粪便DNA亚硫酸盐快速处理方法的探讨

目的探讨从微量的粪便中运用亚硫酸盐法成功处理DNA甲基化的方法,寻求最适宜的亚硫酸盐的浓度以及处理时间。方法收集我科员工新鲜粪便标本(经胃镜及结肠镜证实无消化道肿瘤),经亚硫酸盐方法处理后,对大肠埃希菌进行PCR检测,检测结果使用ABI310测序仪器进行测序。结果在最终浓度为2.63 mol亚硫酸盐、并经过95℃15min,4℃10 min,75℃60 min处理;2.11 mol亚硫酸盐经过95℃15 min,4℃10 min,75℃165 min处理均能将E.coli DNA的胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U)。结论为从粪便中检测人类相关基因甲基化提供了快捷、科学的依据。

碱性亚硫酸盐预处理对杂交狼尾草酶水解特性的影响

杂交狼尾草(Pennisetum americanum×P.purpureum)生长速度快、产量大、抗逆性和适应性强,是制备生物能源和化学品的极具潜力的原料。为实现杂交狼尾草高效酶水解,分别采用氢氧化钠、亚硫酸钠和碱性亚硫酸钠对其进行预处理,分析其对原料化学组成和结晶度的影响,探讨纤维素酶剂量、纤维素酶与木聚糖酶的协同、酶系组成对酶水解的影响。结果表明,1%NaOH或4%Na_2SO_3预处理可将杂交狼尾草木质素质量分数从19.5%降为10%~15%。在1%NaOH预处理时加入Na_2SO_3可将底物中木质素质量分数降为5%以下,细胞壁多糖质量分数达95%以上。由于其良好的可降解性能,纤维素酶水解预处理杂交狼尾草时剂量可低于10 U/g,且添加木聚糖酶的效果较增加纤维素酶剂量效果更好。在底物质量分数为10%时,每克底物添加10 U纤维素酶、1 000 nkatβ-葡萄糖苷酶和2 mg木聚糖酶进行水解,经4%Na_2SO_3+1%NaOH预处理后杂交狼尾草的葡萄糖和木糖得率分别高达94.2%和84.0%。碱性亚硫酸盐预处理在高底物质量分数、高效酶水解杂交狼尾草中具有较大应用潜力。