砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分中砷的分布

目的 研究砷中毒大鼠肝脏亚细胞组分 (细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体及胞液 )中砷的分布 ,为地方性砷中毒的治疗提供科学依据。方法 用亚砷酸钠 (Na As O2 )诱导出大鼠亚急性砷中毒模型 ,采用差速离心生化分离技术与超热中子活化分析相结合 ,测定大鼠肝脏亚细胞组分中砷的含量。结果 中毒组大鼠肝脏中各亚细胞组分中砷的含量均极显著高于正常对照组 (P <0 .0 1或 P <0 .0 0 1) ;且砷在各亚细胞组分中的浓度并非均匀分布 ,在中毒组肝脏亚细胞中的浓度遵循微粒体 >胞液 >线粒体 >细胞核。结论 砷在微粒体、胞液和细胞核中的大量蓄积 ,可能导致肝细胞损伤。

用中子活化分析法研究25种元素在人体肝脏亚细胞组分中的分布

采用差速离心分离技术与中子活化分析法(NAA)相结合的方法分析了人肝25种元素,并用标准参考物保证结果的准确性.分析结果表明,大多数元素在各亚细胞组分中并非均匀分布.As、Au、Co、I、Mg、Mo、Sb、Sc在细胞核和线粒体浓度最高.Al、As、Au、Ba、Fe、I、La、Mg、Mn、Sb、Se在胞液中浓度最低,生物体内主要以离子形式存在的Br、Cl、K、Na则在胞液中浓度最高.值得注意的是,As在细胞核中大量聚集,是其它组分的2～4倍;而La与Fe则在微粒体中富集.

用超热中子活化法测定大鼠肝脏亚细胞组分中的砷

采用差速离心分离技术与超热中子活化分析法 (ENAA) ,测定了大鼠肝脏亚细胞组分 (细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体、胞液 )中As的质量分数 ,并对标准参考物质作对照分析。分析结果表明 :As在各亚细胞组分中并非均匀分布。As在微粒体中的质量分数最高 ,在细胞核中最低。用t检验比较了在中毒组大鼠和正常组大鼠肝脏中各亚细胞组分中As含量的差别 ,以及中毒组大鼠肝亚细胞组分之间的差异。发现上述两组肝亚细胞组分中As存在极显著性差异 (P <0 0 0 1)。在中毒组肝亚细胞组分中 ,微粒体中As的含量与胞液无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,但与细胞核、线粒体、溶酶体存在明显的差异 (P <0 0 5 )。

人肝脏组织亚细胞组分中含硒蛋白的分离与测定

The distribution of selenium\|containing proteins in the subcellular fractions of human liver components was treated by sodium dodecyl sulfate\|polyacrylamide gel electrophoresis (SDS\|PAGE) and hydride generation\|atomic fluorescence spectrophotometry (HG\|AFS). About 24 kinds of Se\|containing proteins or protein subunits were found in subcellular fractions. Their molecular weights were mostly ranged from 20 to 30 kD and from 50 to 80 kD. Among them, about 61 kD and 21 kD Se\|containing proteins existed in each fraction with higher concentration. The 54 kD Se\|containing protein existed in nuclei, mitochondria, microsome and cytosol. The specific subcellular distributions of Se\|containing proteins suggest that Se could play specific important biological roles in each organelle.

不饱和脂肪酸在牛、大鼠脑亚细胞组分中分布的比较

采用密度梯度离心等方法 ,从牛和大鼠脑组织中分别分离得到髓磷脂 (A)、突触囊 (B)、轻突触体 (C)、重突触体 (D)、线粒体 (E)和微粒体 (F)六个亚细胞组分。通过气相色谱 -质谱联用手段和内标法测定了不饱和脂肪酸在各个亚细胞组分中的含量。结果表明牛和大鼠脑不饱和脂肪酸的亚细胞分布存在明显的差异。这种差异可能与动物种属、动物生活习惯等因素有关。

大鼠血、肝匀浆及亚细胞组分生化参数值的报告

本文报道正常成年大鼠血、肝匀浆及亚细胞组分（线粒体和微粒体）的部分生化参数值，包括血液中谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性，红细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性，血清铜兰蛋白（Ｃｅｒｕｌｏｐｌａｓｍｉｎ）及丙二醛（ＭＤＡ）含量；肝匀浆中丙二醛，还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）、氧化型谷胱甘肽（ＧＳＳＧ）含量及脂肪酸的百分构成；线粒体中ＣａＭｇＡＴＰ酶活性，微粒体中细胞色素Ｐ４５０含量及线粒体和微粒体膜脂流动性的测定。

