剂和辅料对NDMA测定无干扰。NDMA峰面积与其质量浓度在1.00~100.00 ng/mL范围内呈现良好的线性关系,相关系数(r)>0.9999;低、中、高3个水平下NDMA的回收率为94.55%~114.67%,RSD为4.73%~13.46%;检出限和定量限分别为0.20 ng/mL和1.00 ng/mL;NDMA在自动进样器放置0、8、24 h的峰面积RSD为2.08%。使用该方法对113批盐酸二甲双胍原料和制剂供试品中的NDMA进行测定,发现原料药中NDMA检出量不超限,但有8批二甲双胍制剂超过了限度。该法灵敏、准确,操作简便,可用于盐酸二甲双胍原料及制剂中的NDMA检测。

哺乳动物细胞POLK、POLH、POLI基因对甲基硝基亚硝基胍的应答反应及其启动子区转录因子结合部位的生物信息学分析

目的:观察甲基硝基亚硝基胍(MNNG)对培养细胞DNA聚合酶κ、η、ι编码基因表达的影响并用生物信息学方法预测它们的启动子区和启动子区中的转录因子结合部位。方法:利用半定量RT-PCR观察POLK、POLH、POLI基因表达改变。利用在线生物信息学软件,确定它们的启动子区,然后,用转录因子预测软件并结合进化足迹法检出包括启动子区在内的3000bp碱基上游序列中的转录因子结合部位。结果:0.2μmol·L-1MNNG导致细胞POLH和POLI表达水平在处理后6-24h间逐渐上升,升高约1倍;而POLK则呈下降;通过转录因子预测软件分析,在POLK、H和I启动子区分别检出了384个、413个和689个推断的转录因子结合部位;通过进化足迹法分析有效地降低了假阳性率,推断的转录因子结合部位分别下降到158个、80个和40个。结论:低浓度MNNG导致POLH、POLI表达水平升高,而POLK表达水平降低;通过在线软件,我们成功地在POLK,POLH,POLI启动子区分别检出。158、80和40个推断的转录因子结合部位;进化足迹法分析能够有效降低预测软件的假阳性率。

UPLC-APCI-MS/MS法测定二甲双胍格列吡嗪片中N-亚硝基二甲胺

目的建立超高效液相色谱-大气压化学离子源-三重四极杆质谱联用法(UPLC-APCI-MS/MS)测定二甲双胍格列吡嗪片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)含量。方法色谱柱为ACE EXCEL 3 C18-AR(4.6 mm×150 mm,3μm),以0.1%甲酸的水溶液为流动相A,以0.1%甲酸的甲醇溶液为流动相B,梯度洗脱,正离子多反应监测模式。结果NDMA在1.0699~106.99 ng·mL^-1与峰面积线性关系良好,低、中、高浓度平均回收率在87.95%~90.3%。检测限为0.27 ng·mL^-1,定量限为0.89 ng·mL^-1。共检测62批二甲双胍格列吡嗪片样品,15批次样品未检出NDMA;47批次检出NDMA(6.8~41.9 ng·g^-1),均在NDMA的限度规定内。结论本方法操作简便,灵敏度高,准确度好,可用于二甲双胍格列吡嗪片中NDMA的测定。

高效液相色谱-质谱联用法测定二甲双胍格列本脲片(Ⅰ)中N-亚硝基二甲胺

建立高效液相色谱-质谱联用法测定二甲双胍格列本脲片(Ⅰ)中的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺。采用ACE C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相,流量为0.6 mL/min,设置梯度洗脱,柱温为40 ℃。采用正离子多反应监测(MRM)模式,以大气压化学电离(APCI)为离子源。结果表明,N-亚硝基二甲胺的质量浓度在1.0268~102.68 ng/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好,相关系数为0.9998。检出限和定量限分别为0.0342 ng/mL和0.10268 ng/mL。样品平均加标回收率为96.32%,测定结果的相对标准偏差不大于8.5%(n=9)。该方法专属性强,适用于测定二甲双胍格列本脲片(Ⅰ)中的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺。

