酶联免疫吸附试验检测食管癌高、低发区粮食中交链孢酚单甲醚的研究

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，分别对食管癌高发区林县和低发区商丘各６４份粮食（玉米３２份、小麦３２份）中交链孢酚单甲醚（ＡＭＥ）进行检测。结果：林县６４份粮食中检出ＡＭＥ２５份，阳性率为４０．３％；商丘６４份粮食中有１５份阳性，阳性率为２３．４％。两者比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。不论是小麦还是玉米，ＡＭＥ含量林县均高于商丘，这与粮食中互隔交链孢霉污染情况相符。结果提示：ＡＭＥ可能是人食管癌的病因之一。

农产品及其制品中交链孢酚和交链孢酚单甲醚研究进展

交链孢菌(Alternaria spp.)是一类重要的植物病原体,能产生多种毒素,其中交链孢酚(alternariol,AOH)和交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)是目前从食物中检出的比较普遍和主要的2种交链孢毒素,可广泛污染蔬菜、水果及谷物等农产品及其制品。本文对AOH和AME的结构及理化性质、毒性、产生影响因素、生物及化学合成和污染现状等进行了综述,并对交链孢毒素限量标准的制定、快速检测方法等进行了展望。

绿茶、胡萝卜和洋葱粗提物对交链孢酚单甲醚损伤DNA的抑制作用

互隔交链孢霉(alternaria alternata)是一种广泛存在的植物病原菌,可侵染多种粮食、水果和蔬菜。它是食管癌高发区林县粮食中的一种优势污染菌,与食管癌的发生密切相关。交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)是此菌的主要代谢物之一,它不仅能引起培养的哺乳动物细胞DNA的损伤,还可在体外直接引起DNA的双链断裂。为了寻找能够对抗AME损伤DNA的物质。

高效液相色谱法快速检测小麦中交链孢酚单甲醚

开发了一种高效检测小麦中交链孢酚单甲醚(alternariolmethyl ether,AME)的高效液相色谱(HPLC)检测方法。将样品采用乙腈/甲醇/水(45/10/45,体积比),30℃振荡提取30min后,经Bond Elut Plexa固相萃取小柱净化后,上样检测,检测器采用紫外检测器。该方法AME检测限为2.52μg/kg,定量限为8.40μg/kg,线性范围为0.25~2.00μg/mL,加标样品中不同浓度的AME回收率为80.1%~88.3%,日内精密度和日间精密度分别为2.13%~6.59%和3.57%~8.43%。

交链孢酚和交链孢酚单甲醚生物合成调控研究进展

交链孢酚和交链孢酚单甲醚是由丝状真菌链格孢属产生的次级代谢产物,广泛存在于谷物、水果和蔬菜中,是食品和饲料生产、加工、运输及储存过程中最普遍和不可避免的污染物。不仅会造成巨大的经济损失,而且威胁人类健康。测定交链孢酚和交链孢酚单甲醚的含量,对保障食品质量安全极其重要。标准物质是保证食品中毒素分析检测数据准确、可靠的基础,对毒素的监测具有重要意义。目前,交链孢酚和交链孢酚单甲醚产量低,国内外均无大量制备,进而导致标准物质缺乏,难以满足应用需求。针对这一现状,提高菌株中毒素的产量成为亟待解决的问题。随着分子生物学的发展,这2种毒素的生物合成途径虽已鉴定,但对毒素生物合成过程的调控机制知之甚少。本文概述了交链孢酚和交链孢酚单甲醚生物合成及其调控机制的研究进展,以期为交链孢霉菌株的改造提供借鉴,进而降低生产成本,储备交链孢毒素,为食品安全及质量控制提供物质基础。

交链孢醇和交链孢醇单甲醚的制备

按Ｓｔｉ等的方法制备交链孢醇和交链孢醇单甲醚，发现当完全按照他们的实验条件操作时，不能每步反应都获得所报道的产率，而且相差颇大，为此改变反应条件以使产率较为满意。本文详细报道这一实验结果。

