皖南地区705例孕妇BoBs技术快速产前诊断的临床研究

目的评估细菌人工染色体标记-微球鉴别分离技术(BACs-on-Beads,BoBs)在快速产前诊断染色体变异中的临床价值。方法选取2021年6月至2022年12月在皖南医学院第一附属医院产前诊断中心进行遗传咨询和具有产前诊断指征的705名孕妇作为研究对象,在超声引导下进行羊膜腔穿刺术,采集羊水用于核型分析和产前BoBs检测。结果705例羊水样本的BoBs检测与核型分析成功率为100%,共检测出62例(8.79%)染色体异常,其中43例常染色体数目异常,包括34例21三体综合征、7例18三体综合征和2例13三体综合征;13例性染色体数目异常,包括4例47,XXX,7例47,XXY,1例47,XYY和1例45,X;6例染色体微重复/微缺失和染色体结构异常。结论BoBs检测技术在快速产前诊断染色体非整倍体和常见9种微缺失/微重复综合征方面具较好的临床价值,可单独检测或联合传统的染色体核型分析相互验证,对减少出生缺陷的发生具有临床意义。

快速产前遗传学诊断新技术进展

产前遗传学诊断已成为先天出生缺陷干预的重要手段。多年来产前诊断技术一直停留在细胞学水平,近年分子遗传学用于产前诊断取得了满意的结论,已成为传统技术手段的有效替代或补充。本文就临床应用最广泛的间期荧光原位杂交(iFISH)、定量荧光PCR技术(QF-PCR)、多重连接依赖探针扩增技术(MLPA),以及近年发展具有更高通量和高精度的微阵列-比较基因组杂交(aCGH)、基于第二代高通量测序技术(HTS)的非侵入性产前诊断(NIPD)、基于"液相芯片"的BACs on Beads(BOBs)等技术做一综述,阐明其应用现状、优势与局限,以期对临床和科研提供一定的指导。

多重探针连接依赖式扩增技术在常见非整倍体染色体异常快速产前诊断中的应用研究——附407例检测报告

目的:评估现有多重探针连接依赖式扩增技术(MLPA)方案作为常见非整倍体染色体异常的快速产前诊断方法的有效性。方法:对407例羊水样本进行MLPA试验及羊水细胞染色体G显带核型分析,所有样本进行MLPA获得的扩增产物信息经GenemarkerV 1.80软件进行定量分析,观察样本DNA拷贝数的变化,并将所得结果与染色体核型分析结果进行比较,计算其检测的敏感度、特异度及阳性预测值。结果:407例样本中,应用MLPA技术发现正常样本397例及染色体非整倍体异常样本9例。异常结果包括21三体6例、18三体1例、X三体1例及X-单体1例,与羊水细胞培养染色体G显带核型分析结果一致。MLPA检测出的1例X单体疑似样本,经核型分析结果验证为正常核型。MLPA检测非整倍体性染色体异常的敏感度为100%,特异度为99.75%,阳性预测值为90%。结论:MLPA分析技术作为一项快速产前诊断技术,具有良好的特异性和应用价值。

先天性脊柱骨骺发育不良的产前快速分子诊断

目的:对先天性脊柱骨骺发育不良提供1种快速分子产前诊断技术。方法:对该患者于孕14周进行羊膜囊穿刺,获取羊水20 ml,提取羊水细胞基因组DNA。选用3个短串连重复(STR)序列位点,进行荧光PCR检测,以排除母源细胞污染。在此基础上,对COL2A1基因的第23外显子进行扩增,并以此为模板,针对COL2A1基因的第23外显子1510G→A的突变进行SSP-PCR。根据是否存在特异性的扩增条带进行判断,对初次扩增的产物测序,以证实巢式SSP-PCR的结果。结果:对D13S 317、D18S51和D21S11位点的STR检测结果排除母源细胞的污染。羊水样本仅在野生型反应管中有扩增产物,表明胎儿是COL2A1基因的第23外显子1510 G的纯合子,未带COL2A1基因的第23外显子1510G→A的突变。测序结果与SSP-PCR结果一致。结论:SSP-PCR技术快速简便、敏感特异,可作为该突变的快速分子诊断。其他已知点突变遗传病的快速分子诊断也可以考虑使用SSP-PCR技术进行。

荧光原位杂交技术在快速产前诊断应用的研究进展

随着分子生物学技术和医学遗传学的发展,产前诊断技术向早期、快速、准确、无创伤发展,使越来越多的出生缺陷能够在胚胎发育的较早期诊断出来。荧光原位杂交技术(FISH)是一种为遗传病诊断提供更直观、快速诊断的分子细胞遗传技术,随着DNA技术的发展与染色体特异性探针的出现,FISH技术越来越多应用于生殖医学领域的临床诊断。该文对FISH技术在快速产前诊断中的研究进展作一综述。

