蛋白质磷酸化和亚硝基化互作对宰后羊肉嫩度的影响

以宰后羊背最长肌为研究对象,利用磷酸酶抑制剂、激酶抑制剂、S-亚硝基谷胱甘肽和一氧化氮合成酶抑制剂分别调控肉糜样品的磷酸化和亚硝基化修饰程度,通过分析孵育期间(4℃)样品的磷酸化水平、亚硝基化水平、pH值、肌原纤维小片化指数、肌间线蛋白和肌钙蛋白-T降解程度等指标的变化,探究蛋白质磷酸化和亚硝基化互作对宰后羊肉嫩度的影响。结果表明:在孵育前期(12h)和后期(48~72h),磷酸化处理组样品的磷酸化水平显著高于磷酸化和亚硝基化共同处理组(P<0.05),蛋白质亚硝基化会抑制磷酸化修饰反应。当磷酸化和亚硝基化修饰共同作用时,磷酸化修饰对pH值的影响占主导作用,并且亚硝基化可能会促进磷酸化对pH值的进一步影响;相反,蛋白质亚硝基化对宰后羊背最长肌肌原纤维内部结构的破坏起主要作用。当磷酸化和亚硝基化修饰共同存在时,蛋白质磷酸化抑制蛋白质亚硝基化反应,而蛋白质亚硝基化可能会促进蛋白质磷酸化对肌间线蛋白降解的抑制作用。在宰后孵育过程中,蛋白质磷酸化和蛋白质亚硝基化在不同反应时期调控作用不同,但最终均会使肌钙蛋白-T的降解程度下降。综上所述,蛋白质磷酸化和亚硝基化修饰互作负向影响宰后羊肉嫩度。

大蒜素上调蛋白亚硝基化抗动脉粥样硬化研究

目的观察大蒜素对高胆固醇饮食诱导的apoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展的影响,并从蛋白亚硝基化方面探讨其可能的作用机制。方法 30只apoE-/-小鼠随机分3组:对照组(生理盐水,ig)、低剂量组(大蒜素,9mg/kg·d,ig)、高剂量组(大蒜素,18mg/kg·d,ig)。高胆固醇饮食喂养12周,分别于第0、4、8、12周采血检测血脂水平,处理结束后,检测血浆氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)水平;利用苏木精伊红染色与范吉尔森弹性纤维染色观察主动脉根部组织学变化;免疫组化染色检测动脉粥样硬化斑块内巨噬细胞和血管平滑肌细胞含量;免疫荧光观察主动脉根部蛋白亚硝基化水平的变化。另外,以人脐静脉内皮细胞为体外模型,将其与ox-LDL(50μg/mL)共同培养24h,并用不同剂量(10μmol/L和20μmol/L)大蒜素加以处理,分别采用硝酸还原酶法和免疫荧光法检测细胞上清NO及细胞蛋白亚硝基化水平。结果组织学分析发现,大蒜素组小鼠主动脉根部斑块面积及斑块内巨噬细胞和血管平滑肌细胞含量明显较对照组少(P<0.05)。与对照组相比,大蒜素组小鼠血浆MDA、ox-LDL、TNF-α水平明显降低(P<0.05),血浆NO水平及主动脉根部蛋白亚硝基化水平明显升高(P<0.05),但对其血脂水平无明显影响。体外实验结果显示,与对照组相比,大蒜素能够显著恢复由ox-LDL所导致的人脐静脉内皮细胞的NO和蛋白亚硝基化水平的减少(P<0.01)。结论大蒜素能够有效抑制动脉粥样硬化的进展,其作用机制可能与大蒜素通过上调内皮细胞蛋白亚硝基化水平所发挥抗氧化应激和抗炎作用有关。

香烟提取物对人脐静脉内皮细胞蛋白亚硝基化的影响及机制

目的探讨香烟提取物(CSE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)蛋白亚硝基化的影响。方法以HUVEC为体外模型,利用免疫荧光染色对细胞蛋白亚硝基化进行检测,并用生物素转化方法对荧光结果进行验证;利用Western blot对蛋白进行了检测;另外,在实验过程中,对超氧阴离子水平也进行了检测。结果不同浓度CSE(0.005%、0.01%、0.02%和0.04%)均能够明显减少蛋白的亚硝基化水平,且随着浓度增加,蛋白亚硝基化水平减少越明显。NO供体药物硝普钠(SNP)、内源性供体亚硝基谷胱甘肽(GSNO)、长效NO供体NO亲和复合体(NONOate)和NADPH氧化酶抑制剂加拿大麻素均能够恢复被CSE所导致的蛋白亚硝基化减少。另外,CSE能够增加超氧阴离子水平,这种作用能够被加拿大麻素所抑制。结论 CSE能够减少HUVEC蛋白亚硝基化水平。这种作用与其激活NDAPH氧化酶所引起的超氧阴离子积聚和NO产生通路的阻断有关。