失活乳酸菌去除链格孢酚单甲醚的工艺优化

目的筛选高效吸附链格孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)的灭活菌种,对菌粉去除AME的工艺进行优化。方法首先,通过高效液相色谱法鉴定灭活菌粉对AME的吸附能力,筛选出AME的吸附能力最强的A1-11菌株。然后,单因素试验分析灭活乳酸菌菌粉添加量、AME质量浓度、吸附时间、pH对AME去除率的影响。最后,采用响应面法Box-Behnken设计对吸附AME的工艺条件进行优化。结果得出最适吸附条件为灭活乳酸菌菌粉添加量1.2 g、AME质量浓度0.30μg/mL、吸附时间27 h、溶液pH 4.5,预测AME去除率为51.05%,实际试验的AME去除率为50.98%。同时建立了AME去除率与各因素间的二次多元回归方程。并对该模型进行了验证,结果表明模型拟合程度高,与模型预测结果相近。结论筛选出A1-11菌株吸附AME的能力最强的,研究结果可对林果中AME的脱除提供实际应用价值。

食品中交链孢酚和交链孢酚单甲醚的危害评估

目的对交链孢酚(alternariol,AOH)和交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether,AME)可能对人体健康产生的有害影响进行危害评估。方法本研究采用系统文献检索方法,确定研究对象和研究内容,制定检索策略进行系统文献检索。通过NoteExpress软件进行文献查重,并通过人工筛选获得文献,纳入危害评估报告。结果AOH和AME是食品污染中常见2种链格孢毒素。其污染食品以植物性膳食为主,其中谷物的污染占主要地位。体内毒代动力学研究显示,AME大部分不被吸收,经粪便排出。胃肠道对AOH的吸收性研究结果存在差异。体外代谢研究显示,AOH和AME的I期生物转化为2-、4-、8-和10-羟基衍生物。II期生物转化为硫酸盐缀合物,其代谢产物可能具有毒理学相关性。AOH和AME动物毒性资料不充足,现有研究显示,AOH和AME具有急性毒性:AOH和AME腹腔注射DBA/2小鼠LD50值大于400 mg/kg·bw。AOH和AME已有较为明确的体外遗传毒性数据,且体内毒性研究显示AME对SD大鼠具有遗传毒性,可诱导基因突变、染色体断裂和DNA损伤。但AOH对雄性SD大鼠的体内遗传毒性不明确,可能会累积诱导遗传突变。亚急性毒性研究显示,AOH和AME可致动物肝、肾和脾受损。经口途径或经皮下注射给予小鼠AME均未显示胚胎毒性效应。但一定剂量下经皮下注射AOH或者AOH+AME(1∶1)混合物显示出胚胎毒性。AOH和AME尤其是AOH可能有类雌激素效应,通过影响黄体酮和类固醇等合成而影响哺乳动物生殖发育。体内外研究表明,长期暴露于链格孢毒素可能是诱发食管癌的危险因素。体外研究显示,AOH和AME可影响细胞活性、抑制细胞生长、抑制蛋白质合成,并诱导细胞凋亡,且两者可能具有协同毒性作用。结论EFSA专家组设定AOH和AME的毒理学关注阈值(threshold of toxicological concern,TTC)分别为2.5 ng/kg·bw/d。根据AME多终点28 d毒性试验研究结果,推导出人类AME遗传毒性BMDL10对应的关键评估终点值(point of departure,PoD)PoD为5.33ng/kg·bw/d。鉴于上述AOH和AME的毒性效应,且AME+AOH可能具有联合毒性,需关注AOH和AME及其联合暴露可能引发的人类健康风险。