液质联用法测定二甲双胍片中N-亚硝基二甲胺的不确定度评定

目的:评定UPLC-MS-MS测定二甲双胍片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的不确定度。方法:依据JJF 1135-2005《化学分析测量不确定度评定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》中的有关规定,建立测定通过建立数学模型,分析不确定度来源,并对各个不确定度分量进行评估、计算,由此计算扩展不确定度。结果:不确定度主要来源于测量重复性、方法学回收率、标准溶液的配制和标准曲线拟合。扩展不确定度为1.48μg·kg^(-1),N-亚硝基二甲胺含量为37.66μg·kg^(-1)。结论:本方法可用于液相色谱质谱法测定二甲双胍中N-亚硝基二甲胺的不确定度的评定。

气相色谱串联质谱法测定二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中N-亚硝基二甲胺的含量

目的:建立了二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺(NDMA)的测定方法。方法:采用气相色谱-三重四级杆质谱仪,以多反应监测模式(MRM)进行测定,按外标法定量。仪器条件:EI源温度:230℃;电子能量:70 eV;碰撞气:高纯氮气,碰撞气流速:1.5 mL/min。载气:高纯氦气,载气流速为1.0 mL/min。结果:NDMA在0.243~48.626 ng/mL的浓度范围内呈良好的线性相关,相关系数(R^(2))大于0.9997,方法检出限均为0.005μg/g,定量限为0.01μg/g,平均回收率为92.41%~101.02%(n=9),RSD为2.4%,重复性试验RSD(n=6)为3.0%,NDMA在定量限浓度及限度浓度的精密度试验RSD(n=6)分别为4.2%和3.2%。结论:方法适合用于二甲双胍格列本脲胶囊(Ⅱ)中基因毒性杂质NDMA的检测。

亚硝基胍-^(60)C复合诱变筛选多黏菌素E高产菌株

目的筛选获得高产多黏菌素E的菌株。方法以多黏类芽孢杆菌(P.polymyxa 1-8)为出发菌株,采用亚硝基胍-60钴复合诱变,以多黏菌素E和α-氨基丁酸作为筛选因子,采用平板抑菌圈法初筛,筛选获得高产多黏菌素E的高产菌株。结果获得一株效价较出发菌株P.polymyxa 1-8提高35.7%的遗传稳定突变株P.polymyxa B-23,其摇瓶发酵效价达到7.8万U/mL。结论平板抑菌圈法作为初筛方法能极大的提高筛选效率,有助于获得高产菌株。

离体灌流肾技术检测过氧亚硝基阴离子在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用

目的探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用。方法应用离体灌流肾(isolated perfused k idney,IPK)技术观察肾缺血再灌注(ischem ia reperfusion,I-R)后肾血管对去甲肾上腺素(nor-ep inephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)反应性的改变;观察应用氨基胍(am inoguan id ine,AG)阻断内源性NO生成对肾I-R大鼠IPK肾血管反应性的影响,以及给予外源性ONOO-后大鼠IPK肾血管反应性的改变。结果I-R后IPK肾血管对NE的缩血管反应性和对Ach的舒血管反应性都有明显降低,I-R5h较I-R1h进一步降低(均P<0.01)。ONOO-(40μmol.L-1)与veh ic le相比则显著降低IPK肾血管对NE和Ach的反应性(均P<0.01)。AG+I-R1h组大鼠IPK肾血管对NE和Ach的反应性与NS(生理盐水)+I-R1h组大鼠相比无显著差异(均P>0.05),AG+I-R5h组大鼠肾血管对NE和Ach的反应性较NS+I-R5h组明显增强(均P<0.05)。结论ONOO-在肾I-R所致的肾血管反应性损伤中具有重要的作用。

