基于氯化血红素复合材料的过氧亚硝酸阴离子电化学传感器的构建

构建了一种基于氯化血红素/金纳米粒子/聚三聚氰胺/多壁碳纳米管复合材料修饰玻碳电极的过氧亚硝酸阴离子电化学传感器,并成功用于过氧亚硝酸阴离子的检测。采用循环伏安法和电流-时间曲线考察了过氧亚硝酸阴离子在传感器上的电化学行为,并对传感器的制备条件及过氧亚硝酸阴离子的检测条件进行了优化。结果表明,碳纳米管滴涂量为5μL,金沉积时间为20 s,工作电位为0.8 V时,所制传感器对过氧亚硝酸阴离子的响应最大。在优化实验条件下,此传感器检测过氧亚硝酸阴离子的线性范围为1.0×10!5~3.5×10!4mol/L和3.5×10!4~1.1×10!3mol/L,灵敏度为0.13 A/(mol/L),检出限为1.2×10!7mol/L(S/N=3)。

肝肿瘤发生中过氧亚硝酸阴离子标志物作用

目的比较过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)对正常人胚肝细胞株L-02和肝母细胞瘤细胞株HepG2 DNA损伤和细胞毒性差异,探索ONOO-在肝肿瘤发生中的作用及可能标志物。方法0.01,0.05,0.1 mmol/L ONOO-作用细胞后,检测ONOO-对2株肝细胞的细胞生存率,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)含量变化,DNA损伤,生长抑制DNA损伤基因(GADD)表达的影响差异。结果ONOO-使2种肝细胞的生存率下降、SOD含量降低(P<0.05)和CAT、GSH的显著变化,显著升高MDA的含量;DNA损伤程度和GADD45、GADD153基因表达水平在2株肝细胞均随着剂量的增加显著升高。2种肝细胞相比,各浓度组L-02细胞损伤程度大于HepG2细胞,但只有GADD基因表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论ONOO-对正常肝细胞和肝癌细胞均显示细胞毒性作用,引起DNA损伤,诱导GADD表达。GADD基因表达水平在不同肝细胞中差异有统计学意义,可能是ONOO-细胞损伤效应的标志物。

过氧亚硝酸阴离子与心血管疾病

氧化应激及在氧化应激过程中产生的活性氧簇（ROS）与心血管疾病的发生发展有密切关系。过氧亚硝酸阴离子（ON00^-）作为一种重要的氧化应激产物及活性氧簇的一员，在其中发挥着重要的作用。本文对ON00^-与心血管疾病的关系做一综述，以期对下一步研究有所裨益。

过氧亚硝酸阴离子(ONOO^-)引起小动脉反应性下降

目的探讨过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)在调节小动脉反应性中的可能作用以及相关机制。方法用180～220g雄性SD大鼠分成20μm、50μm、100μmONOO-滴流组 ,对照组分别使用50μmONOO -分解体以及Kreb's液滴流。用Kreb's液在灌流前将ONOO-稀释成所需的终浓度并观察ONOO-对A3 级小动脉反应性的影响 ,以能够引起A 3 级动脉血流停滞的去甲肾上脉素(NE)溶液的最低浓度(取负对数)表示血管的反应性(数值的大小与血管反应性的高低成正相关)。结果20μm组ONOO-滴流10、20min时与Kreb's液比较有显著差异(P<0.05) ,滴流40min时有非常显著差异(P<0.01)。50μm和100μmONOO-滴流10、20、40min与Kreb's液比较均有非常显著差异(P<0.01)。结论ONOO-能够明显降低小动脉对NE的反应性 。

一氧化氮和过氧亚硝酸阴离子的心肌损害作用

一氧化氮生成过多对心血管系统有显著的不良作用 ,尤其是一氧化氮与超氧阴离子反应形成的过氧亚硝酸阴离子是一种强效细胞毒性物质 ,在心肌损害的发生中起着重要作用。

力竭运动诱导大鼠心肌过氧亚硝酸阴离子生成

探讨力竭运动对大鼠心肌自由基生成的影响,将16只大鼠随机分为安静组和运动组,运动组采用跑台力竭运动模型,运动后即刻取样,测定血清中一氧化氮(NO)浓度、心肌中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)含量。结果:力竭运动后,心肌中ONOO-和MDA显著升高(P<0.05),SOD活力显著下降(P<0.01),血清中NO含量有一定上升,但无统计学意义(P>0.05)。结论:力竭运动诱导心肌ONOO-的大量生成,其机制可能源于力竭运动导致心肌超氧阴离子的大量生成与NO的过量生成。