河南林县居民粮食中互隔交链孢霉及其毒素污染和人群暴露状况研究

背景与目的:调查林县居民粮食中互隔交链孢霉(Alternariaalternata)污染情况及人群中互隔交链孢霉有关毒素-交链孢酚(Alternariol,AOH)和交链孢酚单甲醚(alternariolmonomethylether,AME)暴露水平,探讨互隔交链孢霉毒素污染与林县食管癌发生的关系。材料与方法:对林县居民粮食及尿样中互隔交链孢霉做分离培养,采用薄层层析(TLC)法检测AOH和AME,并与本室10年前相应检测结果比较。结果:①2004年小麦中互隔交链孢霉污染率与1981年相比差异具有统计学意义(χ2=359.283,P<0.01)。②2004年小麦中AOH阳性率低于1995年(χ2=5.152,P<0.05)。③2004年小麦面粉中AOH阳性率低于小麦原粮(χ2=5.128,P<0.05)。④2004年99份尿液中4份AOH阳性,1份AME阳性,明显低于1992年检测结果,其差异均有统计学意义(χ2=7.082,P<0.01;χ2=14.282,P<0.01)。结论:2004年河南林县居民粮食中互隔交链孢霉及其相关毒素污染状况有不同程度的减轻。此与当地食管癌发生率的降低可能有一定的关系。

粮油制品中交链孢霉毒素的测定

采用玉米赤霉醇(Zearalanone,Zea)作为内标物,建立了液相色谱串联质谱法(LC/MS-MS)ESI-食品中的3种交链孢霉毒素的测定方法。优化了样品的前处理方法,对比了液液萃取与Micostep226、C18等2种SPE柱对提取液的净化效果,其中液液萃取法对提取液进行萃取回收率最高。方法的线性范围在0.48～480ng/mL之间,检出限在0.12～1.2ng/mL之间。采用所建立的方法对深圳市场销售的大米、花生、植物油等制品进行分析,均未检出3种交链孢霉毒素。对大米与植物油样品2个浓度水平的加标实验,回收率在60.4%～87.2%之间,RSD在7.6%～14.8%之间。

麦饭石对霉菌毒素AME AOH的吸附清除实验

目的 研究麦饭石对有致癌作用的互隔交链孢霉毒素AME和AOH的吸附清除作用。方法 把麦饭石装入两组过滤柱中 ,把毒素配制成 0 5mg/ml浓度液体 ,加入两组的过滤柱中 ,分别测定在紫外光下荧光斑点颜色和面积 ,来记为强阳性、弱阳性。结果 原液 ,对照组AME和AOH都是强阳性 ,空白组为阴性。结论 麦饭石对霉菌毒素有较强的吸附清除能力 ,吸附清除率可认为达98% ,是一种比较结合实际成本低廉的去毒途径。

赤峰市售小麦粉交链孢霉毒素污染研究

采用液相色谱串联质谱法测定赤峰地区120份小麦粉中交链孢菌酮酸(TeA)、交链孢酚(AOH)、腾毒素(TEN)和交链孢酚单甲醚(AME)的含量。结果表明,TeA检出率为90%,TEN检出率为100%,AOH和AME的检出率均为96.7%。

胶束电动毛细管色谱法分析3种交链孢毒素主成分含量

目的 建立胶束电动毛细管色谱法(micellar electrokinetic chromatographic, MEKC)测定3种交链孢毒素[交链孢酚(alternariol, AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether, AME)和交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)]主成分含量的新分析方法。方法 以未涂层熔融石英毛细管柱(50μm×30 cm, 20 cm, i.d.)为分离柱,分别以3种分离缓冲溶液[40 mmol/L Na_2B_4O_7-120 mmol/L十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)(含体积分数为5%的乙腈)、30mmol/LNa_2B_4O_7-40mmol/LSDS(含体积分数为30%的异丙醇)和60mmol/L Na_2B_4O_7-180 mmol/L脱氧胆酸钠]及2种样品缓冲溶液[8 mmol/L硼砂(含体积分数为57%的甲醇用于AOH和TeA)、8mmol/L硼砂(含体积分数为57%的异丙醇用于AME)]分析AOH、AME和TeA的主成分含量。结果 AOH、AME、TeA的方法精密度分别为0.05%、0.01%和0.21%(n=5),检出限分别为5、15和0.5 mg/L。主成分含量分别为99.94%、99.78%和97.28%,且与高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)的结果无显著差异(α=0.05)。结论 MEKC法可作为HPLC法测定3种交链孢毒素主成分含量方法的互补方法 ,能够满足3种交链孢菌毒素主成分含量分析的要求。

