牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白1/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用

目的探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白1(Epac1)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路抑制大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法24只SD大鼠随机分为:假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建立MI模型,假手术组只穿线不结扎。检测大鼠心功能变化;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏病理学变化,天狼星红染色观察心脏纤维化,电镜观察心肌线粒体损伤情况;Western Blot检测Epac1、CaMKⅡ等蛋白变化。结果(1)大鼠MI 4周后,与假手术组比较MI组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)均降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)和舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)增加(P<0.01),牡荆素组大鼠心脏LVIDs、LVIDd、LVPWs和LVPWd较MI组降低,LVFS和LVEF均升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)牡荆素可降低大鼠心脏重量指数(P<0.01),并减小MI组大鼠心肌细胞横截面积,同时减轻大鼠左心室壁心肌纤维化程度(P<0.01),牡荆素组大鼠心肌胞浆内线粒体肿胀较MI组减轻,线粒体形态较完整,空泡形成较少;(3)Western Blot结果显示牡荆素抑制大鼠MI后Epac1激活(P<0.01),抑制其下游CaMKⅡ激活与细胞外调节激酶的磷酸化(P<0.01),同时可抑制B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)上调(P<0.05),上调Bcl-2(P<0.01),抑制凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase 3)的活化(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Epac1/CaMKⅡ通路,改善大鼠MI后心脏功能,抑制心肌肥大和纤维化。

心肌细胞内的Cl^-/HCO_3^-交换蛋白及其在实验性心肌缺血损伤中的作用

心肌细胞中存在阴离子交换蛋白(AE),其主要作用是转运Cl-/HCO3-,调节细胞内PH和细胞内[Cl-]。文献表明AE1、AE2、AE3在心肌细胞mRNA水平均有表达,但在蛋白水平上表达的主要有nAE1和cAE3。缺血条件下,心肌细胞膜上Cl-/HCO3-交换蛋白可激活,导致[Cl-]i增加与酸中毒,造成心肌细胞损伤。除去细胞外Cl-或运用Cl-阻断剂,多种原因诱导的再灌注性心律失常发生率显著降低,表现出较好的抗心律失常作用。

钠钙交换蛋白与心肌保护

钠钙交换蛋白在心肌细胞内Ca2+浓度的调节中起着重要作用。在心肌缺血再灌注损伤中,钠钙交换蛋白被认为是钙超载的主要路径,从而导致心肌细胞的机械和电活动功能障碍。钠钙交换蛋白抑制剂benzyloxyphenyl衍生物(KB-R7943、SEA0400和SN-6)能特异地、有效地抑制钠钙交换蛋白的Ca2+内流模式,提供良好的心肌保护作用。

次乌头碱对心肌细胞钠通道SCN5A及钠钙交换蛋白mRNA表达的影响

目的观察次乌头碱(HA)对原代培养乳大鼠心肌细胞钠(Na)通道SCN5A亚基、钠钙交换蛋白(NCX)mRNA表达的影响。方法体外培养乳大鼠心肌细胞,采用RT-PCR法测定Na通道SCN5A及NCX mR-NA表达。结果 HA作用15 min时,60和120μmol/L HA均能增加心肌细胞膜Na通道SCN5A及NCX的mRNA表达量(P<0.05);动态观察HA对心肌细胞上述基因表达的影响,60μmol/L HA对心肌细胞作用15及60 min可引发Na通道SCN5A及NCX mRNA的表达量增多(P<0.05)。结论次乌头碱(≥60μmol/L)可通过增加心肌细胞膜Na通道SCN5A、NCX mRNA表达,激活L-Ca通道,参与细胞内钙超载及心律失常的发生过程,在乌头碱类天然药物中毒时干预上述靶点基因改变可缓解中毒性心律失常的发生。