化学诱发大鼠肝癌的亚细胞组分中两类丝氨酸蛋白激酶的动态变化

用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力。发现胞液ＰＫＡ在诱癌过程中活力改变不大，胞液ＰＫＣ则逐步增高，在第１３周和２０周形成两个活力高峰。膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都呈双相变化，即在癌前期（１０－１４周）增加，癌形成期（１７－２０周）反而降至正常以下，胞核ＰＫＡ和ＰＫＣ也都在癌前期升至高峰，而癌形成期则低于癌前期，但仍高于正常（ＰＫＡ）或接近正常（ＰＫＣ）。因只有膜性ＰＫＣ在大鼠老化时降低，故这些变化不是鼠龄变化的结果，而是ＤＥＮ诱癌所引起，其变化机理可能与下降调节、细胞内转位或两型同工酶相反的升降变化有关。

镉对苯并(a)芘在蚯蚓亚细胞组分中分配积累的影响

通过外源添加不同浓度镉离子(Cd^(2+))来研究复合污染条件下镉(Cd)对苯并(a)芘(Ba P)在蚯蚓体内不同亚细胞组分(组分C:细胞溶质组分;组分D:固体颗粒组分;组分E:细胞碎片组分)中的分配积累情况,并探究其内在机制。结果表明,Ba P主要分布于蚯蚓的细胞碎片组分,其次为固体颗粒组分,在细胞溶质组分中的浓度最低。在Cd^(2+)添加处理下,随着Cd^(2+)浓度的增加,3个细胞组分中的Ba P浓度呈先降低后升高的趋势。随着Cd^(2+)浓度的增加,3个亚细胞组分中的蛋白含量与乙酰胆碱酯酶(ACh E)活性均呈先升高后下降的趋势;而蚯蚓细胞溶质和细胞碎片组分中的谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性呈先下降后上升的趋势,但固体颗粒组分中逐渐增加。相关性分析表明,蚯蚓细胞溶质和细胞碎片组分中的蛋白含量与其对应组分中的Ba P浓度呈显著负相关;细胞溶质组分中的ACh E活性与该组分中的Ba P浓度呈显著负相关;而GST的活性与Ba P浓度没有显著相关性。综上所述,Ba P主要分配积累在细胞碎片组分中,Cd^(2+)可能通过影响蛋白含量及ACh E的活性,从而影响Ba P在细胞碎片和细胞溶质组分中的积累,使得Ba P的浓度随着Cd^(2+)浓度的增加呈现先降低后升高的趋势。

ICP－AES法检测Sr、Ca、Mg在海带亚细胞组分中的分布

应用等离子体－原子发射光谱法检测了海带细胞核、叶绿体、线粒体和胞质溶胶中Ｓｒ、Ｃａ、Ｍｇ的浓度，结果显示细胞核和线粒体的锶钙比是叶绿体的２倍。

栉孔扇贝消化盲囊亚细胞组分分离与鉴定技术

采用匀浆、差速离心、镜检和标志酶测定等方法,研究了栉孔扇贝(Chlamys farreri)消化盲囊亚细胞组分分离与鉴定技术。结果显示,经Hoechst33258染色,在匀浆2min对照组中,观察到大量栉孔扇贝消化盲囊完整细胞,呈圆形或椭圆形,细胞膜完整,荧光强度较高;在匀浆3、4、5 min实验组中,完整细胞数目逐渐减少,且出现许多形态较小、荧光强度弱、轮廓模糊的细胞碎片。通过血球计数板法得到的细胞破碎结果与上述染色结果一致,随着匀浆时间(2~5 min)的增加,细胞破碎率升高,当匀浆时间达到5 min时,细胞破碎率升至94.24%。利用Hoechst 33258染色栉孔扇贝消化盲囊亚细胞分离组分(S2、C2、C4、S5和C5),镜检发现,C2组分荧光强度最强,荧光颗粒数目多,而其他组分荧光强度弱,且基本观察不到荧光颗粒。由此推测,细胞核主要存在于C2组分中;同时,细胞膜(5’-核苷酸酶)、线粒体(琥珀酸脱氢酶)、细胞质(乳酸脱氢酶)和微粒体(葡萄糖-6-磷酸酶)标志酶活力在其他亚细胞组分中有少量检出,但它们在S2、C4、S5和C5组分中的的标志酶活性比例较高(分别为63.90%、64.89%、77.82%和67.55%)。由此推测,S2、C2、C4、S5和C5分离组分分别为细胞膜、细胞核、细胞质、线粒体和微粒体。本研究成功构建了栉孔扇贝消化盲囊亚细胞组分分离与鉴定技术方法,为贝类生理机制研究提供技术支持。