罗布麻中具有清除过氧化亚硝酸阴离子活性的成分

通过检测清除过氧化亚硝酸阴离子(ONOO^-)的活性,研究厂罗布麻叶水提物抗氧化活性的成分。

温脾汤清除过氧化亚硝酸阴离子的作用

自由基过氧化亚硝酸阴离子(ONOO^-)有极强的毒性,对机体有严重影响。本次以体内外实验系探讨了温脾汤对ONOO^-的作用。 方法:①动物实验:对Wistar系雄性大鼠(5周龄)给予温脾汤提取物,共给药30d。结扎肾动静脉,50min后尾静脉注射LPS(5mg/kg),10min后再灌注,6h后用于实验。用HPLC检测ONOO^-,比色法检测BUN、Cr。

黄芪对过氧亚硝酸盐阴离子导致的肾动脉反应性异常的保护作用

目的:探讨黄芪对过氧亚硝酸盐阴离子(ONOO-)导致的血管反应性异常的影响。方法:32只SD大鼠随机分为2组,正常对照组与黄芪灌胃组。大鼠喂养四周后处死,取肾动脉。每组大鼠血管随机分入不同处理组(ONOO-组、control组)孵育。完成孵育后采用大鼠离体肾动脉环灌流模型观察两组大鼠血管收缩和舒张反应性的变化。结果:ONOO-孵育可以明显加强正常对照组大鼠肾动脉对苯肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导的收缩反应,减弱由乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)诱导的舒张反应。在黄芪灌胃组大鼠肾动脉中未观察到上述改变。结论:黄芪可以改善ONOO-导致的肾动脉反应性异常。

衰老对硝酸酯类药物引起活性氮介质和活性氧介质增高的影响

目的:以往研究显示,硝酸酯类药物和衰老都会引发体内活性氧介质(ROS)和活性氮介质(RNS)的增加,本研究旨在探讨年龄是否会影响硝酸酯类药物的这种促进作用。方法:75例不稳定心绞痛患者,分成32例中年组和43例老年两组。所有患者均给予硝酸酯类药物(50μg/min)48h。在试验开始时和用药48小时时,获取血样标本,对血样中的ROS[丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO)和还原性谷胱甘肽(GSH)]和RNS(硝基、亚硝基,NOX;过氧亚硝酸阴离子,ONOO-)]的水平进行检测。结果:硝酸酯类药物的使用,引起中年组血浆MDA水平[用药前(1.22±0.37)nmol/m L,用药后(1.61±0.47)nmol/m L,P<0.05]增加60%;老年组MDA水平[用药前(2.07±0.77)nmol/m L,用药后(4.05±0.80)nmol/m L,P<0.05],增加140%;GSH两组分别减少了9%和48%;硝酸酯类药物使用前,老年组血浆硝基化酪氨酸(398.29±117.0)nmol/L水平为仅为中年组(296.57±120.48)nmol/L的105%,药物使用48h后,老年组血浆硝基化酪氨酸水平(1 182.30±295.01)nmol/L增高到中年组(610.82±217.36)nmol/L,增高210%。结论:在硝酸酯类药物的使用过程中,除了药物本身增加机体内ROS和RNS,年龄增加能够促进硝酸酯类药物的这种作用。

离子色谱法测定重负荷发动机冷却液中NO^(2-)的方法研究

含亚硝酸根离子的重负荷冷却液能在一定程度上缓解缸套穴蚀现象。本文采用850Profession型色谱仪对重负荷防冻液中的NO^(2-)含量进行了测定,采用A4-250型离子分析柱,浓度为1.8 mmol/L Na_2CO_3和1.7 mmol/L NaHCO_3的淋洗液以及电导检测器。样品10次重复测定结果的平均值为492.7 ppm,极大值与均值的重复性误差为1.3%,极小值与均值的重复性误差为1.9%,低于国家标准中离子色谱法测定亚硝酸离子的重复性要求≤5.2%。测定结果表明,该方法操作简单、准确性高。

