基于环介导等温扩增技术的产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌特异性检测

本研究旨在建立食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速检测方法。基于产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌合成酶基因cesB靶基因,设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立环介导等温扩增技术(LAMP)。然后采用2株产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌、19株蜡样芽胞杆菌和41株非蜡样芽胞杆菌验证了该LAMP具有很好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到1.49 pg/μL,纯菌的灵敏度为5×10~3 cfu/mL。人工污染米饭样品,当起始污染量为2 cfu/g时,37℃增菌培养6 h,用试剂盒法和煮沸法提取的DNA,都可以检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌。采用此LAMP方法进行了72份实际样品的检测,检出2份产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌阳性样品,与传统方法一致。因此,本研究建立的LAMP检测方法可应用于食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速特异检测。

基于MALDI-TOF MS技术快速检测产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌

该研究探讨了基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪快速鉴别产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的方法。通过对标准品进行分析,重新对特征峰进行定位并测定其灵敏度,并用正交试验分析不同培养条件下检验结果的差异,用优化后的培养条件对49株野生蜡样芽胞杆菌及3株标准菌株进行特异性检验。研究表明,MALDI-TOF MS可检测到产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌中呕吐毒素相应m/z值为1175的[M+Na]^(+)和m/z值为1191的[M+K]^(+)加合物特征峰,具有较高的灵敏度(0.01μg/mL),经极差分析显示,选用MYP培养基30℃培养12 h后的菌落能获得最稳定、响应值高(>104)的检验结果;方法应用验证表明,49株野生菌株中2株含ces基因的蜡样芽胞杆菌均检出,其余未含有ces基因的菌株均未检出。该研究建立的MALDI-TOF MS检测方法能直接快速准确检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌,该方法检测特异性强(100%),灵敏度高(0.01μg/mL),对于食品安全事故快速精准分析研判有重要的意义。

蜡样芽胞杆菌肠毒素FM(CwpFM)流行情况及其作用机制的研究进展

蜡样芽胞杆菌是一种广泛存在于环境和食物中的食源性致病菌,可引起肠胃炎和呕吐等多种疾病。蜡样芽胞杆菌孢子无法被巴氏消毒杀死且具有很强的黏附性,可传播到各种食品中,对食品安全和人类健康造成较大威胁。我国对于牛奶的需求不断增加,蜡样芽胞杆菌在乳中的分离率也呈现上升趋势。蜡样芽胞杆菌可产生多种毒力因子,包括成孔毒素、呕吐毒素、溶血素、肠毒素、蛋白酶和磷脂酶等,引发呕吐或腹泻型食物中毒。其中,蜡样芽胞杆菌分泌的肠毒素FM是一种细胞壁肽酶,也被称作CwpFM,其分离率高,但致病性尚不明确。本文首先对蜡样芽胞杆菌的毒力因子进行综述,其次对蜡样芽胞杆菌及其CwpFM在食物和环境等方面的流行情况进行总结,最后概述了CwpFM作用机制的研究进展。

基于QPCR快速检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的研究

为了建立基于QPCR的快速方法检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌,首先采用煮沸法提取蜡样芽孢杆菌基因组DNA,并利用普通PCR方法验证引物特异性,然后通过在米饭样品中添加目标菌,模拟受污染的实际样本,用QPCR技术定量检测米饭中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌。结果表明该方法具有快速、特异性强、灵敏度高和稳定性好的优点,能对产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌定量。不经过增菌培养,实际样品的检测限为9.8×101CFU/g;经过2 h的增菌培养,检测限能达到100CFU/g;并且米饭中添加其他杂菌后,不影响对蜡样芽孢杆菌的检测。建立的QPCR方法适用于米饭等相关淀粉类食品中产呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的检测,从而为监测该菌所致食品污染以及早期相关食物中毒提供快速定量检测方法。

云南边贸进口即食食品中蜡样芽胞杆菌污染状况及其呕吐毒素基因型检测

为探究云南省边贸进口即食食品中蜡样芽胞杆菌的污染状况及其呕吐毒素基因型携带情况,从云南边境各口岸进口食品贸易集散点(边民互市点、农贸市场以及进出口产品店等地)共采集市售包装样品224份。通过VITEK 2 compact全自动微生物鉴定系统和双重实时荧光聚合酶链式反应(Double real-time fluorescent polymerase chain reaction,Dual real-time PCR)技术对分离得到的蜡样芽胞杆菌进行鉴定,并对阳性菌株中的呕吐毒素基因进行检测。结果表明:蜡样芽胞杆菌在所采集样品中的检出率为20.09%(45/224),天保、金水河、瑞丽以及畹町各口岸检出率均高于10%。检出率较高的食品类别为:酱腌菜60%(3/5)、调味品50%(15/30)、水产及其制品46.67%(7/15);从45份阳性样品中共分离出113株蜡样芽胞杆菌,其中呕吐型毒素基因cesB的携带率为0.88%(1/113),呕吐型毒素基因携带率较低,但是蜡样芽胞杆菌的污染风险仍不可忽视。该研究结果对边贸进口食品安全、食源性疾病的监测及预防提供了理论依据。

