淫羊藿苷对糖尿病大鼠睾丸中亚硝基谷胱甘肽还原酶及Bcl-2的影响

目的：初步探讨淫羊藿苷（ICA）干预下亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）在糖尿病大鼠睾丸中表达。方法：链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，低、中、高（30、 70、 100mg/kg）淫羊藿苷灌胃21d，光镜观察大鼠睾丸形态学变化，检测外周血血糖、雌二醇及睾酮水平。免疫组织化学检测GSNOR及Bcl2在睾丸中的表达。结果：中剂量组血糖明显降低，低、中剂量组睾酮与雌二醇比值升高；GSNOR主要表达在精母细胞及精子细胞，与对照组相比，低、中剂量组灰度值较高。Bcl-2蛋白主要表达在睾丸间质细胞，与对照组相比，低、中剂量组阳性细胞数明显增多。结论：淫羊藿苷可稳定糖尿病大鼠血糖，提高睾酮与雌二醇比值对睾丸有保护作用，其作用可能与减少睾丸间质细胞凋亡，提高Bcl-2及GSNOR蛋白表达，抵抗亚硝化应激有关。

淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡及亚硝基谷胱甘肽还原酶表达的影响

目的：探讨淫羊藿苷对糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡以及亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）表达的影响.方法：采用链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型.分为正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病淫羊藿苷干预组（高、中、低剂量分别为30、70、100 mg·kg^-1·d^-1,灌胃,连用21 d）.TUNEL法检测阴茎组织细胞凋亡,免疫印迹检测GSNOR表达.结果：淫羊藿苷高、中剂量组阴茎勃起组织细胞凋亡指数降低,与模型组比较差异有统计学意义.淫羊藿苷干预组阴茎组织GSNOR蛋白表达增加,中、高剂量组与模型组比较差异有统计学意义.结论：淫羊藿苷能抑制糖尿病大鼠阴茎组织细胞凋亡并上调GSNOR蛋白表达.

植物亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)功能的研究进展

亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)能通过还原亚硝基谷胱甘肽(GSNO)途径调节细胞内一氧化氮(NO)和亚硝基硫醇(SNOs)水平,保护机体免受亚硝化胁迫的影响。在植物体内,GSNOR作为催化调节NO及其代谢物SNOs水平的关键酶,参与植物生长、抵御病原菌、热耐受性、细胞死亡和镉胁迫等多种生理过程。综述GSNOR功能的研究进展,分析存在的问题,有望为红掌、合果芋等热带观赏植物基因工程提供理论基础。

植物亚硝基谷胱甘肽还原酶在胁迫反应中的作用研究

信号分子一氧化氮(Nitric oxide,NO)参与植物的许多生理反应过程,例如:萌发、气孔的关闭、侧根的发育以及生物与非生物的胁迫反应过程等,主要的调控形式是与半胱氨酸上的硫基发生可逆的S-亚硝基化作用。NO的半衰期很短,这限制了它在细胞中的生理功能,与胞内含硫基的分子形成的S-亚硝基硫醇(S-nitrosothiols,SNOs)的化学性质稳定,在植物的生长发育及抗逆过程中SNOs参与NO的运输、扩散、储存以及蛋白的翻译后修饰过程。谷胱甘肽(Glutathione,GSH)与NO发生S-亚硝基化作用形成S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO),GSNO作为NO的储存与转运形式,可以把NO转到靶蛋白上,使靶蛋白发生亚硝基化。亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-Nitrosoglutathione reductase,GSNOR)是生物体中的一类保守蛋白,通过还原亚硝基谷胱甘肽从而调节细胞内NO及亚硝基硫醇(S-nitrosothiols,SNOs)水平,保护机体免受亚硝化的胁迫,间接的调控的细胞的氧化状态。GSNO是一个天然的NO储存库,GSNOR是调节机体亚硝基化水平的关键基因。主要对GSNOR参与的植物生长发育、生物与非生物胁迫等过程进行了概述,探讨GSNOR在植物生长发育及胁迫反应中的作用机制,将有助于我们对NO生理功能的了解,旨在为将来GSNOR的研究提供理论参考和思路。

