组织化学染色技术在超薄生物塑化标本中的应用

目的探讨组织化学染色技术是否可以应用于塑化标本并验证染色塑化标本是否具有自发荧光。方法选取1个手掌标本经超薄生物塑化技术做成组织块,进行连续切片,切片数量56张,并按切片顺序进行染色处理:原始切片,苏木素-伊红染色,凡尔霍夫-酸性品红染色,亚甲蓝-天青Ⅱ号染色,在扫描仪、光学显微镜和激光扫描共焦显微镜下观察染色效果和组织结构特点并进行比较。结果 3种染色技术都可应用于塑化切片染色。苏木素-伊红染色显示肌肉、结缔组织呈红色或紫红色,骨质呈紫蓝色或蓝色。凡尔霍夫-酸性品红染色显示弹力纤维呈黑色,胶原呈红色,其他组织为黄色或棕黄色。亚甲蓝-天青Ⅱ号染色显示肌腱呈紫红色,骨质呈粉红色,软骨呈紫罗兰,其他组织呈紫色。但细胞内结构的染色效果并不理想。在激光扫描共焦显微镜下,胶原纤维、弹力纤维和肌肉纤维具有自发荧光,结构清晰可辨。结论常用的组织化学染色技术适合于超薄塑化切片染色,染色切片的各种组织结构比未染色的观察效果好。染色后,塑化切片中具有自发荧光的结构在激光扫描共焦显微镜下亦可清晰显影。

血管紧张素Ⅱ对心脏成纤维细胞PTEN基因表达及增殖的影响

目的以AngⅡ刺激乳鼠心脏成纤维细胞(CFC),观察CFC的增殖情况以及第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达。方法以AngⅡ(1×10-7mmol/L)刺激分离培养的CFC,以MTT法检测成纤维细胞的增殖情况,以RT-PCR的方法检测PTEN及TGF-β1基因表达。结果MTT测定的结果:32 h后AngⅡ刺激组的吸光值(A)显著高于该时间点对照组(P<0.05),与正常对照组相比,AngⅡ作用组PTEN基因表达显著下降(P<0.05),TGF-β1基因显著上调(P<0.05)。结论在AngⅡ的刺激下,CFC的TGF-β1表达上调,抑制PTEN基因表达,并引起细胞增殖。

肿瘤耐药相关基因对骨肉瘤新辅助化疗耐药的评估价值

目的探究第10号染色体缺失性磷酸酶-张力蛋白同源物基因(PTEN)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)、多药耐药基因1(MDR1)对骨肉瘤新辅助化疗耐药的评估价值。方法选取2020年7月至2022年7月在河北省张家口市第一医院确诊并治疗的106例骨肉瘤患者,根据新辅助化疗结果分为化疗敏感组(74例)和化疗耐药组(32例)。采用免疫组织化学染色法、蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PTEN、TOPOⅡ、MDR1蛋白表达情况。采用Logistic回归模型分析骨肉瘤新辅助化疗耐药的影响因素。采用受试者工作特征曲线分析外周血PTEN、TOPOⅡ、MDR1 mRNA表达水平对骨肉瘤新辅助化疗耐药的评估价值。结果免疫组织化学染色结果显示,化疗耐药组PTEN阳性表达率低于化疗敏感组(P<0.05),TOPOⅡ、MDR1阳性表达率均高于化疗敏感组(均P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,化疗耐药组PTEN表达量低于化疗敏感组,TOPOⅡ和MDR1表达量均高于化疗敏感组(均P<0.05)。RT-PCR法结果显示,化疗耐药组PTEN mRNA表达水平低于化疗敏感组[(0.34±0.07)比(2.87±0.69)],TOPOⅡ、MDR1 mRNA表达水平均高于化疗敏感组[(3.22±0.77)比(0.86±0.21),(3.00±0.67)比(0.94±0.23)](均P<0.05)。结论PTEN、TOPOⅡ、MDR1联合检测对骨肉瘤新辅助化疗耐药有较好的评估作用,这对于早期筛选出新辅助化疗耐药患者有重要的指导意义。