肝癌细胞亚细胞组分的双向凝胶电泳分析

目的建立超速离心方法分离亚细胞组分的技术路线,以提高肝癌细胞蛋白质组的双向凝胶电泳分离效率。方法体外培养的肝癌细胞QGY-7703匀浆破碎后,经差速离心分离成细胞核、20000×g沉淀、100000×g沉淀和细胞浆4个亚细胞组分,分别进行双向凝胶电泳,然后用ImageMaster软件分析电泳图谱。结果亚细胞组分分离后,电泳分辨率明显提高,特别是细胞核和细胞浆蛋白质的检出效率得到很大提高。不同亚细胞蛋白质组电泳图谱的差异显示了其蛋白质组构成的不同。结论超速离心是一种有效的亚细胞组分分离手段,蛋白质组技术与超速离心技术的结合能克服全细胞双向凝胶电泳的一些缺陷,并可将蛋白质组研究引向亚细胞水平。

砷在铜藻中的亚细胞分布及细胞壁吸附作用研究

为揭示铜藻(Sargassum horneri)细胞壁在砷(As)生物吸附中的作用,以铜藻幼苗为研究对象,测定了不同As胁迫浓度(50、100、150、200、250μmol·L^(-1))下细胞亚组分中的As含量变化,并对细胞壁的吸附动力学、细胞壁多糖As吸附效果以及细胞壁多糖傅里叶红外光谱进行了分析研究。结果表明:在低浓度(50μmol·L^(-1))As胁迫时,50.0%的As分布于细胞壁,明显高于其他组分;而在高浓度(≥150μmol·L^(-1))As胁迫时,As优势分布由细胞壁转向细胞可溶组分,细胞壁中的As比例下降至36.4%~37.3%。随着As胁迫浓度升高,细胞壁As含量呈上升趋势,当As胁迫浓度超过100μmol·L^(-1)时,细胞壁As含量上升趋于平缓。细胞壁吸附动力学实验表明酯化改性和甲基化改性可降低细胞壁As吸附的平衡容量,其降幅分别为68.5%和42.9%,同时细胞壁多糖红外光谱分析结果也表明羟基、氨基、羧基、硫酸盐基等官能团为细胞壁As吸附提供了结合位点。细胞壁多糖体外吸附实验表明随着多糖浓度的升高,多糖As吸附率呈上升趋势。研究表明铜藻细胞壁具有重要的As吸附能力,其中多糖官能团是细胞壁吸附As的关键因素,随多糖含量的升高细胞壁可吸附更多的As。

富集稳定同位素示踪研究钐、镱在大鼠肝脏中的亚细胞分布

采用可活化富集稳定同位素152 Sm和16 8Yb作为示踪剂 ,结合差速离心分离和中子活化分析技术 (NAA)初步研究了稀土元素Sm和Yb在大鼠肝脏亚细胞组分中的分布。分析结果表明 ,Sm和Yb在亚细胞组分中的浓度分布为 :溶酶体 >微粒体 >线粒体 >细胞核 >胞液。线粒体中Sm和Yb所占比例最高 。

砷胁迫下磷对三七砷的微区及亚细胞组织分布特征的影响

通过同步辐射X射线荧光分析(μ-SRXRF)和亚细胞组分分离技术相结合,从植株各部位微区及亚细胞组分层面揭示了药用植物三七在外源磷素作用下砷吸收累积的分布特征。结果表明:三七的根部和茎部是砷的主要富集部位,添加外源磷素可以有效降低三七根部、茎部和叶片的砷含量,降低幅度分别为47%、80%和33%;三七各部位的亚细胞组分砷的累积量不同,其中细胞液是砷的主要富集组分,具有一定的区隔化作用,但不能有效地减少砷对植物细胞新陈代谢的影响和毒害;外源磷素的加入可以显著降低三七不同部位亚细胞各组分中砷的累积量,其降低幅度由高到低依次为细胞液>细胞壁>细胞器,但分析表明,外源磷素的添加对三七各部位的亚细胞组分砷累积量占植株总砷累积量比例的影响不大。