亚硝基谷胱甘肽还原酶GSNOR1正调控植物对疫霉菌的抗性

疫霉属(Phytophthora)卵菌引致马铃薯晚疫病等作物灾难性病害,严重威胁作物的可持续生产。由于病菌毒性变异,导致品种抗病性丧失问题突出。因此,挖掘植物广谱和持久抗病基因,并探索其在抗病育种中的有效利用具有重要的科学意义。亚硝基谷胱甘肽还原酶1(GSNOR1)是植物氮信号通路中高度保守的关键还原酶,其参与调节R基因介导的植物抗性和非寄主抗性。然而,GSNOR1参与抗疫霉菌的免疫功能和作用机理尚不清楚。本研究中,借助拟南芥与寄生疫霉菌互作的模式体系,首先发现拟南芥T-DNA插入突变体gsnor1-3对寄生疫霉菌呈现感病表型。进一步利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)降低烟草叶片中GSNOR1同源基因的表达量,在此基础上,通过抗病表型分析以及一系列抗性相关功能的检测,结果表明,沉默本氏烟草GSNOR1同源基因能够在寄生疫霉菌侵染植物的过程中削弱植物体内的活性氧(ROS)迸发、病程相关基因(PR genes)的诱导表达以及MAPK信号转导,从而增强了植物对疫霉菌的感病性。本研究揭示了植物GSNOR1对疫霉菌具有高度保守的抗性功能,并初步解析了GSNOR1正调控植物抗疫霉菌的作用机理,为进一步探索GSNOR1在马铃薯抗晚疫病中的功能及其在抗病育种中的有效利用奠定了重要的理论基础。

大豆谷胱甘肽还原酶基因的扩增及连作胁迫应答

利用数据库Phytozome获得大豆胱甘肽还原酶(Glutathione reductase,GR)基因4个成员的编码序列(Coding sequence,CDS)序列,以大豆叶片和根中RNA为模板,经RT-PCR扩增获得Glyma10g03740和Glyma02g16010基因,二者大小均为1638 bp,基因结构相似;获得Glyma16g27210和Glyma02g08180基因,二者结构相似,基因大小均为1506 bp。系统进化分析显示,Glyma10g03740/Glyma02g16010和Glyma16g27210/Glyma02g08180蛋白聚类于不同分支,但分别都与豇豆、尖叶菜豆和芸豆亲缘关系最近。4个成员的结构域相同,均含有FAD/NAD-binding_dom结构域和Pyr_nucl-dis_OxRdtase_dimer结构域。三级结构显示Glyma16g27210和Glyma02g08180构象相似,Glyma10g03740和Glyma02g16010构象相似,4个蛋白均以二聚体结构存在,互作蛋白完全相同,包括2个硫氧还蛋白还原酶和8个硫氧还蛋白。RT-qPCR方法分析GRs基因对连作逆境的响应,结果显示,在连作胁迫下,敏感品种HF55的GRs基因表达在根中启动较早(出苗后15 d内),而叶片中启动较晚,出苗后45 d时表达仍呈上升趋势;对于抗性品种KX8,根和叶片中GRs基因各成员均在出苗后15~45 d表达量达到最高,30 d时根中GRs基因总表达量增加达19.03倍,叶片中GRs基因总表达量增加2.50倍。

腺苷脱氨酶、5′-核苷酸酶及谷胱甘肽还原酶联合检测在评估乙型肝炎患者肝损伤中的临床价值

[目的]探讨腺苷脱氨酶(ADA)、5′-核苷酸酶(5′-NT)及谷胱甘肽还原酶(GR)联合检测在评估乙型肝炎(CHB)患者肝损伤中的临床价值.[方法]选择2020年1月—2024年6月间就诊的72例CHB患者列入实验组,按照肝损伤不同程度分为轻度组(n=39)、中度组(n=25)、重度组(n=8),另选择同期健康体格检查的72例健康者列入对照组.采集所有研究对象血液样本,检测并比较各组血清ADA、5′-NT、GR水平.[结果]实验组血清ADA、5′-NT、GR水平均明显高于对照组(P<0.05);肝损伤重度组患者的血清ADA、5′-NT、GR水平明显高于中度组、轻度组,中度组血清ADA、5′-NT、GR水平明显高于轻度组,相比较差异均有统计学意义(P<0.05).[结论]血清ADA、5′-NT、GR联合检测可应用于CHB临床辅助诊断及肝损伤程度评估中,为临床诊断与治疗方案制定提供依据.

