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题名新冠病毒N蛋白纳米抗体制备及检测卡组装
被引量:1
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作者
吴方晖
阴忆烽
刘艳丽
雷美玲
宋云扬
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机构
中国国民核生化灾害防护国家重点实验室
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出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第3期389-393,共5页
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基金
国民核生化灾害防护国家重点实验室应急科研基金(SKLNBC2020-5)。
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文摘
目的通过制备新冠病毒N蛋白纳米抗体,将其应用于新冠病毒N蛋白抗原检测。方法将新冠病毒N蛋白免疫羊驼,构建N蛋白纳米抗体基因文库,通过噬菌体展示技术淘筛对新冠病毒N蛋白具有亲和力的纳米抗体,将纳米抗体基因克隆到酵母载体,挑取阳性克隆菌株诱导表达,亲和层析纯化分泌蛋白,透析脱盐和浓缩后,采用ELISA法筛选对新冠病毒N蛋白高亲和性纳米抗体,交叉配对筛选出1对纳米抗体制备成胶体金免疫层析检测卡,滴加N蛋白溶液到样品孔观察检测线和质控线。结果共筛选出46株不同序列的纳米抗体,优选其中6株表达、纯化和浓缩得到纳米抗体,抗体浓度>1.0 mg/mL。ELISA筛选结果显示,6株纳米抗体均对N蛋白有高亲和力,抗体配对实验筛选到1对抗体可以夹心法检测新冠病毒N蛋白,组装成胶体金免疫层析检测卡,对新冠病毒N蛋白抗原检测可见明显检测线和质控线条带,检测限≥10μg/mL。结论制备的纳米抗体可以用于胶体金纳米抗体免疫层析检测卡,实现对新冠病毒N蛋白的检测。
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关键词
新冠病毒N蛋白
纳米抗体
噬菌体展示
交叉配对实验
胶体金免疫层析
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Keywords
SARS-CoV-2 N protein
nanobody
phage display
cross-pairing experiment
colloidal gold immunochromatography
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分类号
R373
[医药卫生—病原生物学]
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