复合胁迫下茭白体内镉、铅的亚细胞分布和植物络合素的合成

以茭白(Zizania latifoliaTurcz.)的单季茭品种‘蒋墅茭’和双季茭品种‘葑红早’为试材,进行Cd2+、Pb2+的单一及复合胁迫处理,测定了茭白根系和叶片中的非蛋白巯基(NPT)、谷胱甘肽(GSH)、植物络合素(PCs)的含量,同时测定了茭白植株各亚细胞组分中Cd2+、Pb2+的积累量,以探讨茭白对重金属镉、铅胁迫的耐性机理。结果表明:Cd2+、Pb2+的单一及其复合胁迫均能促进两茭白品种根系和叶片中NPT、GSH、PCs的含量及茭白各亚细胞组分中Cd2+、Pb2+积累量的显著增加;复合胁迫时两茭白品种的NPT、GSH、PCs含量及各亚细胞组分中Cd2+、Pb2+的积累量均高于单一胁迫,茭白的不同部位间,以根系中的NPT、GSH、PCs含量显著高于叶片;茭白各亚细胞组分中Cd2+、Pb2+的积累量表现为:细胞壁高于原生质体,而可溶性部分高于细胞器。

施锌对冬小麦亚细胞镉分布和镉化学形态的影响

为深入了解施锌(Zn)对冬小麦镉(Cd)吸收的影响,本研究选冬小麦品种矮抗58,试验共设置了2个Cd水平(0、5μmol·L^-1)和4个Zn水平(0、2、8和15μmol·L^-1),通过营养液试验,研究了施Zn对Cd胁迫下冬小麦Cd吸收、亚细胞分布和化学形态的影响。结果表明,冬小麦的生物量随Cd浓度的增加而降低,而Zn能够减轻Cd对冬小麦生物量的毒害作用。同时,根和地上部Cd含量随Zn浓度提高而降低。另外,施Zn显著降低了冬小麦幼苗各个亚细胞组分的Cd含量,增加了冬小麦根中1 mol·L^-1 NaCl提取态和体积分数2%醋酸提取态Cd的含量。在Cd浓度为5μmol·L^-1,Zn浓度为2和8μmol·L^-1时,冬小麦地上部细胞壁和可溶性部分Cd所占的比例增加;在Cd浓度为5μmol·L^-1,Zn浓度为8和15μmol·L^-1时,冬小麦根部细胞壁和可溶性部分Cd所占的比例增加。冬小麦地上部去离子水提取态Cd所占比例随Zn浓度增加而降低,体积分数2%醋酸提取态Cd所占比例随Zn浓度增加而增加。因此,施Zn通过调节冬小麦亚细胞Cd分布和Cd的化学形态,促进了冬小麦体内活性Cd向惰性Cd的转化,减轻了Cd对冬小麦的毒害效应,降低了冬小麦根部Cd的迁移能力。

BaP和Cd单一复合对BaP蚯蚓亚细胞分配的影响

选用钙离子通道阻断剂氯化镧(La Cl3)和巯基蛋白阻断剂N-乙马来酰亚胺(NEM)对赤子爱胜蚓进行预暴露,然后构建Ba P单一或Cd-Ba P复合污染,研究不同阻断剂对Ba P在蚯蚓不同亚细胞组分(Fraction C:细胞溶质组分;Fraction D:固体颗粒组分;Fraction E:细胞碎片组分)中分配积累特征的影响.结果表明,无论单一或复合污染,Ba P主要分布于细胞碎片组分中(占55.42%~69.96%),其次为固体颗粒组分(占27.91%~32.90%),在细胞溶质组分中的浓度最低(占2.13%~11.67%).单一Ba P污染下,两种阻断剂对Ba P的作用相近,即La Cl3和NEM的加入均能不同程度地促进3个亚细胞组分中Ba P的积累.而在Cd和Ba P复合污染下,两种阻断剂对Ba P的分布积累的影响略有不同,La Cl3能够促进复合污染下Ba P在3个亚细胞组分中的积累,而NEM促进了复合污染下Ba P在固体颗粒组分和细胞碎片组分中的积累,但抑制了Ba P在细胞溶质组分中的积累,浓度从原来的0.99mg/kg降低至0.59mg/kg.因此,钙离子通道和巯基蛋白可能参与Ba P在蚯蚓亚细胞的分配积累,相比单一污染,Cd的复合污会进一步改变Ba P的积累分配特征.