观察谷胱甘肽还原酶在乙型肝炎病毒感染者肝损伤中的临床意义

分析在乙型肝炎病毒感染者的临床诊断中,采用谷胱甘肽还原酶检测的临床意义。方法 选择我院在2023年1月至2024年1月接诊的120例疑似乙型肝炎病毒感染者,均提供谷胱甘肽还原酶诊断,以病理诊断作为金标准,分析谷胱甘肽还原酶诊断的临床意义。结果 肝组织病理检查(金标准)共检出88例阳性、32例阴性。谷胱甘肽还原酶诊断共检出87例阳性、33例阴性。谷胱甘肽还原酶的敏感度97.73%、特异度为96.88%、准确性97.50%、阳性预测值98.85%、阴性预测值为93.94%。肝硬化患者的谷胱甘肽还原酶高于慢性乙型病毒性肝炎、健康人群、肝癌患者,P<0.05。肝癌患者的天门冬氨酸氨基转移酶酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶高于肝硬化患者、慢性乙型病毒性肝炎、健康人群,P<0.05。结论 在乙型肝炎病毒感染者的临床诊断中,采用谷胱甘肽还原酶具有重要参考价值,可以为临床医师评估肝损伤情况提供参考,应用价值较高。

麻疯树亚硝基谷胱甘肽还原酶(JcGSNOR)的克隆与功能分析

本研究克隆出了麻疯树亚硝基谷胱甘肽还原酶(JcGSNOR)cDNA的全长序列,并分析了其在麻疯树各部位中的表达情况.结果表明,在所有参试的器官中,JcGSNOR基因皆有表达,其中在种子种表达量最大,其次为根茎,叶表达量最少.对新基因编码蛋白的理化性质进行分析后发现JcGSNOR的分子量约为40.256kDa,等电点约为6.74;同源性分析表明,JcGSNOR基因与其它植物GSNOR基因核甘酸序列相似度达到80%以上,说明JcGSNOR是GSNOR蛋白家族的一个新发现的成员.同时将JcGSNOR基因与pYES2表达载体相连接后,克隆进酿酒酵母,并经RT-PCR验证后证实得到JcGSNOR的转基因酵母.利用GSNO敏感性实验分析了JcGSNOR的酶学活性.并在GSNO处理条件下,检测了转基因酵母和野生型的生长曲线.结果表明,JcGSNOR对酵母的生长没有明显影响,但能明显提高酵母中GSNOR的活性.

亚硝基化谷胱甘肽还原酶:一个调控炎症反应的新分子

炎症因子的表达调控是炎症反应的关键步骤,与自身免疫疾病以及癌症等密切相关.一氧化氮(nitric oxide,NO)在炎症因子表达调控中具有重要作用,但已有的研究多关注于NO合成对炎症因子的调控作用,而对NO代谢的作用知之甚少.亚硝基化谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)是体内NO信号通路代谢调控的关键蛋白.本研究发现脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在RAW264.7细胞中上调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的同时下调GSNOR的转录和蛋白质表达,该下调作用依赖MEK1/2、p38和PI3K信号通路.抑制GSNOR可促进LPS诱导的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达,而过表达GSNOR作用相反.抗炎症药物曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)能够挽回LPS对GSNOR的下调作用,并且GSNOR抑制剂削弱了TSA对炎症因子IL-6和TNF-α转录的抑制效应.这些结果表明:GSNOR是一个新的重要炎症调控分子,它可能成为调控NO介导的炎症相关信号通路的新的潜在靶点,上调GSNOR可能是抑制炎症的新思路.本研究揭示了巨噬细胞通过上调iNOS和下调GSNOR共同增强免疫炎症反应的新机制,拓展了对NO代谢在炎症反应中作用机制的认识.

高血压伴冠脉病变患者的影响因素及谷胱甘肽还原酶诊断价值

目的:研究高血压(HTN)伴冠脉病变患者的影响因素及谷胱甘肽还原酶(GR)诊断价值。方法:选取2022年1—10月在南京中医药大学附属苏州市中医医院心内科住院的140例HTN患者作为研究对象,所有患者均进行冠脉CT检查,根据冠脉病变(有、无)情况分为阳性组(n=90)和阴性组(n=50)。比较两组一般资料、GR水平,采用logistic回归分析HTN伴冠脉病变患者的影响因素,分析GR对冠脉病变的诊断价值。结果:两组年龄、合并疾病比较,差异无统计学意义(P>0.05);但两组性别、吸烟史、GR水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic分析结果显示,性别、吸烟史、GR均是发生冠脉病变的独立影响因素(P<0.05)。GR诊断冠脉病变的曲线下面积(AUC)为0.760(95%CI:0.679,0.841,P<0.05),最佳截断值为49.65 U/L时,敏感度为0.678,特异度为0.740。结论:HTN伴冠脉病变患者GR水平升高,性别、吸烟史、GR是HTN患者发生冠脉病变的独立影响因素,GR对HTN患者发生冠脉病变具有一定的辅助诊断价值。

