黄瓜花叶病毒亚组Ⅰ和Ⅱ分离物外壳蛋白基因的序列分析与比较

对我国分离的经生物学和血清学鉴定为黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组Ⅰ和Ⅱ的各一分离物（ＧＢ、ＸＢ）的外壳蛋白（ＣＰ）基因进行了序列分析和比较。以提纯病毒ＲＮＡ为模板，进行逆转录及ＰＣＲ扩增，并通过常规基因克隆方法得到插入ＣＰ基因片段的重组克隆。对插入ＧＢ和ＸＢ两个分离物ＣＰ基因片段的重组克隆进行全序列测定，结果表明重组克隆序列长分别为７７７ｂｐ和７９２ｂｐ，均只含一个开放读框（ＯＲＦ），长度为６５７ｎｔ，可编码２１８个氨基酸；两个分离物的ＣＰ基因核苷酸序列同源率为７７５％，氨基酸序列同源率为８２６％。与我国已报道的７个ＣＭＶ分离物的ＣＰ基因序列比较，分离物ＧＢ的同源率为９１３％～９７３％，分离物ＸＢ的同源率为７６６％～７８４％。与国际上已报道部分ＣＭＶ株系的ＣＰ基因序列相比较，分离物ＧＢ与亚组Ⅰ株系有更密切的亲缘关系，而分离物ＸＢ则与亚组Ⅱ株系的亲缘关系更密切。

黄瓜花叶病毒(CMV)亚组Ⅰ、Ⅱ分离物生物学特性比较研究

从福建、浙江、湖南、宁夏、安徽、山西、河南、河北、北京等省市采集并收集到16个黄瓜花叶病毒(CMV)样品,用亚组特异性抗血清以ELISA方法对这些样品进行了亚组鉴定。同时,选取亚组Ⅰ、Ⅱ病毒部分分离物进行了症状、致病性和体外稳定性比较研究。结果表明,亚组Ⅱ病毒分离物的症状和致病性受温度、湿度和光照强度等的调节,在不同环境条件下呈现复杂的寄主适应性变化,总的症状比较温和。我国收集的CMV样品以亚组Ⅰ为主,检出率占样品总数的75%。但由两亚组病毒生物学特性比较研究结果表明,亚组Ⅱ病毒在采样和检测中易于被忽略或丢失,据此,探讨了CMV亚组Ⅱ存在的生态意义及其样品检出率与田间实际发生率之间可能存在的较大差异。

从云南烟草上检测到的黄瓜花叶病毒亚组II分离物

在对云南省烟草病毒病的研究中 ,分离到一种直径约 2 6～ 30nm的球形病毒。提纯病毒进行的SDS PAGE发现一条 55kD蛋白带。 55kD蛋白N 端 1 0个氨基酸与CMV亚组II的Q株系外壳蛋白N 端氨基酸同源性为 1 0 0 %。以CMV Q抗血清对 55kD蛋白进行了Westernblot检测 ,发现 55kD蛋白与CMVQ株系抗血清有血清学反应。根据已报道的CMV亚组II外壳蛋白基因序列合成引物 ,采用RT PCR技术扩增到一条约 0 9kb的cDNA条带 ,并进行了克隆及序列测定 ,经Genbank比较 ,发现此 0 9kbcDNA包含一 657bp的外壳蛋白基因 ,其核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与CMV亚组II分离物有极高的同源性 ,分别达 97%～ 98%和 96%～ 99% ,而与亚组I分离物的同源性仅为 75%～ 76%和 78%～79%。因此 ,该球形病毒应为CMV亚组II的一个分离物 ,命名为CMV YNb。

侵染万寿菊的黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与序列分析

应用ELISA的方法检测到感染了黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的万寿菊。根据已报道的CMV外壳蛋白(CP)基因的保守序列设计并合成引物,提取万寿菊叶片总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,得到约875bp的片断,与预期片断大小相符。序列分析显示:该分离物CMV-WSJ CP基因全长657bp,编码218个氨基酸,其核苷酸和氨基酸序列与CMV亚组Ⅱ的分离物有很高的同源率,分别达到98.33%～99.24%和98.63%～100%;与CMV亚组I分离物的同源率分别仅为74.43%～76.26%和77.17%～78.99%。因此,从万寿菊叶片上检测出的黄瓜花叶病毒分离物CMV-WSJ应归属于亚组Ⅱ。

莴苣丛枝植原体胶体金免疫层析试纸条的初步研制

采用柠檬酸三钠还原法制备25 nm粒径胶体金颗粒,在pH 8.5的条件下与21μg/m L兔抗莴苣丛枝植原体(Le WB)免疫膜蛋白(Imp)多克隆抗体形成稳定的胶体金蛋白复合物,将兔抗莴苣丛枝植原体免疫膜蛋白IgG与羊抗兔IgG分别点在硝酸纤维素膜上作为检测线(T)和质控线(C),组装成胶体金免疫层析试纸条。结果表明:该试纸条除可以检测莴苣丛枝植原体外,还能检测与其具有相同免疫膜蛋白特性且隶属16SrⅡ-A亚组的其他植原体株系,如菊苣丛枝植原体(Ch WB)、扁豆花变绿植原体(Le VP)、蕹菜丛枝植原体(WSWB)、银胶菊花变绿植原体(Pa VP)等。试纸条可特异检测16SrⅡ-A亚组植原体株系,对莴苣丛枝植原体阳性材料的检测灵敏度为稀释100倍。