ICP-MS法研究重度烧伤患者创面肉芽组织中微量元素的亚细胞分布

利用八极杆碰撞反应池（ORS）技术的电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法研究了Cr，Mn，Fe，Co， Cu，Zn，Se，Cd等元素在重度烧伤患者创面肉芽组织中的亚细胞分布。采用差速分级离心技术将样品分离获得细胞核、线粒体、溶酶体、微粒体和细胞上清液等亚细胞组分，使用混合酸 HNO3＋H2 O2并结合密闭微波消解对各亚细胞组分进行消解，分别选用ORS的氦碰撞模式和氢反应模式校正了质谱分析过程中的多原子离子干扰，以Rh为内标元素校正了基本效应和信号漂移现象。各待测元素的检出限在0．72～33．05 ng·L^-1之间，相对标准偏差（RSD）小于8．4％。采用ORS-ICP-MS法可实现重度烧伤患者创面肉芽组织中微量元素亚细胞分布的准确分析，并可广泛应用于其他生物样品的分析，多数元素在创面肉芽组织和正常皮肤组织亚细胞组分的分布中存在显著性差异。

镉胁迫对艾纳香抗性生理、亚细胞镉分布和镉化学形态的影响

为探讨镉胁迫下艾纳香耐镉机制,采用盆栽试验,研究土壤镉(Cd)(0、0.5、5 mg/kg)胁迫下艾纳香各器官的抗性生理、亚细胞Cd分布和化学形态的变化情况。结果表明,随着外源Cd处理浓度的增加,艾纳香各器官Cd含量均增加,且表现为叶>茎>根;地上部Cd富集系数表现为0.5 mg/kg处理组(8.16)>对照组(2.40)>5 mg/kg处理组(1.65),Cd转运系数表现为对照组(2.35)>5 mg/kg处理组(1.90)>0.5 mg/kg处理组(1.79)。艾纳香各器官非蛋白巯基化合物总量表现为茎>叶>根。各器官超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)活性均随着外源Cd处理浓度的增加呈现先升后降的趋势。各器官亚细胞Cd相对比率均表现为细胞壁>可溶组分>细胞器,且含量随着Cd处理浓度的增加而增加。在Cd胁迫下,各器官Cd化学形态主要以迁移力、毒性处于中间水平的氯化钠提取态和迁移力弱、毒性小的醋酸提取态为主。本研究结果表明,艾纳香通过非蛋白巯基化合物的螯合作用、植株抗氧化作用以及细胞壁沉积和Cd化学形态的改变达到解毒作用。

水淹条件下秋华柳亚细胞中镉的分配特征

选取秋华柳(Salix variegata)扦插苗为研究对象,通过设置0、0.5、2、10 mg/kg 4个镉胁迫浓度,研究了水淹条件下秋华柳根、枝、叶亚细胞中镉的分配特征。结果表明:(1)试验各处理组秋华柳存活率均为100%,表现出良好的镉和水淹耐受能力。(2)与对照相比,在水淹条件下,各处理组秋华柳根、枝和叶的细胞壁仍是镉最主要的富集部位。各处理组植株细胞壁中的镉含量显著高于其他组分,质体中镉含量次之,细胞核和线粒体组分中的镉含量始终处于较低水平。(3)水淹显著提高了秋华柳根细胞壁中的镉含量,显著降低了高浓度镉处理(10 mg/kg)下萌枝细胞壁中的镉含量,但对叶细胞壁中的镉含量没有显著影响。(4)水淹显著提高了秋华柳根细胞中质体中的镉含量,对萌枝、叶细胞质体中的镉含量没有显著影响。研究证明,水淹条件下,秋华柳根枝叶细胞壁仍然是镉积累富集的最主要部位,从而减少了重金属对植物细胞的伤害。秋华柳适用于三峡消落带镉污染区域的植物修复。