两种不同品牌谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的性能评价

目的评价Beckman Coulter AU5800全自动生化分析仪检测两种不同品牌血清谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的分析性能。方法利用CNAS GL-037《临床化学定量检验程序性能验证指南》评估血清谷胱甘肽还原酶检测试剂盒的正确度、精密度、线性范围和参考区间。评价安徽大千生物工程有限公司和山东中拓生物医学工程科技有限公司两种检测试剂盒的分析性能。结果精密度:安徽大千的总精密度为3.31%和1.33%,山东中拓的总精密度为1.74%和2.15%。正确度:安徽大千的偏倚为6.36%,山东中拓的偏倚为8.0%。线性范围:安徽大千的线性范围为10~200U/L,山东中拓的线性范围为4~300U/L。参考范围:安徽大千和山东中拓均为33~73U/L。结论安徽大千和山东中拓的检测性能指标均符合相关要求。利用CNAS GL-037文件同时可进行同一项目不同试剂品牌的性能比较。

基于S-亚硝基化解析一氧化氮对哈密瓜采后抗环血酸-谷胱甘肽循环的影响

为了探究一氧化氮(NO)对哈密瓜采后贮藏期的抗氧化作用,该研究以“西州蜜17”为试材,采用外源NO精准熏蒸方法,分析测定哈密瓜生理指标、S-亚硝基化水平和抗氧化指标的变化,从S-亚硝基化水平的角度探讨NO对哈密瓜采后抗坏血酸-谷胱甘肽循环(glutathione-ascorbate cycle,AsA-GSH cycle)的影响。结果表明,NO熏蒸能较好地维持哈密瓜贮藏品质,降低果实H 2O 2、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,显著提高果实内源NO和S-亚硝基硫醇(S-nitrosothiols,SNO)含量,抑制S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)活性升高。NO熏蒸可以维持较高的抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)和脱氢抗坏血酸(dehydroascorbate,DHA)的比值(AsA/DHA)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)的比值(GSH/GSSG)。在整个贮藏期,处理组抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)、单脱氢抗坏血酸还原酶、脱氢抗坏血酸还原酶和谷胱甘肽还原酶活性高于对照组。NO熏蒸通过提高哈密瓜果实的S-亚硝基化水平,激活了AsA-GSH循环关键酶的活性,提高了清除H 2O 2的效率,缓解了脂质过氧化,从而维持了哈密瓜采后贮藏品质。

血清谷胱甘肽还原酶在HBV相关性肝病中的应用研究

目的探究血清谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关性肝病中的应用。方法选取2021年4月至2022年4月于我院收治的120例HBV相关性肝病患者作为研究对象,40例健康人群为对照组;病例组为有乙型肝炎病史或乙型肝炎表面抗原阳性超过6个月的患者,同时将病例组分为慢性肝炎(CHB)组55例、肝硬化(HBV-LC)组40例和肝细胞癌(HBV-HCC)组25例。结果4组分析对比影响患者发生HBV相关性肝病与年龄、性别无关(P>0.05),与血清GR、肿瘤分期、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、白球比(Alb/Glb,A/G)、γ-谷氨酰基转移酶(γ-glutamyltransfer-ase,γ-GGT)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、血氨(NH_(3))、甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)及乙肝病毒的脱氧核糖核酸(hepatitis B virus-DNA,HBV-DNA)有关,且与对照组对比,CHB组患者血清GR、肿瘤分期、TBIL、HBV-DNA、GGT、A/G、NH_(3)、ALT及AFP表达上升;与CHB组患者比较,HBV-LC组血清GR、肿瘤分期、A/G、AFP、TBIL、NH_(3)、GGT、ALT及HBV-DNA水平升高;与HBV-LC组相比,HBV-HCC组患者血清GR、肿瘤分期、A/G、ALT、AFP、GGT、NH_(3)、TBIL及HBV-DNA表达有所提升(P<0.05)。血清GR及A/G、TBIL、ALT、GGT、AFP、NH_(3)、HBV-DNA与HBV相关性肝病均呈正相关,水平表达越高预示着病情越严重(P<0.05)。ROC曲线显示,血清GR联合ALT、TBIL、NH_(3)、AFP对HBV相关性肝病有较高的诊断效能(P<0.05)。结论患者发生HBV相关性肝病后血清GR呈高表达,血清GR水平变化与HBV相关性肝病患者病情严重程度有关,且血清GR检测可有效提高对此病症的诊断水平。