荧光原位杂交技术在非整倍体快速产前诊断中的临床应用

荧光原位杂交技术（fluorescentinsituhy—bridization，FISH）是20世纪80年代发展起来的一种集分子生物学、细胞遗传学及免疫学为一体的新技术。在基础生物学领域和临床研究如：染色体疾病产前诊断、实体瘤特异性染色体数目异常、

应用MLPA分析技术快速产前诊断21-三体综合征

目的探讨应用MLPA技术快速产前诊断21一三体综合征的可行性。方法对181例羊水样本进行MLPA实验及羊水细胞染色体G显带核型分析，将MLPA实验结果与染色体核型分析结果进行比较。结果180例羊水样本均应用MLPA技术一次检测成功，1例样本因DNA浓度问题需二次检测，羊水标本MLPA检测的24h检出率达到99．4％。从样本中检测出4例染色体异常（3例2l一三体，1例X单体），检测结果与羊水细胞培养染色体G显带核型分析结果一致。结论羊水MLPA分析技术可用于快速产前诊断21-三体综合征。

QF-PCR技术在539例胎儿快速产前诊断中的应用

目的使用定量荧光PCR(QF-PCR)技术对产前诊断样本排除母体细胞污染(MCC),同时行常见染色体非整倍体快速产前诊断。方法对539例因产前筛查异常而行产前诊断的样本通过短串联重复序列(STR)位点比对排除MCC以确保标本适用于后续产前检测,同时对胎儿及对应孕妇样本行13,18,21,X,Y五条染色体非整倍体的快速诊断,并与核型分析结果进行比较。结果发现1例绒毛样本完全为母体组织,3例胎儿样本存在一定比例的MCC。发现胎儿染色体非整倍体数目异常样本共计20例(3.7%),其中21三体12例,18三体2例,13三体2例,XO单体2例,XYY1例,21三体嵌合体1例。孕妇染色体非整倍体数目异常样本2例,XXX1例,XO嵌合体1例。与染色体核型分析方法比较,有16例产前诊断样本的染色体结构异常QF-PCR未检出,有2例产前诊断样本由于QF-PCR试剂盒局限性无法判断,其余产前诊断样本检测结果一致。结论QF-PCR技术可排除产前诊断样本中的MCC,也能快速诊断常见染色体非整倍体的数目异常,具有简便快速、特异性高的优点。但该方法也具有其局限性,只能检出大于20%的嵌合体,也无法检出存在的染色体结构异常。

QF-PCR技术应用于快速产前诊断额外检出母体性染色体数目异常3例报告

目的探讨定量荧光PCR(Quantitive fluorescent PCR,QF-PCR)技术在快速产前诊断中额外检出母体性染色体数目异常的临床应用。方法对2例无创产前基因检测(Non-invasive prenatal testing,NIPT)提示性染色体异常与1例B超提示胎儿超声软指标异常的孕妇行产前诊断,获取孕妇外周血与羊水行QF-PCR检测,以及羊水行染色体微阵列分析(Chromosomal Microarray Analysis,CMA)与核型分析,并对QF-PCR检测提示性染色体数目异常的孕妇行核型分析进一步验证。结果3例孕妇的羊水样本均排除母体细胞污染,产前诊断结果显示3例胎儿未见检测范围内的染色体异常;QF-PCR检测显示3例孕妇存在性染色体非整倍体数目异常,经外周血染色体核型验证1例孕妇为47,XXX/45,XO嵌合体,2例孕妇为47,XXX三体。结论QF-PCR技术用于产前诊断不仅可快速检出胎儿常见的染色体非整倍体数目异常,排除样本母体细胞污染,同时可额外检出母体的性染色体数目异常,对提高孕妇性染色体异常检出率及提供优生优育指导具有重要意义。

