一种可诱发高滴度的针对人乳头瘤病毒HPV16,HPV52,HPV58中和抗体反应的HPV16嵌合病毒样颗粒疫苗的研究

人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒（VLP）主要诱发型别特异性中和抗体,增加L1VLP型别虽可扩大保护范围,但疫苗生产成本显著增加。HPV16,HPV52及HPV58是我国的主要高危型别。本文将HPV58次要衣壳蛋白L2aa.16-37多肽（与HPV52L2aa.16-37序列相同）插入HPV16L1的h4-βJ coil区,利用昆虫表达体系构建获得16L1h4-58dEVLP,协同人用佐剂氢氧化铝和单磷酰脂质A（Alum-MPL）免疫小鼠。活性检测结果显示16L1h4-58dE VLP免疫血清可中和17种HPV假病毒中的16种,其中针对HPV16的平均中和抗体滴度最高（滴度,76 800）,与HPV16L1VLP对照组的相当（P〉0.05）;重要的是,针对HPV58及HPV52的平均中和抗体滴度均大于103（分别为4 050和1 725）;另外,还可中等滴度中和HPV45（550）,HPV18（506）,HPV33（500）,HPV39（463）,HPV68（431）,HPV6（300）,HPV57（150）,HPV11（125）及较低滴度的中和HPV2/HPV27（40）,HPV35（38）,HPV5（25）,HPV31（13）,但对HPV59没有中和活性。因此,以本研究构建16L1h4-58dE VLP进行广谱HPV疫苗的研究,可望降低疫苗成本,具有应用前景。

类病毒颗粒展示人免疫缺陷病毒V3抗原诱导小鼠产生跨型中和抗体

目的:人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染是获得性免疫缺陷综合征(艾滋病)的主要病因。HIV-1的包膜糖蛋白gp120的第三可变区(V3)对病毒的感染至关重要,本研究旨在探讨V3作为疫苗研制的可能性。方法:本研究将V3_(NL4-3)序列296-311(aa CTRPNNNTRKSIRIQR)插入人乳头瘤病毒(HPV)L1病毒样颗粒(VLPs)中进行融合表达,免疫Balb/c小鼠。随后通过基于免疫斑点印迹法(ELISPOT)的HIV中和筛选平台筛选到表位特异性的小鼠单克隆抗体(mAbs),并通过中和实验和ELISA对单抗进行性质鉴定。结果:筛选到的大多数单克隆抗体只能中和HIV_(NL4-3),可以与多种亚型gp120结合。对不同毒株的中和实验发现,mAb 4H4可以中和实验室现有的毒株。4H4特异识别V3_(NL4-3)的296-305肽段,是V3相对保守的区域。结论:筛选到交叉中和的特异针对V3的单克隆抗体表明,V3-HPVs具有开发成HIV疫苗的潜力。

CpG联合铝佐剂增强RBD-Fc重组蛋白诱导小鼠免疫反应效果的研究

由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起的2019冠状病毒病(Coronavirus disease 2019,COVID-19)大流行对全球健康和经济构成了严重威胁,SARS-CoV-2关切变异株(Variants of concern,VOCs)的出现更增加了疫苗研发的难度,因此,优化设计对突变株具有广谱免疫反应的疫苗显得尤为重要。本研究选取具有大量显性中和表位的受体结合域(Receptor-binding domain,RBD)蛋白作为目标抗原,在SARS-CoV-2经典株RBD序列的基础上引入多个VOCs的关键突变位点,将其与人IgG1 Fc片段融合表达,并结合CpG单佐剂、氢氧化铝单佐剂或CpG与氢氧化铝复合佐剂两剂次免疫小鼠,比较CpG联合铝佐剂相比单独使用铝或CpG佐剂诱导细胞免疫和体液免疫反应的增强作用,同时观察小鼠产生抗不同VOCs活病毒的交叉中和抗体滴度。结果显示,与单佐剂相比,RBD-Fc蛋白结合CpG与氢氧化铝复合佐剂免疫小鼠可产生最高的IgG结合抗体及高水平Th1偏向的细胞免疫应答。同时,小鼠血清还可以有效地中和SARS-CoV-2贝塔株(GMT:11143)、德尔塔株(GMT:4850)、经典株(GMT:3675),甚至是奥密克戎BA.1株(GMT:1393)和BA.5株(GMT:459)的感染。这些结果表明含有突变位点的SARS-CoV-2 RBD-Fc重组蛋白具有良好的潜力,联合使用CpG和铝佐剂可明显提高和平衡小鼠的细胞免疫反应,产生对不同SARS-CoV-2高滴度的交叉中和抗体,可作为一种广谱疫苗进一步研究和开发。