谷胱甘肽还原酶、α1酸性糖蛋白水平检测在原发性肝癌患者中诊断价值及临床分期的相关性研究

目的探讨谷胱甘肽还原酶(GR)、α1酸性糖蛋白(α1-AG)水平检测在原发性肝癌患者中诊断价值及临床分期的相关性。方法选取2018年1月至2020年12月本院就诊的98例原发性肝癌患者作为研究组,另选择同期本院98名健康体检者为参照组。两组均接受GR、α1-AG检测,比较两组GR、α1-AG水平,研究组不同临床特征的GR、α1-AG水平,并采用Pearson相关分析GR与α1-AG相关性。结果研究组GR、α1-AG水平均高于参照组,差异有统计学意义(P<0.05)。原发性肝癌患者中不同性别、年龄、体重指数、肿瘤直径、乙肝病毒感染情况、分化程度等临床特征的α1-AG水平比较差异无统计学意义。不同性别、年龄、体重指数、乙肝病毒感染情况、分化程度等临床特征的GR水平比较,差异无统计学意义;临床分期Ⅲ、Ⅳ期GR、α1-AG水平均高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤直径≥5 cm患者GR水平高于<5 cm患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,GR与α1-AG呈正相关(r=0.298,P=0.015)。结论GR、α1-AG可作为原发性肝癌的诊断指标,呈正相关关系,其检测水平与原发性肝癌的临床分期、肿瘤直径有关,有利于判断疾病进展情况。

注射用氟尿嘧啶对晚期胃癌患者亚甲基四氢叶酸还原酶、谷胱甘肽硫转移酶及肿瘤标志物的影响

目的探讨注射用氟尿嘧啶对晚期胃癌患者亚甲基四氢叶酸还原酶(methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR),谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)及肿瘤标志物的影响。方法选取中国人民解放军第63870部队医院2013年8月~2014年8月确诊为晚期胃癌的患者48例,根据随机数字表法随机分为2组:对照组(n=24)予卡培他滨为基础的化疗方案;实验组(n=24)予注射用氟尿嘧啶为基础的化疗方案。观察2组患者血清中MTHFR浓度、GST水平及患者肿瘤标志物(糖类抗原199、癌胚抗原、甲胎蛋白)水平,进而对注射用氟尿嘧啶的疗效机制进行分析。结果与对照组相比,实验组患者血清中亚甲基四氢叶酸还原酶浓度较高(P<0.05),谷胱甘肽硫转移酶活性较低(P<0.05),肿瘤标志物水平降低(P<0.05),临床症状改善的总有效率较高[16(66.67)vs.22(91.67),χ2=4.55,P<0.05],不良反应发生率较低[14(58.33)vs.6(25.00),χ2=5.49,P<0.05]。结论注射用氟尿嘧啶化疗方案能够升高血清中MTHFR浓度,降低GST活性,临床疗效明显、不良反应少、对治疗晚期胃癌具有重要意义。

谷胱甘肽还原酶、甲胎蛋白、a-L-岩藻糖苷酶联合检测在早期诊断原发性肝癌的应用研究

目的探究原发性肝癌早期诊断中谷胱甘肽还原酶(GR)、甲胎蛋白(AFP)、a-L-岩藻糖苷酶(AFU)联合检测的应用效果。方法收集本院肝病科就诊患者100例,分为实验1组原发性肝癌患者和实验2组同期肝脏良性病变患者各50例,同时从体检科选取体检的健康志愿者50例为对照组,对三组人群进行谷胱甘肽还原酶(GR)、甲胎蛋白(AFP)、a-L-岩藻糖苷酶(AFU)检测和数据分析。结果实验1组血清GR、AFU和AFP水平均高于实验2组、对照组(P<0.05)。实验1组GR、AFU和AFP单独与联合检测阳性率均高于实验2组、对照组(P<0.05);实验1组和实验2组GR、AFU和AFP联合检测的阳性率均高于单独检测(P<0.05),联合检测的阳性率为94%,但GR没有差距(P>0.05)。结论原发性肝癌早期诊断中谷胱甘肽还原酶、甲胎蛋白、a-L-岩藻糖苷酶联合检测的应用价值较高。