大鼠心肌细胞阴离子交换蛋白免疫细胞化学定位的研究

目的：观察带３ 样蛋白（ Ａ Ｅ３）在成年大鼠心肌细胞的免疫细胞化学定位，并对其生物学意义作初步的探讨。方法：采用免疫细胞（组织）化学酶染色法及免疫荧光技术研究带３ 样蛋白在心肌细胞的定位，第一抗体为红细胞带３ 蛋白单克隆抗体。结果：免疫化学酶染色显示带３ 样蛋白存在于成年大鼠心肌细胞膜及膜的皱褶或折入处，免疫荧光法显示带３ 蛋白单克隆抗体标记了心肌细胞膜和肌纤维横纹结构的部位。结论：阴离子交换蛋白（ Ａ Ｅ）免疫细胞化学定位表明该蛋白分布于心肌细胞膜及肌纤维横纹结构的部位，这种分布特性提示 Ａ Ｅ在精确调节细胞内ｐ Ｈ、神经体液刺激的信号传导及将收缩蛋白和细胞骨架“铆定”到胞膜的过程中起着非常重要的作用。

钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响

为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异。结果显示:HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞。结论:NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞。

大鼠阴离子交换蛋白合成肽抗体制备及鉴定

根据带 3蛋白 (阴离子交换蛋白 )拓扑学模式、氨基酸保守片段、功能片段、天然抗原表位 ,设计大鼠带 3膜外侧片段合成肽 ,制备抗合成肽 ( 1 2肽 )抗体 ,同时制备抗大片段带 3抗体加以印证 .多项免疫学实验鉴定结果表明 ,该 1 2肽是带 3抗原决定簇之一 ,也是带 3发挥阴离子转运功能的关键肽段 ;1 2肽的氨基酸组成与序列在各种属间高度保守 .免疫金银显色———扫描电镜结果给出该 1 2肽为带 3蛋白膜外侧区片段的最直接证据 .制备的抗带 3抗体可作为研究带 3结构与功能、探讨与带

实验性高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响

目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以及NHE1蛋白的转运活性和表达水平。结果高血氨肝细胞模型肝细胞内pH值下降,NHE1蛋白的转运活性和表达水平升高,肝细胞数量降低和凋亡率升高。结论高血氨导致的肝细胞损伤可能与降低肝细胞内pH值,激活NHE1蛋白有关。

钠钙交换蛋白特异调控与相关临床疾病研究进展

钠钙交换蛋白是广泛存在于动物细胞膜上的一种离子转运蛋白,分为SLC8基因家族编码的钠钙交换蛋白(NCX)和SLC24基因家族编码的钾依赖的钠钙交换蛋白(NCKX)。新发现的线粒体NCLX由SLC8B1基因编码现被认为是NCX家族成员,对线粒体钙稳态起重要作用。NCX与心脑血管疾病、肿瘤、糖尿病关系密切;而NCKX参与光感、嗅觉、皮肤色素沉着、脑功能的调控。对钠钙交换蛋白的研究可为临床相关疾病的研究提供新思路。

抑制钠氢交换蛋白下调IL-8表达和促进p38磷酸化

我们前期的研究证明,抑制钠氢交换蛋白1(NHE1)可以减少VEGF表达从而抑制K562细胞诱导的血管生成。本研究探讨抑制NHE1后其他可能的血管生成因子变化及相关机制。用NHE1特异性抑制剂卡立泊来德10μmol/L处理K562细胞;蛋白芯片筛选NHE1抑制后血管生成因子的表达变化,实时定量PCR验证卡立泊来德处理后白介素-8(IL-8)的表达水平;构建K562稳定干扰NHE1细胞株,实时定量PCR验证干扰NHE1后IL-8的表达变化,Western blot检测卡立泊来德处理后细胞内p38磷酸化水平;p38抑制剂SB203580处理K562细胞,实时定量检测IL-8表达变化。蛋白芯片筛选结果显示,卡立泊来德处理后K562细胞中IL-8表达显著下调;实时定量结果进一步验证了这种抑制效应;卡立泊来德处理后p38磷酸化水平显著上调;卡立泊来德处理后加入SB203580抑制p38,IL-8表达可以部分恢复。结论:抑制NHE1可能通过促进p38磷酸化,下调促血管生成因子IL-8的表达。