杂合型SNP定量焦测序分析技术在唐氏综合征快速产前诊断中的应用研究

目的：应用杂合型SNP定量焦测序分析技术进行唐氏综合征（DS）的快速产前诊断,并探讨其在临床应用中的可行性。方法：选取21号染色体PLAC4、COL6A2、COL6A1基因的rs1053315、rs818219、rs2839110、rs1042917、rs35548026、rs8130833这6个SNP位点进行研究。对10例正常人和5例DS患者的外周血样本的6个SNP位点进行检测,建立用于诊断DS的杂合型SNP等位基因比值阈值。然后根据建立的阈值,对40例产前诊断样本（35例羊水样本和5例脐带血样本）行定量焦测序分析检测,从而对其21号染色体的情况做出诊断,并用染色体核型分析法验证焦测序检测的结果。结果：（1）等位基因比阈值范围：1.0∶1.0~1.3∶1.0判断为21号染色体二倍体;1.6∶1.0~2.2∶1.0判断为DS;1.3∶1.0~1.6∶1.0或6个位点均为纯合则结果不能判断。（2）定量焦测序分析检测：27例为21号染色体二倍体胎儿;7例为DS胎儿;5例6个SNP位点均为纯合,结果不能判断;1例因PCR扩增失败,未检测出。检测结果均在6~8h内获得,且应用便携式焦测序仪1次可检测8个样本。（3）染色体核型分析检测：33例为21号染色体二倍体胎儿,7例为DS胎儿。（4）焦测序方法的检出率为85%（34/40）,准确性为100%（34/34）,其中具有杂合型SNP位点样本的检出率及准确性均为100%（34/34）。结论：采用杂合型SNP定量焦测序分析技术诊断DS,检测过程快速、简便、检出率高、准确性好,可应用于DS的临床快速产前诊断。

STR-PCR在产前诊断胎儿唐氏综合征中的应用

目的:研究通过多重荧光定量PCR诊断胎儿染色体非整倍体用于临床快速产前诊断的可行性。方法:从孕中期羊水中提取胎儿DNA,通过多重荧光定量PCR使用STR对13、18、21号染色体进行非整倍体筛查,筛查结果异常者再进行快速诊断。用PCR诊断的羊水标本同时使用"金标准"染色体核型分析法做对比。结果:34例羊水标本中2例标本由于母血污染严重未行PCR检测,1例标本经PCR及核型分析均失败,29例标本经PCR和核型分析诊断为正常染色体,2例标本经PCR和核型分析诊断为21-三体。结论:通过STR-PCR法使用多重荧光酶联聚合反应探针产前诊断胎儿唐氏综合征是临床快速产前诊断的有效方法之一。

多色荧光STR新位点在诊断染色体数目中的应用研究

目的应用13、18、21号染色体上18个STR新位点(D21S11L、D21S1409、D21S1809、D21S2052、D21S1994、D21S1446、D21S1435、D21S11D21S1442、D21S1809、D21S1432、D13S800、D13S886、D13S796、D18S877、D18S851、D18S847、D18S847),了解新位点在诊断染色体数目中的应用价值。方法在50例正常人血清标本和5例21-三体综合征患者血清标本中,通过PCR扩增基因测序的方法,用SPSS12.0软件直接计算新位点杂合度(H)和多肽信息含量(PIC),并对13、18、21染色体数目进行诊断。结果 13号染色体中STR位点H0.6-0.74,PIC0.65-0.7。18号染色体中STR位点H0.69-0.81,PIC0.68-0.8。21号染色体中STR位点H0.7-0.87,PIC0.63-0.84。21、13、18染色体,二倍体检出率为100%。在5例21-三体阳性标本中,三倍体检出率为100%。结论 STR新位点杂合度和信息含量高,可在诊断21、13、18染色体数目中被应用。

早期自然流产遗传学分析中BoBs分子诊断技术的应用及其临床意义研究进展

早期自然流产是目前妇产科较为常见的一种并发症,其主要原因在于染色体异常,有数据显示[1],80%的自然流产均为染色体异常导致。羊水、绒毛等作为胚胎发育的附属物质,广泛用于胚胎遗传学中染色体DNA检测中。G显带核型分析方法是目前公认的检测染色体的金标准,但由于检测周期较长,对操作人员的技术要求较高,需要进行细胞培养,不适应目前产科的发展趋势。FISH、QF-PCR、MLPA以及Array CGH等快速诊断技术被研发出来,但由于检测范围限制,难以检测非整倍体染色体以外的异常,且容易检测到未知性的染色体,加大了进一步研究的成本。BoBs分子诊断技术弥补上述技术的不足,快速高效的检测样本,检出率高,无需进行细胞培养,且检测结果的准确度精准,是目前临床上使用量最高的一种诊断方法。

改进荧光原位杂交技术快速产前诊断常见染色体异常

目的探讨改进荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）技术，快速产前诊断羊水间期细胞常见染色体异常的临床应用可行性。方法改进FISH杂交过程的处理方法和探针杂交液用量，对300例羊水间期细胞进行FISH检测，以羊水细胞培养、核型分析作为结果验证。结果300例羊水样本，FISH检出17例异常：7例21三体、4例18三体、2例X、I例XXY、1例XXX、1例XYY、I例三倍体，与羊水细胞核型分析结果完全符合。结论改进FISH技术后检测的准确性、特异性没有受到影响，且检测成本明显降低，可以在临床推广应用于快速产前诊断常见染色体异常。

