蛋白质交联-絮凝沉淀法筛选产转谷氨酰胺酶放线菌株的效果分析

为寻找一种廉价、快捷的方法选育转谷氨酰胺酶(MTG)菌株,采用平板稀释法分离土壤放线菌,根据转谷氨酰胺酶催化反应结果的特性,设计了一种蛋白质交联—絮凝沉淀性能测定方法对分离菌株进行复筛,用比色法测定MTG酶活,并用插片法进行复筛菌株的初步鉴定。结果表明:从土壤中分离出16株放线菌,经复筛后有6株放线菌产生沉淀,即具有MTG酶活性,且其中LH-011的MTG酶活最大,达0.76u·mL-1。经初步鉴定,6株放线菌均属于放线菌科链霉属。可见,用蛋白交联—絮凝沉淀性能测定的方法可以筛选出产MTG菌株。

微囊藻毒素-LR致小鼠肝、肾和睾丸细胞DNA-蛋白质交联的研究

目的探讨微囊藻毒素-LR所致小鼠肝、肾、睾丸细胞DNA-蛋白质交联(DPC)作用。方法以昆明种雄性小鼠为实验对象,腹腔注射染毒,采用KCl-SDS沉淀法检测小鼠肝、肾、睾丸细胞中交联DNA和游离DNA的量,计算其DPC系数,DPC系数=交联DNA/(交联DNA+游离DNA),判断DNA与蛋白质的交联程度。结果在小鼠肝细胞中,微囊藻毒素-LR各染毒组DPC数量均有显著增加,其DPC系数与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。在小鼠肾细胞中,微囊藻毒素-LR染毒剂量为3μg/kgbw和6μg/kgbw时,DPC数量显著增加,其DPC系数与对照组相比差异有显著性(P<0.05);染毒剂量为12μg/kgbw时,DPC数量未增加,其DPC系数与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。在小鼠睾丸细胞中,染毒剂量为3μg/kgbw时,DPC数量未增加,其DPC系数与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。染毒剂量为6μg/kgbw和12μg/kgbw时,DPC数量显著增加,其DPC系数与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。结论在一定的染毒剂量下,微囊藻毒素-LR可以引起小鼠肝、肾、睾丸细胞DNA-蛋白质交联。

纳米淀粉的制备与改性

通过交联沉淀法制备了淀粉纳米粒子,并对其进行表面修饰,将苄基取代淀粉葡萄糖单元上的羟基,经FT-IR、1H-NMR、XRD及SEM等对其结构与形态进行表征,得到取代度(DS)约为0.05、且具有一定疏水性的苄基淀粉微细颗粒。纳米淀粉和苄基淀粉微细颗粒的结晶结构不同于原淀粉,结晶度明显降低。它们的形态呈球形,粒径分别为50 nm～100 nm和50 nm～500 nm。所制备的纳米淀粉及苄基淀粉微细颗粒对聚合物基体具有增强、增韧的功能,有望在橡胶等聚合物基体中应用,且苄基淀粉微细颗粒具有双亲性结构,可作为高分子表面活性剂应用。

谷氨酰胺转氨酶菌株的筛选及其产酶条件研究

利用蛋白质交联-絮凝沉淀性能测定方法,从土壤中分离得到1株高产谷氨酰胺转氨酶(microbial transglutaminase,MTG)的菌株,命名为HF-82,初步确定为链霉菌属。单因素试验确定最适产酶氮源和碳源分别是蛋白胨和葡萄糖,正交试验确定最适发酵培养基为(g/L):葡萄糖25.0,蛋白胨20.0,酵母提取物5.0,Mg SO4·7 H2O 2.0,K2HPO4·3 H2O 2.0,Na H2PO42.0,Ca CO33.0,p H7.0。此发酵工艺条件下,MTG的酶活可达到0.53 U/m L。