蜡样芽胞杆菌毒素的最新研究进展

蜡样芽胞杆菌为人畜共患的食源性条件致病菌。该菌分泌的呕吐毒素与腹泻型肠毒素可致宿主出现呕吐或腹泻的临床症状。毒素的产生及毒性的强弱受多种因素共同调控,毒性较强时可导致宿主发生死亡。目前可知该菌的毒力在逐渐增强,宿主种类也在逐渐增多。本文对蜡样芽胞杆菌的cereulide、Hbl、Nhe、CytK及HlyII等毒素的结构、功能及致病机制进行阐述,以期能为今后蜡样芽胞杆菌的研究提供理论基础。

生食蔬菜模拟污染米饭样本中蜡样芽胞杆菌和呕吐毒素基因分布状况研究

目的分析被生食蔬菜模拟污染的米饭样本中蜡样芽胞杆菌(Bc)和呕吐毒素基因(ces)的分布状况,为Bc食物中毒科学防控提供基础数据。方法采集生食蔬菜样本50件,每件样本用0.85%生理盐水盥洗后污染“新煮熟米饭”,置于30℃、70%RH培养箱中放置24 h。对生食蔬菜和“污染米饭”进行Bc的定量计数、荧光PCR检测和数字PCR检测。对基于不同采集地点、不同蔬菜类型分组的生食蔬菜样本和及被其污染的“污染米饭”的各项检出率指标进行统计学分析。结果生食蔬菜样本中Bc检出率为80.00%(40/50),ces基因和Bac16s RNA基因检出率分别为0(0/50)和10.00%(5/50);“污染米饭”样本Bc检出率为94.00%(47/50),ces基因和Bac16s RNA基因检出率分别为14.00%(7/50)和90.00%(45/50)。采集自农贸市场和农户土地的2组生食蔬菜中Bc检出率差异有统计学意义(χ^(2)=11.063,P=0.00088校正),被上述2组生食蔬菜类污染的“污染米饭”Bac16s RNA基因检出率和ces基因检出率差异均有统计学意义(χ^(2)=3.926,P=0.0475校正;χ^(2)=5.444,P=0.0196校正)。7件“污染米饭”基于荧光PCR检测ces基因阳性,Ct值介于24.12~37.73,数字PCR结果介于6.8 copes/μL~6.2×10^(6)copes/μL。结论被生食蔬菜模拟污染的米饭样本可具有导致Bc食物中毒风险的病原学特征。

蜡样芽胞杆菌族毒素研究进展

蜡样芽胞杆菌族(Bacillus cereus sensu lato)包括几个具有密切系统发育关系的芽胞杆菌物种,产生的毒素种类繁多,备受人们关注。质粒在菌株中的水平转移,会改变其表型、致病性和毒力,同时也带来分类的问题。通过综述几种蜡样芽胞杆菌毒素的结构特性、作用机制及其危害或生物应用,从质粒水平转移的角度介绍蜡样芽胞杆菌族成员错综复杂的关系。

核酸试纸条快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因方法的建立

目的:基于核酸试纸条技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因的方法。方方法法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物并通过克隆转化鉴定PCR产物,建立并组装核酸试纸条,评价核酸试纸条的特异性、灵敏度和稳定性。结果:蜡样芽胞杆菌DNA浓度为300 mg·L^(-1),纯度约为1.60。PCR产物阳性条带经切胶回收、克隆转化和测序比对,与GenBank数据库中已登记的entFM相似性为100%。在pH值7.0条件下,每100μL胶体金溶液加入3.3μg链霉亲和素浓度标记,质控线浓度为1.8 g·L^(-1),检测线浓度为1 g·L^(-1)时,硝酸纤维素膜上质控线与检测线均可与PCR产物反应出现清晰的红色条带。按照最适条件组装成核酸试纸条,PCR产物6μL,样品展开液100μL,检测10 min后可观察结果。核酸试纸条特异性与电泳结果一致,仅蜡样芽胞杆菌为阳性结果,与金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌和沙门氏菌皆无交叉反应,为阴性结果;灵敏度检测,核酸试纸条DNA质量浓度同时降至10^(-3)mg·L^(-1)仍可准确检测,普通PCR电泳结果显示DNA质量浓度同时降至10-1mg·L^(-1)出现目的条带,核酸试纸条比普通PCR灵敏度提高100倍;稳定性检测,核酸试纸条在第6、9和12个月进行检测稳定性一致。结论:建立的核酸试纸条检测蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因灵敏度高、特异性强且具有良好稳定性,适用于快速鉴别蜡样芽胞杆菌entFM毒素基因。