蛋白质巯基亚硝基化对细胞功能的调控作用

近年来,人们发现一氧化氮（nitric oxide,NO）可对半胱氨酸巯基（-SH）进行氧化修饰,生成低分子量的亚硝基硫醇（RSNO）和高分子量的亚硝基化蛋白质（S-nitrosylated protein,PSNO）,前者包括亚硝基半胱氨酸（S-nitrosocysteine,CyS-SNO）和亚硝基半胱氨酸（S—nitrosocysteine，CyS—SNO）和亚硝基谷胱甘肽（Js—nitrosoglutathione，GSNO），后者又称蛋白质巯基亚硝基化（proteinS—nitrosylation）。

蛋白亚硝基化研究进展及其在植物抗病中的作用

蛋白亚硝基化(S-nitrosylation)是一种在一氧化氮作用下与蛋白半胱氨酸巯基共价结合,使巯基-SH转化为-SNO的反应。作为一种氧化还原依赖的翻译后调控形式,蛋白亚硝基化对多种蛋白的功能具有调节作用,越来越多的证据表明蛋白亚硝基化在植物抗病中发挥重要的作用。简要介绍了蛋白巯基亚硝基化的特点、检测方法、功能研究以及在植物抗病调节方面的最新进展。

小鼠朊病毒病脑组织中NO/NOS系统与水孔通道蛋白亚硝基化修饰的相关性

目的研究小鼠朊病毒病脑组织中一氧化氮/一氧化氮合酶(NO/NOS)系统与水孔通道蛋白亚硝基化修饰(SNO-AQP1)的相关性。方法以朊病毒毒株139A、ME7感染的小鼠为实验模型,制备不同感染期的脑组织匀浆液,应用NO、NOS测试盒测定朊病毒病小鼠潜伏期内不同时间点脑组织内NO含量和NOS活力,并利用免疫印迹法对NOS、水孔通道蛋白(aquaporin,AQP1)及亚硝基化AQP1(SNOAQP1)等蛋白的含量进行检测。结果朊病毒毒株139A感染的小鼠脑组织中,感染中期(86d,117d、147d)NO含量增加,NOS的活力同时增强;而终末期(177d)NO含量下降,同时NOS活力相对减弱。朊病毒毒株ME7感染的小鼠脑组织中,86d时NO含量急剧增加,NOS活力增强,而在177d终末期时,NO含量降低、NOS活力也减弱。免疫印迹法显示,NOS含量因毒株的不同有一定差异,在139A和ME7感染小鼠的小脑组织中,分别以86d和117d为最高,之后逐渐降低,其变化趋势与NOS活力变化趋势不一致。139A毒株AQP1蛋白在86d显著升高,之后下降,从117d至终末期差异无统计学意义,而ME7株所有时间点无变化。但在两种毒株感染的小鼠小脑组织中,SNO-AQP1含量的变化规律均是在感染中期(86d、117d、147d)升高,终末期降低。结论小鼠朊病毒病脑组织中SNO-AQP1水平受NO/NOS系统中NOS活性影响而与NOS含量无关。

动力相关蛋白Drp1在羊瘙痒因子139A感染小鼠脑组织中变化的研究

目的研究动力相关蛋白1(Drp1)在羊瘙痒因子139A感染的小鼠脑组织中的变化。方法采用Western Blot方法检测Drp1在羊瘙痒因子139A感染的脑组织匀浆中的含量变化及其亚硝基化水平。采用组织免疫荧光方法检测Drp1在脑组织中的分布。结果在羊瘙痒因子139A感染终末期小鼠脑组织匀浆中,Drp1总量略有降低。对感染不同时间点的动态分析结果显示Drp1含量呈逐渐降低趋势,终末期稍有回升。感染终末期脑组织中亚硝基化水平明显增高。组织免疫荧光显示正常和羊瘙痒因子139A感染终末期小鼠脑组织中,Drp1与神经元细胞存在共定位现象。结论Drp1在小鼠中枢神经系统中主要分布于神经元细胞,在羊瘙痒因子139A感染的小鼠脑组织中,Drp1总量略有降低,另外亚硝基化水平明显增高,提示在羊瘙痒病感染的小鼠脑组织中,线粒体动力相关蛋白的表达量及翻译后修饰水平出现了变化,在感染过程中起着重要作用。

活性氮对细胞保护和损伤作用研究进展

活性氮(reactive nitrogen species,RNS)影响细胞内氧化还原平衡,诱导蛋白质翻译后修饰(post-translational modification,PTM),在生理条件下作为信号分子参与细胞信号传导。但是过量的RNS会引起亚硝基化应激导致细胞的损伤,并与肿瘤的发生和发展以及治疗效果等密切相关。本文阐述RNS在生理条件下的作用及在肿瘤发生和发展中的研究进展,为新药的研发和疾病的治疗提供思路。