MALDI-TOF质谱在院内感染致病菌检测中的应用

目的采用MALDI-TOF质谱分析方法鉴定院内感染致病菌。方法同步使用VITEK-2和MALDI-TOF质谱鉴定院内感染致病菌。从检测时间、鉴定率及检出数量进行两种方法的对比。将微生物大分子指纹图谱进行共性峰比对计算,获得院内感染致病菌株间同源性结构关系的差异。结果共检出31株大肠埃希氏菌、28株肺炎克雷伯氏菌及解鸟苷酸拉乌尔菌等罕见致病菌9株。MALDI-TOF质谱检测能够在1h内检出所有的致病菌,且鉴定率和检出数量高于VITEK-2。结论致病菌的院内感染呈现科室为中心点源传播的模式。MALDI-TOF质谱检测速度快、准确率高,能够进行临床耐药菌的聚类分析,有望成为致病菌鉴定和临床耐药菌风险监测工作的主要技术力量。

基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统的血流感染致病菌早期检测

目的基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)建立早期血流感染致病菌检测体系。方法选取大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、变形杆菌、肺炎链球菌等10种临床最常见的病原菌作为检测对象,结合多重PCR技术和Mass ARRAY iPLEX单碱基延伸技术、MALDI-TOF MS技术,模拟细菌感染血液样本建立MALDI-TOF MS细菌核酸检测体系,测定其灵敏度;选取2017年3-5月在解放军总医院急诊科收集的疑似脓毒症患者血液样本33例对该体系进行验证,并将检测结果与微生物科血培养结果进行比较。结果本研究所建立的MALDI-TOF质谱血液致病菌检测系统可同时检测分属两组的10种细菌,所有细菌样本均可见延伸峰;灵敏度为100CFU/ml;与33例临床血培养鉴定结果的阴性符合率为100%(27/27),6例血培养阳性样品中有2例为摩氏摩根菌和人葡萄球菌感染,因这两种细菌不包含在10种检测对象之内而未能通过质谱检出,其余4例血培养阳性样品与质谱检测结果的符合率为100%。结论本研究建立的MALDI-TOF质谱检测体系可从全血样本中直接检测10种临床常见血流感染致病菌,无需进行培养,与传统血培养及生化鉴定相比具有耗时短、灵敏度高、准确度高等优势,可在一定程度上满足临床早期、快速诊断血流感染致病菌的需求。

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱研究细菌性血流感染的血清多肽指纹图谱

目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱系统(MALDI-TOF MS)分析金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌引起的血流感染血清多肽指纹图谱,寻找差异多肽峰并建立相应的诊断模型。方法建立ICR小鼠金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌血流感染模型,收集血清标本,经弱阳离子交换磁珠纯化,MALDI-TOF MS检测及BioExplorer生物软件分析研究金葡菌感染组与正常对照组、大肠埃希菌感染组与正常对照组间血清多肽指纹图谱。结果比较金葡菌感染组与正常对照组发现,表达上调的多肽有6个,表达下调的多肽有7个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。比较大肠埃希感染组与正常对照组发现,表达下调的多肽有5个,表达呈先下调后上调的多肽有4个,表达呈先上调后下调的多肽有8个。结论利用MALDI-TOF MS技术和Bio Explorer软件研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌血流感染的血清多肽,可以发现感染组与正常对照组间的差异多肽并有效地建立这两种细菌感染的诊断模型,对于细菌性血流感染的诊断具有一定的价值。

基于MALDI-TOF MS与FCM联合应用对临床血流感染病原体鉴定和药敏试验新方法的建立和应用

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)与流式细胞学(FCM)联合应用在临床血流感染(BSI)病原体快速鉴定和药敏试验中的意义及应用价值。方法采用分离胶-吸附法菌体分离系统直接将菌体从血培养阳性瓶中分离,通过流式细胞学(FCM)与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)联合应用,快速对病原体进行鉴定和药敏试验。结果 MALDI-TOF MS法和VITEK2系统对常见菌都有超过90%的鉴定到种的能力(t=12.70,P=0.213)。MALDI-TOF MS较VITEK2有更高的鉴定到群和属的能力(t=6.31,P=0.027;t=8.64,P=0.031)。FCM法的药敏结果与VITEK2系统结果几乎完全一致(t=4.30,P=0.127),且FDA的加入可以很好地发现感染菌群中的耐药异质性。结论联合应用MALDI-TOF MS与FCM对临床BSI病原体进行鉴定和药敏试验的结果与传统方法间有很好的一致性,且报告时间可由传统的36,72h缩短至3h以内。该方法对BSI的快速诊断有较大意义和较好的临床应用价值。

MALDI-TOF MS直接鉴定原始尿液中的病原菌

尿路感染是临床最常见的感染性疾病之一,也是医院获得性感染的主要病因[1].目前国内外诊断尿路感染的“金标准”仍是清洁中段尿培养[2],而此种方法常常需要2～5d才能得出细菌鉴定及药敏结果,不能及时为临床诊断治疗提供病原学依据.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）是近些年来发展起来的一种新型软电离有机质谱,可以根据细菌的组分获得其肽质量指纹谱检测并鉴定细菌,其方便、快速、准确的优点对微生物的鉴定具有重要意义[3-5].

泛耐药鲍曼不动杆菌医院获得性感染相关因素分析

目的研究泛耐药鲍曼不动杆菌（PDRAB）医院获得性感染的临床因素、菌株耐药性与分子溯源，分析不同株系流行特征与感染相关因素。方法收集北京同仁医院2009年1月至2011年1月9次医院感染流行分离的PDRAB60株及临床资料；纸片琼脂扩散法检测其对12种抗生素的耐药表型；分别应用重复序列PCR（REP—PCR）和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF—TOFMS）对流行菌株进行基因水平和蛋白水平的溯源和鉴定。结果除2株菌对亚胺培南、美罗培南敏感外，其余抗生素均耐药。60株PDRABREP—PCR检测分为REP—A～L共12型，MALDI-TOF—TOFMS分为a～e5个类型。与MALDI—TOF—TOFMS相比，REP—PCR分型结果更为精细准确。呼吸机的携带与交叉传播可能是造成2009年7—10月呼吸科PDRAB大流行的主要原因；医护人员手传播是造成2010年1—2月外科重症监护病房PDRAB感染的关键因素；超级传播者鼻咽部或呼吸道PDRAB对周边环境的污染与传播是造成其余7次PDRAB流行的主要原因；急诊科是本院PDRAB获得性感染的传染源。结论早期识别和隔离超级传播者、加强环境器械消毒和医护人员手卫生、规范抗生素的使用是控制医院获得性感染的关键要素。MALDI—TOF—TOFMS方便、价廉、快速鉴定病原菌及分型优势有望成为微生物鉴定分型发展的方向。