基于多重PCR技术检测蜡样芽胞杆菌3种毒素基因方法的建立及评价

目的:基于多重PCR技术,建立一种快速检测蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM 3种毒素基因的方法,并评价其效能。方法:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,以蜡样芽胞杆菌nhe、cytK和entFM特异性毒素基因作为靶基因,采用NCBI primer-BLAST 5.0软件设计特异性引物,优化反应体系。建立三重PCR检测体系,并检测其特异性、灵敏度和稳定性。结果:煮沸法提取蜡样芽胞杆菌DNA,浓度为227 mg·L^(-1),纯度为1.50~1.60。采用多重PCR体系同时检测蜡样芽胞杆菌3种毒素致病基因,于退火温度56℃时,蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499的扩增片段为499 bp,基因引物cytK191的扩增片段为191 bp,基因引物entFM363的扩增片段为363 bp。PCR体系扩增蜡样芽胞杆菌3种毒素基因后条带清晰明亮,且无非特异性条带,与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌均无扩增,表明蜡样芽胞杆菌基因引物nhe499、cytK191和entFM363特异性强;3种引物在同一反应体系中互不干扰。灵敏度检测,多重PCR体系最低检测限可同时达到10^(-1)mg·L^(-1);稳定性检测,多重PCR体系自制备起每6个月检测稳定性一致。结论:建立的多重PCR检测体系对于蜡样芽胞杆菌nhe499、cytK191和entFM363 3种毒素基因灵敏度高、特异性强,检测结果准确稳定,检测体系具有良好稳定性,适用于快速检出蜡样芽胞杆菌的3种不同致病毒素基因。

蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析

蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一， 提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理，有可能制备诊断试剂， 从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的。从国内引起食物中毒的１００ 株蜡样芽胞杆菌中，选出试验用菌株。从培养后的上清液中， 经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素。溶血素由 Ｂ、 Ｌ１ 和 Ｌ２ ３ 种成份组成， 分子量分别为３５ 、３６ 和４５ｋ Ｄａ ３ 种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血， 使兔皮肤血管通透性增加， 兔小肠肠段结扎产生积液反应， Ｖｅｒｏ 细胞形态学改变。提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质，

蜡样芽孢杆菌中甲酸脱氢酶基因产氢研究

通过基因筛选,成功分离并克隆到蜡样芽胞杆菌XN12(Bacillus cereus XN12)的甲酸脱氢酶基因fdh F(formate dehydrogenase),该基因全长2937bp,GC含量39.3%,编码978个氨基酸,与已报道的蜡样芽孢杆菌Q1的fdh F基因(Gen Bank No.CP000227.1)同源性达到100%.将其连接在表达载体p ET32a上并融合His标签,构建了重组质粒p ET32a-FDHF-His,转入大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)后获得了高效表达.重组菌株经IPTG诱导后经Western Blot分析表明,重组蛋白分子量约为108k Da.通过对重组菌株产氢性能试验表明,重组菌对提高产氢率具有一定促进作用,产氢量为每消耗1mol的葡萄糖和甲酸盐分别能产生0.73mol和0.20mol的氢气.

蜡样芽胞杆菌肠毒素的研究动态

本文从该毒素的产毒条件,提纯方法、理化性状、生物学活性及检测方法等方面阐述了近年来国外的研究动态和现状。提示腹泻型肠毒素的生物学特性及其检测法类似于霍乱孤菌和产毒性大肠杆菌肠毒素;呕吐型肠毒素则接近于金黄色葡萄球菌肠毒素。为该毒素引起的食物中毒的防治,以及实验室诊断手段的筛选和建立提供参考依据。

蜡样芽胞杆菌食物中毒四例分析

蜡样芽胞杆菌食物中毒国内外有报导,为引起重视,本文就本地发生的一起蜡样芽胞杆菌食物中毒,综合分析如下:1

蜡样芽胞杆菌食物中毒

蜡样芽胞杆菌[Bacillus Cereus,下称蜡样菌]系 Frankland 于1837年发现,是一种需氧、有芽胞能腐败食物的肠道致病菌。该菌引起的食物中毒于1950年由挪威 Hau-ge’s 证实,1970年韦启伶在国内首次报道。病因食品除淀粉含量高的食物外,还有煎蛋卷饭、土豆菜肉蛋卷和海蛎干等,是世界各地常见的食物中毒之一。现将近年来国内外有关资科综述如下。

一起蜡样芽胞杆菌污染母乳化奶粉引起新生儿腹泻报告

一起蜡样芽胞杆菌污染母乳化奶粉引起新生儿腹泻报告江苏省海安县人民医院２２６６００花素林，郭素芬１９９１年５月１１日，我院婴儿室２２名新生儿发生腹泻，经细菌学检验，证实系进食受蜡样芽胞杆菌污染的母乳化奶粉所致，现报告如下。一、流行病学概况５月１１日晚１...

一起由金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒

目的:确定一起因食用糕点引起不适事件的病原菌。方法:GB/T4789-2003《食品卫生微生物学检验》、《卫生防疫微生物检验操作规程》。结果:从7份糕点中检测到带A型肠毒素的金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌(>106cfu/g)。结论:根据WS/T80-1996和WS/T82-1996确认该起食物中毒是由金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌引起。