亚硝基化谷胱甘肽还原酶缺陷导致的S-亚硝基化可引起神经肌肉功能障碍

NO的产生在神经肌肉萎缩病变过程中有重要影响，然而其具体致病机制尚不清楚。最新研究显示，在年幼亚硝基化谷胱甘肽还原酶（ GSNOR）敲除小鼠体内，蛋白质亚硝基化水平的升高会导致肌肉质量减少、肌纤维体积减少和神经病变，从而呈现神经肌肉萎缩表型。这项研究首次揭示GSNOR的缺陷所导致的蛋白质亚硝基化水平升高，而非硝基化水平升高，是引起神经肌肉病变临床表型的原因，并为临床进一步认识、治疗相关性神经肌肉萎缩疾病，如糖尿病、癌症，提供了新的视角和潜在的治疗方案。

茶树谷胱甘肽还原酶基因CsGRs的克隆与表达分析

【目的】克隆谷胱甘肽还原酶基因CsGRs,研究CsGRs在茶树抵御不同逆境胁迫中的作用。【方法】在茶树转录组数据库中搜索茶树CsGRs,根据获得的基因片段,设计反转录PCR(RT-PCR)引物和RACE-PCR特异引物,从茶树中克隆CsGRs的cDNA全长序列,并利用在线生物信息学软件对其进行分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CsGRs在茶树不同组织间的表达差异及其在低温、干旱、高盐胁迫和ABA处理下的表达模式,利用分光光度计测定低温胁迫和干旱胁迫下叶片中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量变化。【结果】RT-PCR克隆获得CsGR1的cDNA全长,其长度为1 827 bp,包含1 482 bp开放阅读框(ORF),编码493个氨基酸;RACE扩增获得712 bp和1 624 bp的5′和3′末端序列,拼接并进行RT-PCR验证后得到CsGR2序列,全长2 282 bp,包含1 698 bp ORF,编码565个氨基酸;CsGR1和CsGR2的GenBank登录号分别为KF906411和KF418080。CsGR1和CsGR2编码的蛋白质分子量分别为53.9 kD和61.0 kD,无信号肽位点,均为非分泌性蛋白。亚细胞定位预测CsGR1主要定位在细胞质等亚细胞中,无叶绿体锚定信号肽位点;CsGR2中N-端的71个氨基酸残基具有叶绿体转运信号功能,主要定位在叶绿体上。序列相似性比较显示,CsGR1与其他植物中胞质GR的相似性均在80%以上,而与叶绿体GR的相似性低于60%;CsGR2与其他叶绿体GR的相似性70%以上,与胞质GR的相似性在50%左右。二者在核酸序列和氨基酸序列水平上分别有63.4%和49.9%的相似性,且蛋白质二级结构也具有较高的相似性。系统发育树显示,CsGR1与胞质GR聚为一类,而CsGR2与叶绿体GR聚在一起,且都与葡萄的亲缘关系最近。二者均含有氧化还原二硫键活性位点、谷胱甘肽结合位点以及NADPH结合的Arg保守位点等结构域。CsGR1为胞质GR,CsGR2为双向定位在叶绿体和线粒体上的叶绿体GR。CsGR1在花和根中表达量较高,在叶片和茎中表达量低;CsGR2在叶片和茎中的表达量比在根和花中的表达量高。在短时胁迫处理24 h过程中,成熟叶片在100μmol·L-1 ABA处理后,CsGR1和CsGR2的表达均被抑制,且CsGR2的抑制作用较显著;在4℃低温胁迫下,CsGR1的表达被抑制,而CsGR2的表达随处理时间延长逐渐被诱导;250 mmol·L-1 NaCl盐胁迫抑制CsGRs的表达,但胁迫24 h时CsGR2的表达被诱导。10%(w/v)PEG胁迫处理茶树8 h,叶片中的CsGRs均被诱导表达,且在复水48 h后CsGR1的表达被显著上调;根中CsGRs的表达在处理和复水48 h过程中均被抑制。随低温胁迫时间延长,茶树叶片中的GSH含量逐渐升高;干旱胁迫也能促进GSH在叶片中的积累,在复水48 h后又恢复到处理前的水平。【结论】克隆了2个茶树CsGRs,2个基因对4℃低温、NaCl盐、10%PEG和ABA处理均具有响应。推测CsGRs在茶树抵御逆境胁迫中起作用。

钙对玉米幼苗谷胱甘肽还原酶活性的影响

CaCl2 浸种或酶提取液中加入CaCl2 均可显著提高两品种玉米幼苗中谷胱甘肽还原酶 (GR)活性 ,且不同钙盐对GR的激活效应基本相同。Ca2 +专一螯合剂EGTA浸种或加入到酶提取液中则可显著抑制GR活性 ,表明GR活性至少部分受Ca2 +调控。