钠-氢交换蛋白mRNA在人胎儿两个发育阶段中的组织特异性表达

钠 氢交换蛋白 (Na+ H+ exchangers ,NHE)至少包含 6个不同的亚型 ,生长因子可激活其表达。目前 ,对在发育过程中NHE的表达了解甚少。本文利用RT PCR观察了 4种NHE亚型的mRNA在人胎儿的两个不同发育阶段 (11周、16周 )在不同组织中的表达 ,以研究它们的发育调控。结果显示 ,NHE1mRNA在两种胎龄的多种组织中均有表达。和 16周胚胎相比 ,11周的胚胎的NHE1mRNA的表达较弱 ,并且表现出明显的组织差异。据此推测 ,NHE1的管家 (house keeping)功能可能至少在 11周就开始形成 ,而最迟在 16周已基本建立 ;NHE2和NHE3mRNA在 11周和16周的胚胎组织中的特异性表达呈现相反的变化趋势及组织分布上的重叠 ,后者与NHE2和NHE3在成人组织中的分布及功能的重叠的特点相吻合 ;NHE5mRNA的表达在 11周的胚胎组织中比较普遍 ,而在 16周的胚胎组织中则局限在小脑组织中。本研究表明 ,在人胚胎发育的 11～ 16周期间 ,NHE的组织特异性表达表现出时间依赖性的调控 ,而在不迟于胚胎发育的第 16周 ,具有“管家功能”

人肺癌组织细胞Na^+/H^+交换蛋白-1基因的表达与其抗凋亡的关系

目的 :通过对临床人肺癌组织Na+/H+交换蛋白 1(NHE 1)mRNA的表达的检测 ,探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 :采用RNA原位分子杂交法 (RNA IMH)检测了 2 7例人肺癌组织和正常肺组织NHE 1mRNA的表达。结果 :人肺癌组织细胞NHE 1mRNA的表达显著增强 ,呈过表达 ,而各病理类型间无显著差异。结论 :人肺癌组织细胞中NHE 1mRNA过表达这一区别于正常组织细胞的分子生物学特征与肿瘤细胞的抗凋亡特性的形成密切相关 。

网格蛋白内吞途径在轮状病毒感染对Caco-2细胞钠氢交换蛋白3调控中的作用

目的研究轮状病毒(RV)感染对表达钠氢交换蛋白3(Na^+-H^+exchanger 3,NHE3)的Caco-2细胞表面NHE3蛋白水平和生物活性的影响及其调控机制。方法构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、网格蛋白(clathrin)拮抗剂氯丙嗪(CPZ)组和CPZ+RV组,采用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na^+-H^+交换活性和细胞表面NHE3水平,Western blot法测定细胞clathrin水平。结果与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na^+-H^+交换活性以及细胞表面NHE3水平明显降低,此抑制作用不能被clathrin拮抗剂CPZ完全抵消,此外RV感染可引起clathrin水平升高,这一作用也可被CPZ取消。结论 RV感染对NHE3水平及生物活性的调控与clathrin依赖性内吞途径有一定关系,但也可能还受到其他内吞途径的影响。

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的观察钠氢交换蛋白1(Na+/H+,exchanger 1,NHE1)在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应(real time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Bloting)技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5-(N-乙基-N-异丙基)]阿米洛利[5-(N-ethyl-N-isopropyl)amiloride(EIPA)]处理胃癌SGC-7901细胞24h,MTT法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和SGC-7901胃癌细胞中,其mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);EIPA10μm/mL,20μm/mL,30μm/mL处理,均能抑制胃癌SGC-7901细胞的过度增殖(P<0.05),且呈现良好的剂量-效应关系。结论 NHE1mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,NHE1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。

糖尿病大鼠心肌钠钙交换蛋白与肌浆网钙泵mRNA的表达

大鼠腹腔注射链佐霉素制备实验性糖尿病大鼠模型。将大鼠成模后分别于4、6和8周时取心肌组织,进行病理学检查及计算心脏相对重量;应用RT-PCR方法扩增钠钙交换蛋白Ⅰ亚型(NCX1)及肌浆网钙泵2 a亚型(SERCA2 a)两种产物,计算其mRNA相对数量的变化。发现糖尿病各组心脏湿重与体质量的比值均明显高于对照组,病理检查显示心肌细胞呈不同程度变性坏死。8周时,糖尿病组NCX1和SERCA2 amRNA相对含量比对照组明显减少(P<0.05)。提示在糖尿病大鼠心脏功能的减退与NCX1和SERCA2 a的mRNA水平降低有一定关系。

