亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的质量控制

目的探讨亚甲蓝光化学(MB)法病毒灭活血浆在制备过程中质量控制的方法和标准。方法(1)建立MB法病毒灭活血浆制备操作规程;(2)用血凝仪检测病毒灭活前后血浆内FⅧ、Fib的含量(n=16);(3)电子秤称量病毒灭活前后血浆容量(n=25);(4)1%比例抽查并进行细菌培养,观察输注后的不良反应。结果病毒灭活后血浆内FⅧ、Fib含量和血浆容量与灭活前比较差异有统计学意义(P<0.05),但Fib、血浆容量仍符合国家质量标准要求;血培养检测未见细菌生长;临床输注后无不良反应。结论MB法病毒灭活血浆制备过程中,需要进行全过程质量控制,严格无菌操作。

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆技术及应用

随着医学技术的发展,血液的安全性越来越受到重视。为提高输血安全性,在血液检测项目增加的同时,血液检测技术也在不断改进。但这些都无法完全杜绝输血传播病毒的可能性。近年来发展起来的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活技术对于提高输血安全性有很大潜力,本文就该技术的研究进展,以及在我国血站开展后的应用情况进行综述。

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆成分及白细胞残留量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法（methylene blue photochemistry,MB-P）病毒灭活前后血浆有效成分及残留白细胞含量的变化,为其临床应用提供数据参考。方法应用去白细胞四联血袋采集全血分离制备成新鲜血浆,加入1μmol/L亚甲蓝,置4℃、光照度30 000～35 000Lx的可见光下左右摆动照射30min。留取白细胞滤过前和亚甲蓝光照处理后新鲜血浆各10ml,分别计数白细胞并检测血浆中凝血因子活性、纤维蛋白原和血浆总蛋白含量,同时计算有效成分回收率。结果经MB-P病毒灭活后新鲜血浆中Ⅷ因子和Ⅴ因子活性明显降低,差异有统计学意义（P〈0.05）；但总蛋白含量无明显变化,其他凝血因子活性减少不明显（P〉0.05）；残留白细胞计数由（5.72±1.56）×106个/U下降到（1.14±0.37）×104个/U（n=30）,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论联合应用滤除白细胞和亚甲蓝光化学灭活病毒法对新鲜血浆处理前后的主要成分影响不大,可以满足临床安全输血的需求。

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响分析

目的探讨亚甲蓝光化学法灭活对于血浆质量的影响。方法于2011年3月至2012年3月随机抽取新鲜血浆,进行亚甲蓝光化学法病毒灭活,并检测其在灭活前后质量的变化,包括凝血因子活性及蛋白质含量。结果在进行亚甲蓝光化学法血浆灭活后,将其各项质量指标的数据与灭活之前相比较,并使用统计学处理,P>0.05,实施两组数据没有显著差异。结论亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量几乎没有影响,与新鲜血浆的临床效果无异,该灭活方法值得推广。

亚甲蓝光化学法病毒灭活前后血浆凝血因子等的质量分析

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活前后血浆成分的活性与含量,为国家制定病毒灭活血浆的质量标准提供参考依据。方法随机抽取40人份全血按照标准操作规程制备新鲜血浆和病毒灭活新鲜血浆,同1人份制备的新鲜血浆分2组留样,1组为不灭活的新鲜血浆(记为灭活前组),另1组为病毒灭活后新鲜血浆(记为灭活后组),检测灭活前后样本的FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg和总蛋白含量的变化。结果病毒灭活前后FⅡ∶C、FⅤ∶C、FⅦ∶C、FⅧ∶C、FⅨ∶C、FⅩ∶C、Fg的含量比较:t值分别为7.335 2、6.169 3、6.091 3、6.808 1、10.397 2、7.448 3、13.806 1,均为P<0.05;总蛋白含量:灭活前61.5±6.98、灭活后62.00±5.93,t为0.422 9,P>0.05。结论血浆经亚甲蓝灭活处理后6种凝血因子活性及纤维蛋白原含量均降低,总蛋白含量无明显差异,说明病毒灭活对血浆成分的活性损伤是存在的,但在可接受的范围内。

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响

目的:探讨亚甲蓝(methyleneblue,MB)光化学法病毒灭活血浆对凝血因子的影响。方法:制备过程中随机抽取新鲜血浆120人份,根据新鲜血浆进行病毒灭活情况分为对照组和试验组,分别对上述两组标本进行PT、APTT、TT、Fg、FⅤ、FⅧ、TP测定。对照组,即新鲜冰冻血浆(freshfrozenplasma,FFP)组,不进行病毒灭活,直接进行检测;试验组,即病毒灭活血浆组,先对其进行MB法病毒灭活,后再检测。结果:试验组中APTT、FⅤ、FⅧ水平与对照组比较差异有显著性(P<0.01),PT、TT、Fg、TP较对照组无显著变化(P>0.05)。结论:MB法病毒灭活对于新鲜血浆中内源性凝血因子,特别是不稳定因子FⅤ、FⅧ有显著影响,对外源性凝血因子及血浆蛋白成分影响不大。