黄芪对过氧亚硝酸盐阴离子导致的血管反应性异常的保护作用

目的探讨黄芪对过氧亚硝酸盐阴离子(ONOO-)导致的血管反应性异常的影响。方法 32只SD大鼠随机分为2组,正常对照组与黄芪灌胃组,每组16只。大鼠喂养4周后处死,取胸主动脉,制备离体血管环标本。每组大鼠血管随机分为不同处理组(ONOO-组、未处理组)孵育。完成孵育后采用大鼠离体主动脉环灌流模型观察2组大鼠血管对苯肾上素(PE)/乙酰胆碱(Ach)诱导的收缩/舒张反应性的变化。结果正常对照组不同处理血管在PE的作用下收缩反应性均呈浓度依赖性增高;在高浓度(10、100μmol/L)时,ONOO-处理组血管对PE的最大收缩力明显高于未处理组(P均<0.05);2组血管在Ach的作用下舒张反应性均呈浓度依赖性增高,在高浓度(100μmol/L)时,ONOO-处理组血管对Ach的最大舒张率明显低于未处理组(P<0.05)。在黄芪灌胃ONOO-处理组与未处理组大鼠血管上述改变均无明显差异(P>0.05)。表明ONOO-导致的血管舒缩功能异常可以被黄芪改善。结论黄芪可改善ONOO-导致的血管反应性异常,因此对血管功能具有保护作用。

心肌顿抑中的氧化应激作用及氨基胍干预的效果

背景氧化应激的超氧阴离子(O-.2)可与细胞一氧化氮合酶(NOS)释出的一氧化氮(NO)结合,生成过氧亚硝酸阴离子(ONOO-)。ONOO-是氧化应激各种产物[如O2.-、H2O2、羟自由基(.OH)等]之一,统称为反应性氧族(ROS)。ROS在心肌顿抑中的作用研究不多,氨基胍作为NOS抑制剂对ROS的作用也不清楚。目的探讨ONOO-在心肌顿抑发生中的作用和机制以及氨基胍的干预作用。方法24条雄性杂种犬,随机分为4组:1)短顿抑组[左前降支冠状动脉(LAD)阻断15min/再灌注120min];2)长顿抑组(LAD阻断60min/再灌注120min);3)氨基胍组[LAD阻断60min/再灌注120min加一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(100mg/kg)干预];4)假手术组。在不同观察时间点测定超声心功能和冠状静脉窦血浆NO浓度。实验完毕后心肌标本行电镜检查,并行硝基酪氨酸免疫组化检查以证实是否有ONOO-生成。结果1)LAD结扎后缺血心肌节段收缩期增厚百分率和左室射血分数显著下降,缺血心肌节段表现为矛盾运动;再灌注开始后心肌节段收缩功能和左室射血分数呈进行性改善,短顿抑组和氨基胍组心功能的恢复快于长顿抑组。2)短顿抑组和长顿抑组再灌注期血浆NO浓度明显升高,氨基胍组再灌注期血浆NO浓度无显著升高。3)短顿抑组顿抑心肌硝基酪氨酸免疫组化染色见阳性染色的心肌细胞灶;长顿抑组见较大、较多的强阳性染色心肌细胞灶,主要是胞浆尤其横纹处染色较深;氨基胍组顿抑心肌偶见心肌细胞弱阳性染色。4)透射电镜观察发现,短顿抑组心肌细胞偶见线粒体轻度脱颗粒;长顿抑组心肌细胞部分肌丝断裂,收缩带溶解,线粒体肿胀、脱颗粒,胞质水肿;氨基胍组心肌超微结构保存良好。结论1)顿抑心肌生成NO增多伴ONOO-形成;2)ONOO-主要攻击的蛋白质对象是肌丝上的蛋白质;3)氨基胍抑制顿抑心肌过多的NO生成,显著减少ONOO-形成,并对顿抑心肌的超微结构和功能有明显保护作用。

iNOS在大鼠创伤模型心肌细胞凋亡中的作用

目的观察iNOS在创伤大鼠模型心肌细胞凋亡中的作用。方法用Noble-Collip创伤仪制备大鼠创伤模型,用caspase-3活性和DNA ladder测定法观察心肌细胞凋亡,用Western blot测定心肌组织iNOS的蛋白表达,用化学发光法检测心肌组织一氧化氮(NO)的含量,ELISA法测定心肌组织硝基酪氨酸(NT)含量。结果机械创伤后心肌细胞凋亡显著增加(P<0.01),心肌组织iNOS的表达显著升高(P<0.01),同时心肌组织NO2-/NO3-和NT含量明显增加(P<0.01);给予iNOS选择性抑制剂1 400 W可显著降低心肌细胞凋亡(P<0.05),且显著降低心肌组织NO2-/NO3-和NT的含量(NO2-/NO3-:P<0.01;NT:P<0.05)。结论创伤时iNOS通过引起NO及过氧亚硝酸阴离子增加,进而导致心肌细胞凋亡。