3812份羊水细胞的快速诊断与染色体核型分析的联合产前检测结果分析

目的探讨快速诊断技术联合染色体核型分析在胎儿染色体病产前诊断中的意义。方法利用荧光原位杂交(FISH)和多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对3 812例有产前诊断指征的孕妇羊水细胞进行快速产前诊断,同时对相应标本进行染色体核型分析。结果通过联合检测共发现:染色体多态性改变128例,占总染色体核型的3.36%(128/3 812);异常核型137例,异常检出率为3.59%(137/3 812)。其中:1FISH及MLPA快速诊断可于48 h内快速检出常见染色体非整倍体数目异常94例,占异常核型的68.61%(94/137),与之后的染色体核型分析结果一致;2染色体核型分析:于3周后可检出分别占异常核型的27.74%(38/137)、3.65%(5/137)的染色体结构畸变和标记染色体。结论应用FISH和MLPA快速诊断技术,联合染色体核型分析进行胎儿染色体病的诊断,具有良好的临床应用价值。

高龄妊娠孕妇快速产前诊断应用分析

目的探究快速产前诊断方法在高龄孕妇产前染色体异常疾病诊断中的应用。方法本研究选取2011年1月-2014年7月于该院进行产前诊断的孕妇1 035例,进行染色体核型分析,并在羊水培养后行FISH技术检测。按年龄分为3组,35～37岁组、38～40岁组,〉41岁组,比较3组妊娠者染色体异常率、核型分析结果、FISH检测结果。结果 3组妊娠者染色体异常率分别为0.55%、2.05%、4.82%,随着妊娠者年龄增加,染色体异常率明显增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;核型分析显示,在1 035例高龄妊娠者中,共检出染色体异常者25例,异常率为2.41%,其中,21-三体综合征9例,13-三体综合征3例,18-三体综合征6例,X单体综合征7例,FISH检测与核型分析结果符合度为100%。结论快速产前诊断方法在高龄产妇产前染色体异常疾病诊断中具有重要临床意义,值得推广使用。

应用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术研究21-三体综合征胎儿羊水蛋白表达谱

目的:应用液体蛋白芯片飞行时间质谱技术分析21-三体综合征胎儿羊水的蛋白质表达谱,寻找具有潜在诊断意义的羊水标记物,以用于产前快速诊断21-三体综合征。方法:收集12例21-三体综合征和10例正常胎儿孕中期羊水标本,经SPE-C磁珠纯化、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析及FlexAnalysis3.0软件分析系统研究其羊水蛋白表达谱。每组样品重复检测3次。结果:质荷比(m/z)为8216.17Da和8935.58Da的蛋白丰度能较好的鉴别21-三体综合征组和正常组。结论:液体蛋白芯片飞行时间质谱技术作为研究蛋白表达谱的工具,具有良好的重复性和精确度,筛选得到的m/z为8216.17Da和8935.58Da的蛋白可能是潜在的21-三体综合征胎儿区别于正常胎儿的羊水标记物。

荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常分析

目的:探究荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常,以供临床参考以及研。方法:本次研究对象从2015年1月~2016年3月于我院诊断有产前指征的孕妇中选取120例,之后对孕妇采用羊膜腔穿刺获得羊水细胞之后,再采用荧光标记的DNA探针对羊水细胞间期核的DNA进行杂交,分析染色体非整倍体异常。结果:通过本文研究结果中可以看出,在120例孕妇的羊水细胞样本中,通过多色荧光原位杂交检验,检出胎儿畸形与不良孕产史患者的核型分析异常为0,荧光原位杂交检出结果同样也为0,而孕妇血清筛查高风险中可以看出,核型分析异常例数为1,荧光原位杂交检出结果为1。结论:采用荧光原位杂交技术快速产前诊断胎儿常见染色体非整倍体异常现象,具有一定的诊断价值,操作简便,诊断迅速,对样本的要求并不高,适用于任何核细胞的检测,值得临床进一步应用以及推广。

FISH产前诊断非整倍体染色体病的应用分析

目的探讨荧光原位杂交（FISH）技术产前诊断常见非整倍体染色体病的临床应用价值。方法对283例孕18～23周有产前诊断指征的孕妇采用FISH技术进行羊水细胞胎儿染色体快速产前诊断。结果FISH检测283例成功283例（100％），其中染色体数目异常10例（21-三体综合征4例，18-三体综合征3例，X单体2例，13-三体综合征1例）。9例均经临床证实与FISH诊断结果相符。结论FISH技术用于产前诊断常见非整倍体染色体异常，具有简便、快速、准确、可靠等优点，满足了孕妇对快速诊断的临床需求。