液质联用法测定二甲双胍缓释片中亚硝基二甲胺的残留量

目的建立二甲双胍缓释片中N-亚硝基二甲胺(NDMA)的残留量的检测方法。方法采用梯度洗脱法对二甲双胍缓释片中NDMA进行检测,流动相A为体积分数0.1%甲酸溶液,流动相B为甲醇;色谱柱为ACE C18-AR(4.6 mm×150 mm,3μm);流速:0.5 mL·min^(-1);柱温为40℃;进样量:5μL。接口电压:4000 V;离子源温度:350℃;雾化气流量:15 L·min^(-1);加热气流量:35 L·min^(-1);辅助气流量0 L·min^(-1);定量离子对75.0/58.1;入口电压50 V;碰撞电压16 V。结果方法学验证结果表明,方法线性良好[y=5540x+2570(r=0.9998)],NDMA的精密度分别为101.00%,相对标准偏差(RSD)为5.3%(n=12),准确度分别为104.17%、97.67%和97.78%,RSD分别为1.9%、0.6%和1.3%(n=3)。定量限为1 ng·mL^(-1),检测限为0.3 ng·mL^(-1)。结论建立的液质联用检测方法快速、灵敏、重现性好的,可用于二甲双胍缓释片中NDMA的定量检测。

高产γ-氨基丁酸酵母菌株的亚硝基胍诱变选育

目的:探讨亚硝基胍诱变选育高产γ-氨基丁酸酵母菌株的方法。方法:使用亚硝基胍对酵母菌株进行诱变;采用含溴甲酚绿的YEPD培养基筛选突变菌,采用薄层层析法和比色法鉴定变异菌株发酵液中的γ-氨基丁酸及其含量;对突变菌株连续继代培养4代,测定各代发酵液中γ-氨基丁酸的含量,鉴定诱变菌株的遗传稳定性。结果:亚硝基胍诱变酵母的最佳浓度为1.0g.L-1,最佳诱变时间为15min;获得了5株突变菌株,菌落呈绿色;薄层层析法鉴定突变菌株都能产γ-氨基丁酸;诱变菌发酵液中的γ-氨基丁酸含量各异,但高于对照,且增长幅度很大;对突变菌株后代遗传稳定性进行了鉴定,结果表明突变菌株4遗传性较稳定。结论:采用1.0g.L-1的亚硝基胍溶液处理酵母菌15min,经筛选鉴定,获得了一株遗传稳定的高产γ-氨基丁酸的酵母菌株。

氨基胍与左旋硝基精氨酸甲酯在兔心脏骤停复苏中的比较

目的观察一氧化氮在心肺复苏中的变化规律，比较选择性诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍（AG）与非选择性一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对兔心脏骤停复苏的影响。方法兰州大学机能实验室，40只家兔建立心脏骤停模型，5min后行胸外按压，机械通气。按压1min后随机分为4组（n=10）：AG组（20mg／kg）、L-NAME组（25mg／kg）、肾上腺素（0．02mg／kg）及对照组（生理盐水2mL）。按压5min后给与电除颤。持续监测血流动力学指标及左室内压变化至自主循环恢复后4h。分别于基础、胸外按压1min、自主循环恢复后15，30，60，120min采血检测血一氧化氮含量。数据采用重复测量数据的方差分析。结果胸外按压期间，冠脉灌注压均值AG组（40±10）mmHg高于L-NAME组[（33±8）mmHg，P=0．001]且均高于对照组[（20±5）mmHg，P=0．000]；AG组左室＋dp／dtmax、-dP／dtmax，均值[（3201±604），（3480±490）mmHg／s]高于L-NAME组[（2417±348），（2303±352）mmHg／s，P=0．000]。自主循环恢复后，AG组平均动脉压均值（79±8）mmHg与L-NAME组[（70±7）mmHg，P=0．103]差异无统计学意义，但均高于对照组[（58±8）mmHg，P=0．000、0．015]；对照组与肾上腺素组＋dP／dfmax、-dp／dtmax出现不同程度下降，但AG组与LNAME组保持在基础水平，且AG组[（4783±912），（4409±827）mmHg／s]高于L-NAME组[（3554±847），（3398±764）mmHg／s，P=0．001、0．023]。结论AG、L-NAME能增加心肺复苏期间冠脉灌注压，改善心脏舒缩功能，防止复苏后早期心功能障碍的发生，且AG明显优于L-NAME。