甲胎蛋白单克隆抗体制备及微粒操控检测方法建立

目的制备甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)单克隆抗体并鉴定其生物学特性,以该抗体初步建立基于微粒操控技术的AFP抗原快速检测方法。方法以重组表达的AFP蛋白为免疫原,腹腔免疫8周龄雌性Balb/c小鼠。取4次免疫后小鼠的脾细胞,以PEG1500为诱导剂与骨髓瘤细胞进行融合,筛选分泌AFP抗体的单克隆杂交瘤细胞株,将该细胞株注射Balb/c小鼠并制备AFP单抗。将制备的AFP单抗固定于微电极芯片表面,通过交流动电效应加速AFP抗原富集到微电极芯片并与AFP单抗发生特异性的免疫结合反应,芯片连接阻抗仪即可监测免疫反应情况,初步建立基于交流动电效应与阻抗免疫传感相结合的AFP抗原检测方法,并对该方法进行评价。结果共筛得7株能稳定分泌抗AFP单抗的杂交瘤细胞株,诱导的小鼠腹水型抗体效价达到1∶2048000以上。建立了基于微粒操控技术的AFP抗原快速检测方法。检测芯片的最佳清洗方式是:异丙醇超声清洗10 min→无水乙醇超声清洗10 min→超纯水超声清洗10 min;AFP抗体的最佳包被条件是10μg/ml、37℃、1 h。微粒操控技术检测AFP抗原加标血清的下限达1 ng/ml,肝癌血清样品的检出阳性率达95%,特异性(检出阴性率)达96.7%。结论制备了特异性、高效价的AFP单克隆抗体,以此AFP抗体建立的微粒操控技术具有良好的特异性、重复性及较高的灵敏度,无复杂的数据处理及反复清洗步骤,以较低的成本实现血清肝癌标志物AFP在1 min内快速完成现场检测,具有较高的临床应用价值,为肝癌的早期诊断提供了一种新的检测技术。