亚甲蓝光化学法病毒灭活对新鲜冰冻血浆有效成分的影响

目的了解亚甲蓝光化学法病毒灭活对新鲜冰冻血浆有效成分的影响,为临床治疗提供依据。方法取50袋(400 ml/袋)新鲜无偿献血者血液,在6 h内完成血浆分离,并立即行亚甲蓝光化学法病毒灭活(灭活条件为光照度35 000 LUX、温度4℃、作用时间30 min),灭活前后留取小辫,贴好标签后立即置速冻冰箱冻存;冻存1周后37℃依次解冻,采用凝固法检测Ⅷ因子含量、双缩脲法检测总蛋白含量,以灭活后含量/灭活前含量计算有效成分保有率。结果亚甲蓝光化学法病毒灭活前后血浆Ⅷ因子及总蛋白含量均较灭活前显著降低(P均<0.05),其保有率分别为80.88%、95.69%。结论对血浆进行亚甲蓝光化学法病毒灭活可导致Ⅷ因子含量减低;由新鲜冰冻血浆和普通冰冻血浆制备的病毒灭活血浆需考虑用于不同患者。

亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆质量的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活对不同规格血浆质量的影响,为临床应用病毒灭活血浆提供参考依据。方法测定90份血浆(包含25份100 ml/袋和10份50 ml/袋)病毒灭活前、后的Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量,PT、APTT的变化情况;同时测定20份病毒灭活血浆(包含10份150 ml/袋和10份200 ml/袋)的有效Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和总蛋白含量;PT、APTT的变化情况。结果 Fib、Ⅴ因子、Ⅷ因子和APTT灭活前后差异比较:t值分别为10.30、14.09、12.15、5.00,P<0.05;TP的回收率为97.13%;Fib的回收率为82.1%;Ⅴ因子的回收率为81.3%;Ⅷ因子的回收率82.9%。不同规格的病毒灭活血浆除Fib和Ⅷ因子有差异(大规格优于小规格)。结论经MB-P病毒灭活的血浆,提高输血安全的同时也造成有效成分一定程度的损失,在临床应用时应在原来的剂量基础上增加约20%的用量,同等输注量尽量减少使用的血浆袋数,有利于达到预期效果,也可减少输血不良反应的发生。

研究亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆有效成分的影响

目的探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆主要质量指标的影响及亚甲蓝残留情况。方法分别于病毒灭活前和病毒灭活后无菌留取血浆标本,对凝血因子Ⅴ、Ⅷ、Ⅸ、血浆纤维蛋白原(Fg)、血浆总蛋白(TP)的含量及病毒灭活血浆亚甲蓝残留量进行测定。结果亚甲蓝光化学法病毒灭活对血浆蛋白浓度无明显影响,而凝血因子、纤维蛋白原含量均有一定程度的降低,但仍然符合国家标准,经过滤除去亚甲蓝,其亚甲蓝残留量小于0.3μmol/L,符合质量标准。结论亚甲蓝光化学法是一种安全、有效、实用的单袋血浆病毒灭活的方法。

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的制备应用探讨

目的探讨亚甲蓝光化学法（MB-P）病毒灭活前后新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fib）和总蛋白（TP）、亚甲蓝浓度及血浆容量的变化,为临床应用病毒灭活血浆提供依据。方法随机抽取2015年7月-12月（每月10份）60份新鲜血浆,分成两组,一组进行病毒灭活,一组不灭活,灭活前后留样,制成新鲜冰冻血浆,48小时后融化,分别对病毒灭活前后血浆中的凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fib）和总蛋白（TP）的含量进行测定,并检测病毒灭活前后血浆中亚甲蓝浓度和称取病毒灭活过滤MB前后血浆的重量,同时计算有效成分的回收率。结果经病毒灭活后新鲜冰冻血浆中凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fib）和总蛋白（TP）的含量及亚甲蓝浓度、血浆重量明显降低,各项指标均有显著变化,P〈0.01,差异均有统计学意义,凝血因子Ⅷ（FⅧ）、纤维蛋白原（Fib）和总蛋白（TP）回收率分别为84.81%、82.46%和93.76%,亚甲蓝的清除率可达83.93%,血浆回收率为93.97%。结论经MB-P病毒灭活血浆能提高血浆输注的安全性,同时,血浆中的有效成分及容量也有一定程度的损失,应加强从采血到血浆病毒灭活各环节的冷链及时间控制,严格按操作规程操作,保证原料血浆的有效成分处于较高水平。