白光光照对交链孢毒素合成的调控研究

目的研究白光光照对交链孢(Alternaria)毒素合成的影响。方法在光/暗培养条件下,比较分析白光光照对2种交链孢菌株(ATCC 66981和Pear-3)的菌丝生长、孢子形成以及毒素合成的影响。结果持续白光照射对交链孢菌丝生长影响不显著,而显著抑制其孢子形成。光照刺激交链孢菌ATCC66981中交链孢酚(alternariol, AOH)、交链孢酚单甲醚(alternariol monomethyl ether, AME)和腾毒素(tentoxin, TEN)3种毒素的产生。菌株持续光照培养30d,AOH、AME和TEN毒素浓度分别为120、182和173?g/L;较之黑暗培养,分别增加了1.1、5.9和9.6倍。光照抑制交链孢菌Pear-3中细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)毒素的合成。菌株光照培养6 d, TeA毒素浓度达到142?g/L;而黑暗培养后其浓度高达325?g/L,毒素产率增加了1.3倍。结论光照不影响交链孢菌丝生长,而对孢子形成影响显著;持续白光照射能够促进交链孢中AOH、AME和TEN毒素的产生,而抑制TeA毒素的产生。

二苯-α-吡喃酮类链格孢霉毒素和人血清白蛋白的相互作用及机理探究

为探究链格孢酚单甲醚(AME)和链格孢酚(AOH)这两种二苯-α-吡喃酮类链格孢霉毒素与人血清白蛋白(HSA)之间的分子相互作用及机理,本研究模拟血液生理pH值,采用稳态荧光光谱、同步荧光光谱、3D荧光光谱以及圆二色光谱等方法研究两者之间的相互作用。结果表明,AME和AOH与HSA相互作用均发生了静态猝灭,具有较高亲和力,以氢键和范德华力(ΔH<0,ΔS<0)结合形成1:1复合物,互作过程中这两种类毒素破坏了人血清白蛋白中稳定二级结构的氢键网络,使蛋白二级结构展开,且AME和AOH使人血清白蛋白中的α-螺旋结构含量从48.93%分别减少至39.41%和44.01%,并使色氨酸残基极性降低、疏水性增加,但酪氨酸残基极性变化不大,即结合位点可能位于色氨酸残基所在的空腔(即结合位点I);AME对HSA的猝灭程度、猝灭常数(K_(sv))及结合常数(K_(a))均大于AOH,结合距离也更小(r_(AME)=2.56 nm<r_(AOH)=2.60 nm)。本研究结果为进一步探究二苯-α-吡喃酮类链格孢霉毒素的毒代动力学和药代动力学,完善丰富其毒理学相关资料,以及进行风险评估和在食品中限量标准的制定提供了参考依据。

链格孢霉毒素检测方法研究进展

链格孢霉菌属于丝状真菌,是一种普遍存在于环境中的病原体和腐生菌,是低温环境下导致水果、蔬菜等农产品腐烂变质的主要微生物。链格孢霉毒素中有70多种具有明显毒性,对人或牲畜具有诱变性、致癌性和致畸性等慢性或急性毒性作用,因此引起了科学家们的广泛关注。但到目前为止,国内外现行的食品中真菌毒素的限量标准中尚不包括链格孢霉毒素,并且通常采用液相、液相-质谱、气相、气相-质谱等相关的检测方法进行检测。本文首先对链格孢霉菌的3种主要的次级代谢产物——链格孢酚、链格孢酚单甲醚和细交链孢菌酮酸的分类及毒性性质进行介绍;其次,对其主要的传统检测方法和快速检测方法进行综述;最后,对链格孢霉毒素检测的新技术新方法进行了展望。