血清尿酸水平与多发性硬化的相关性研究

目的研究血清尿酸(UA)水平与多发性硬化(MS)患者病程、病情、EDSS评分的关系,以探讨血清UA水平在MS发病中的作用机制。方法采用酶定量分析法测定MS患者(96例)和对照组(81例)血清UA水平。结果MS患者与对照组血清UA水平差异无统计学意义,各型急性期及女性患者UA水平明显低于对照组(P<0.01)。MS患者UA水平与病程、EDSS呈负相关。结论MS患者低血清UA水平可能与炎症过程UA消耗有关,UA可能会作为MS疾病活动性的标志物之一。

衰老对急性心肌梗死患者及大鼠体内活性氧介质和活性氮介质水平的影响

目的 通过临床研究和相应的动物实验探讨衰老对急性心肌梗死（AMI）患者及大鼠体内活性氧介质（ROS）和活性氮介质（RNS）水平的影响.方法 选取2013年9月至2015年3月首都医科大学附属北京安贞医院接受经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的急性心肌梗死（AMI）患者104例.最终采集了37个成年患者（＜65岁,成年组）和49个老年患者（≥65岁,老年组）的血液标本.在PCI治疗后的24 h和3d,检测比较血样中的ROS[丙二醛、髓过氧化物酶（MPO）和还原性谷胱甘肽（GSH）]和RNS[诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性、NOx（一氧化氮的氧化产物）和硝基化酪氨酸过氧亚硝酸阴离子（ONOO-）]水平.由于临床研究的局限,本研究设计了相应的动物实验,选取72只Sprague Dawley大鼠分为6组（青年大鼠鼠龄2个月,中年大鼠鼠龄10个月,老年大鼠鼠龄24个月;不同鼠龄各24只,同鼠龄鼠完全随机均分为两部分）：青年空白对照组、中年空白对照组、老年空白对照组、青年缺血/再灌注组、中年缺血/再灌注组、老年缺血/再灌注组,每组12只.对不同鼠龄缺血/再灌注组大鼠进行心肌缺血/再灌注处理,左冠状动脉结扎30 min、再灌注24 h,3个空白对照组不进行结扎.采集大鼠缺血心肌组织/正常心肌组织和血液标本,检测心肌组织和血液标本中的ROS（丙二醛、MPO和GSH）和RNS（iNOS活性、NOx和硝基化酪氨酸ONOO-）水平,进行组间比较.结果 PCI术后24 h及术后3d老年患者血浆中丙二醛、MPO明显高于成年患者,GSH明显低于成年患者,差异有统计学意义[丙二醛：（8.6±2.3）μmol/L比（4.8±1.0） μmol/L、（7.5±1.8）μmol/L比（3.5 ±0.8）μmol/L,MPO：（707±224） μg/L比（474±126） μg/L、（667±187） μg/L比（377±114） μg/L,GSH：（2.6± 1.1） μmol/L比（3.7±1.0） μmol/L、（1.7±0.9） μmol/L比（2.5±1.1） μmol/L,P＜0.01];iNOS活性明显低于成年患者,差异有统计学意义[（28±11） pmol/（mg protein· min）比（34±9）pmol/（mg protein· min）、（20±8）pmol/（mg protein· min）比（24±8）pmol/（mg protein· min）,P＜0.01].动物实验结果,趋势与临床研究基本一致.结论 衰老引起AMI患者及大鼠体内ROS和RNS的改变.

原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用及机理初探

目的研究原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用,初步探索其抑制机理。方法以BSA为硝化底物、ONOO-为硝化试剂,根据428 nm处吸光度的变化来反映硝基化蛋白含量的变化,进而研究原花青素对蛋白质硝基化的抑制作用。结果通过对蛋白质硝基化反应各种影响因素的探讨,发现在37℃,pH 7.2,反应时间90 min以及BSA与ONOO-终浓度比为1∶6时,硝基化反应进行最为完全。分别在硝基化反应前、反应中以及反应后,向反应体系中引入不同浓度的原花青素的无水乙醇溶液,最后发现在硝化反应发生前加入抑制剂,抑制硝化反应的效果最为明显;当抑制剂终浓度为8.0×10-5mol/L时,抑制率可达66.89%。与褪黑素的比较实验显示,同条件下,二者对蛋白质硝化反应的抑制活性大体相当。抑制机理初步显示原花青素抑制蛋白质硝化反应的机理可能是部分清除ONOO-分解后的.OH或直接与ONOO-反应。结论原花青素抑制蛋白质硝基化反应可能是其对抗心脑血管疾病的分子机制之一,为进一步开发原花青素成为新的临床药物和保健品提供理论支持。