探讨亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆的容量控制

目的探讨亚甲蓝病毒灭活血浆容量质量控制的方法,保证血液安全有效。方法用电子称称量原料液体血浆的重量,通过病毒灭活前后对血浆重量的称量对比,计算出血浆灭活后的过滤损失量,根据过滤损失量、血袋重量计算出需要留取的原料血浆量。结果制备的病毒灭活血浆既符合《全血及成分血质量要求》(GB18469-2012)容量要求,又满足本站血浆容量以50 m L进制的要求,也减少了血浆不必要的浪费,即节约了成本,又保证了病毒灭活后血浆的质量。结论血浆病毒灭活技术的应用对血液容量有一定损耗,应对制备前原料血浆容量及操作过程采用有效措施,保证成分血液的容量。

亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆外泌体微小RNA差异表达谱分析

目的 探讨亚甲蓝光化学法(methylene blue photochemistry,MB-P)病毒灭活对血浆外泌体微小RNA(microRNA,miRNA)表达的影响,以期为MB-P病毒灭活血浆的质量控制提供新的参考指标。方法 收集2021年7月—2022年4月采集的健康无偿献血者全血11人份。离心获得血浆,同一人份新鲜血浆分为2份,分别制备为新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)和MB-P病毒灭活血浆。采用差速离心法提取血浆中的外泌体,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)仪对提取的外泌体进行鉴定,并利用芯片技术检测外泌体miRNA的表达谱。采用qRT-PCR法对差异表达的4个miRNA进行验证,生物信息学方法预测差异表达miRNA的靶基因,并对差异表达基因进行GO功能富集分析和KEGG信号通路分析。结果 提取的两组囊泡状物质的形态特征及直径大小均符合外泌体特征。与对照组比较,MB-P组血浆外泌体中存在14个差异表达的miRNA,其中6个miRNA表达上调,8个miRNA表达下调。qRT-PCR验证结果与芯片表达趋势一致。差异表达的miRNA靶基因涉及DNA结合、离子结合、催化活性等功能,并参与核酸代谢、生物合成、转录调控等多种生物学过程;富集显著的功能通路与病毒感染性疾病、肿瘤、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路等密切相关。结论 MB-P病毒灭活血浆和FFP外泌体miRNA存在差异性表达,血浆外泌体miRNA有望成为MB-P病毒灭活血浆质量评价的潜在参考指标。

LED白光的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活研究

目的探讨LED白光的亚甲蓝光化学法对血浆中的病毒灭活效果。方法血浆中加入终浓度为1μM的亚甲蓝,以LED白光为光源,比较不同处理方式(10 cm/5 cm照射间距、单侧/双侧照射)、不同照射强度(30000 lx、35000 lx、40000 lx、45000 lx、50000 lx)和不同处理时间点(10 min、20 min、30 min)的血浆中凝血因子的活性及Sindbis病毒的灭活效果。结果在50000 lx照射强度下,随着照射时间的增加,血浆温度逐渐升高,升温幅度为5 cm间距>10 cm间距,双侧照射>单侧照射。5 cm/10 cm间距、单侧/双侧照射对凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原(FIB)活性的影响均没有显著差异。以10 cm间距、双侧照射的处理方式作为病毒灭活装置条件参数,用30000 lx、35000 lx、40000 lx、45000 lx和50000 lx的光照强度分别照射5 min后,血浆中Sindbis病毒被灭活,滴度下降均>4 LogTCID50/0.1 mL;照射20 min后,血浆中凝血因子Ⅷ活性>70%、FIB活性>60%。光照强度与凝血因子损失的相关分析表明:不同的光照强度与凝血因子Ⅷ的活性损失没有相关性,光照的强度对FIB的影响表现在照射的20 min以内,照射强度越大FIB活性下降越严重,但照射30 min后不同的光照强度对FIB的影响已没有显著性差异。照射时间与凝血因子的损失高度相关,不同光照强度下凝血因子都随着照射时间的增加而损失。结论LED白光可以作为亚甲蓝病毒灭活方法的新光源,在合适的条件下有效灭活血浆中的病毒,并保留血浆中凝血因子的活性。