细胞膜钠钙交换蛋白与心肌缺血/再灌注损伤

Sarcolemmal sodium-calcium exchanger is considered to be an important factor in the initiation of is-chemia-reperfusion injury on myocardium.This reviewprovides an overviewof the mechanisms in cardiac reperfusion in-jury and suggests a potential therapy.

钠氢交换蛋白3亚型的研究进展

机体酸碱平衡稳定是生命活动得以维持的基本条件之一，酸碱平衡对维持机体内环境稳态具有非常重要的生理学意义。细胞主要依赖于质膜上的钠氢交换蛋白（Na^＋-H^＋ exchanger，NHE）来调控细胞内pH的动态平衡，影响细胞内外离子的跨膜转运、细胞容积和渗透压等。NHE3是该蛋白家族发现的第三个亚型．在肾脏组织有高表达．是主要的钠离子通道。主要参与Na^＋、HCO3白蛋白的重吸收，对机体尿钠及液体重吸收和维持酸碱平衡方面发挥了重要作用。本文就NHE3的结构、功能、调节及其与肾脏疾病的关系作一综述。

钠/钙和钠/氢交换蛋白与心肌缺血再灌注损伤

Ca2+超载与缺血/再灌注损伤有密切关系,钠/钙交换蛋白和钠/氢交换蛋白是缺血/再灌注Ca2+超载过程中两个至关重要的因素。目前已有很多钠/钙交换蛋白(NCX)抑制剂和钠/氢交换蛋白(NHE)抑制剂用来防止Ca2+超载引起的缺血再灌注损伤。

糖基化终末产物对大鼠平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响

目的观察糖基化终末产物对大鼠血管平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响。方法采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。用体外制备的外源性糖基化终末产物和血管平滑肌细胞共孵育24h,利用BCECF通过荧光分光光度计检测细胞上钠/氢交换蛋白1活性。结果不同浓度糖基化终末产物(1、5和10mg/L)与血管平滑肌细胞共孵24h后,能显著增强钠/氢交换蛋白1的活性,分别使钠/氢交换蛋白1的活性从0.66±0.05升高至0.71±0.03、0.80±0.07和0.88±0.06(P<0.05或P<0.01),使钠/氢交换蛋白1 mRNA表达从0.77±0.07分别升高至0.88±0.08、1.23±0.06和1.33±0.08(P<0.05或P<0.01);预先使用糖基化终末产物受体阻断剂5 mg/L,钠/氢交换蛋白1活性比糖基化终末产物处理组明显降低(0.68±0.04比0.90±0.05,P<0.05);使用不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶阻断剂PD98059(1、10和25μmol/L),使钠/氢交换蛋白1活性从0.94±0.05分别降至0.86±0.06、0.74±0.05和0.66±0.07(P<0.05或P<0.01)。结论外源性糖基化终末产物能诱导血管平滑肌细胞上钠/氢交换蛋白1活化,其机制可能与糖基化终末产物激活糖基化终末产物受体,引起丝裂原活化蛋白激酶信号通路活化有关。

钠氢交换蛋白的研究进展

钠氢交换蛋白是一类存在于细胞膜表面的离子转运泵蛋白家族。它负责将细胞内H+与胞外Na+按照1∶1的比例进行交换来调控细胞内pH的动态平衡,影响细胞的容积、运动、分化、凋亡和营养吸收,从而参与许多复杂的生理和病理过程。迄今为止,钠氢交换蛋白家族已发现有9个成员,各亚型间具有结构相似性和组织分布特异性。深入研究NHE的结构、功能及基因表达调控,将为人和哺乳动物的营养生理、疾病治疗提供新的思路和方法。