S-nitrosoglutathione诱导胸腺细胞凋亡的机制

目的 研究NO供体亚硝酰谷胱甘肽(GSNO)诱导胸腺细胞凋亡与p53表达的相互关系。方法 体外培养：BALB／C小鼠胸腺细胞，用地塞米松(DXM)作为阳性对照，再分别加不同剂量GSNO及NO抑制剂，孵育3h。用透射电镜观察胸腺细胞形态；用琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯型带纹；采用末端脱氧核酸转移酶(TdT)介导的末端标记在流式细胞仪上检测胸腺细胞凋亡；用RT-PCR的方法分析抑癌基因p53的表达在此过程中的变化及作用。结果胸腺细胞在无巯基S-77培养液中孵育可产生自然凋亡，用不同处理后在透射电镜下可见各组早、中、晚期不同阶段的凋亡细胞的形态，琼脂糖电泳显示DXM组出现较多中、晚期凋亡的胸腺细胞，有明显的DNA梯形条纹，加不同剂量的NO和NO抑制剂组则较弱，NO浓度愈高则梯形条纹愈不明显，0．3mmol／L和0．6mmol／L GSNO呈早中期凋亡形态学变化，1．2mmol／LGSNO主要呈早期改变；PCR结果同DNA电泳结果基本一致；流式细胞仪检测各组的凋亡率也有相同的趋势，各组之间差异有显著性。结论 胸腺细胞在无巯基培养液内孵育3h会产生自然凋亡，GSNO诱导胸腺细胞凋亡随浓度增加反而抑制胸腺细胞凋亡，NOS抑制剂可抑制凋亡，NO供体GSNO通过p53的表达来诱导细胞凋亡是NO引起细胞凋亡的可能机制之一。