乳糜血对亚甲蓝光化学法制备病毒灭活血浆的影响

目的探讨乳糜血浆经亚甲蓝光化学法病毒灭活后，产品外观、血浆蛋白含量及亚甲蓝残留量是否符合GB18469《全血及成分血质量要求》，为临床合理使用血浆提供参考。方法血站采集后保存48h内的无偿献血者血液，离心分离出血浆，用作者自制比浊图片卡按乳糜血指数≤2，3～5，〉5标准选出轻、中、重度三组乳糜血浆（100ml／袋）各20袋作为研究对象，同时在光照度35000lUX、温度4℃作用30min，进行亚甲蓝光化学法病毒灭活，然后按标准操作规程检测各袋病毒灭活血浆外观、血浆蛋白含量、亚甲蓝残留量。结果轻度乳糜血病毒灭活产品外观呈淡黄色澄清液体、血浆蛋白含量〉50g／L、亚甲蓝残留量（0．210±0．024）μmol／L；中度乳糜血病毒灭活产品外观呈淡黄色或淡绿色澄清液体、血浆蛋白含量〉50g／L、亚甲蓝残留量（0．261±0．031）μmol／L；重度乳糜血病毒灭活产品外观呈淡绿色浑浊不透明液体、血浆蛋白含量〉50g／L亚甲蓝残留量（0．3424-0．029）μmol／L；且亚甲蓝残留量与乳糜血程度呈正相关，轻、中度组比较t=5．67，P〈0．01，中、重度组比较t=8．32，P〈0．01，轻、重度组比较t=15．3，P〈0．01。结论轻、中度乳糜血经亚甲蓝光化学法制备病毒灭活血浆符合GB18469，可供临床使用；重度乳糜血制备病毒灭活血浆除血浆蛋白符合标准外，血浆外观、亚甲蓝残留量均不符合GB18469，不适合供给临床。

亚甲蓝/光化学灭活病毒方法对血浆成分的影响

亚甲蓝 /光化学法可有效地灭活血浆中的病毒。为进一步观察该法对灭活血浆中诸成分的免疫活性及生化指标的影响 ,本研究用灭活病毒的条件处理单采血浆。将含有 1μmol/L亚甲蓝的血浆置于照度为 4 0 0 0 0lux的可见光下 ,在室温条件下处理 1小时。结果表明 ,除凝血因子Ⅷ ,PT和APTT有一定程度降低外 ,其它血浆蛋白活性未见明显变化 ,血浆中的白蛋白、葡萄糖、多种无机盐含量及血浆 pH值未受影响。处理后的血浆经不同电泳及免疫化学技术分析 ,未见新的抗原产生 ,电泳迁移率与未处理组相同。结论 :亚甲蓝

亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响

背景:对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的:观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法:随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论:血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为(96.39±1.73)%、(82.55±9.25)%、(81.03±15.27)%、(93.25±6.17)%、(81.61±14.25)%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。

荧光定量PCR技术评价亚甲蓝光化学法病毒灭活效果的研究

本研究探讨利用荧光定量PCR技术评价Sindbis病毒经亚甲蓝光化学处理后灭活效果的可行性。研究采用不同光照强度对Sindbis病毒进行亚甲蓝光化学灭活处理,并用SYBR Green I荧光定量PCR对Sindbis病毒的cDNA进行扩增,同时以细胞病变法做平行对照以测定病毒残余滴度。结果显示在亚甲蓝光化学处理过程中,随着光照强度的增强,病毒残余滴度由6.50 LgTCID50/mL逐渐降低至检测限以下,同时病毒核酸的拷贝数显著下降(P<0.05),并与病毒感染性的降低呈线性相关(R2>0.98)。以上结果表明,亚甲蓝光化学灭活法对Sindbis病毒核酸有破坏作用,病毒核酸损伤程度随光照强度的增强而增加,且与病毒感染性的降低存在相关性,提示荧光定量PCR技术评价亚甲蓝光化学法的病毒灭活效果具有可行性。

亚甲蓝/光化学法体外灭活RNA包膜病毒的实验研究

目的 研究亚甲蓝 (MB) /光化学法灭活 RNA包膜病毒的动力力参数条件。方法 以日本脑炎病毒为指示病毒 ,以与 MB最大吸收波长相匹配的单波长点阵式发光二极管为光源 ,将指示病毒与不同浓度的 MB工作液混合后 ,收集不同光照时间和距离的 MB/病毒混合液 ,将其接种于 Vero单层细胞后 ,空班法测定病毒滴度。结果 当光源光照度一定时 ,MB工作浓度、光源光照时间和距离是影响 MB/光化学法灭活病毒的主要动力学参数 ,1.0μg/ m l的 MB工作浓度可在理想的时间内 (≤ 5 m in)完全杀灭一定光照距离范围内 (≤ 2 .5 m )的病毒 ,同时 ,适当地延长光照时间 (≥ 2 5 m in) ,可完全杀灭更远光照距离的病毒 (≤ 3.0 m )。结论 MB/光化学法可在体外安全高效地杀灭 RNA包膜病毒 ;在光源光照度一定的条件下 ,MB工作浓度、光源光照时间和距离均可影响MB/光化学法灭活病毒的作用效果。