稻瘟菌产孢和生长基因的鉴定

利用稻瘟菌 131株系的一个突变体H6鉴定出一个控制产孢和生长的基因,突变表型测定结果表明H6为产孢缺陷兼生长缓慢型突变体.Southern分析表明,此突变是由转化质粒单拷贝插入的结果.将H6与相反交配型菌株 15 2 8有性杂交,分离出 2 1个子囊孢子,突变表型与野生表型比例为 1∶1,表明此突变表型由单基因控制.潮霉素抗性与突变表型共分离表明外源质粒插入到基因的编码区.通过质粒拯救获得插入位点侧翼基因组序列,部分测序和同源性比较显示其与其他已经报道的基因没有同源性.

糙皮侧耳中产孢相关基因同源物stpo1的克隆及表达分析

根据肺形侧耳(Pleurotus pulmonarius)产孢相关基因stpp1,采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术克隆出糙皮侧耳(P.ostreatus)产孢相关基因同源物stpo1全长,并对其保守域进行生物信息学分析,使用pEASY-E2原核表达系统进行该基因的原核表达,通过荧光定量PCR分析stpo1表达模式。结果表明:糙皮侧耳stpo1全长cDNA序列为2556bp,预测编码851个氨基酸的蛋白质,具有错配修复DNA结合域(MUTSd)、ATP结合位点(ABC-ATPase)以及错配修复域(MutS),属于错配修复家族。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示stpo1在原核细胞中具有表达活性,定量PCR显示stpo1在糙皮侧耳不同发育阶段显现不同的表达水平并且在成熟子实体菌褶中的表达量明显高于其它部位,表明该基因可能与糙皮侧耳的孢子形成有相关性。

8个小麦条锈菌生理小种产孢相关基因PsCon1克隆及表达分析

为研究基因Pscon1在不同小种中核苷酸序列及相对表达量差异,以小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)基因组DNA为模板,在小麦条锈菌8个生理小种中分别克隆产孢相关基因Pscon1,并对其核苷酸和氨基酸序列进行比对及相对表达量分析。结果表明:在8个小种中分别克隆到条锈菌产孢相关基因Pscon1,基因大小为531bp,由3个外显子和2个内含子构成,开放阅读框长252bp,不同小种基因Pscon1核苷酸序列只在44,65,331,465,495和510bp位点处发生突变,均未引起氨基酸序列变化,且不同生理小种Pscon1在接种‘铭贤169’12h后相对表达量有差异,水源11-3最高,最低的是Hybrid46-8。推测基因Pscon1在小麦条锈菌不同生理小种产孢过程中相对表达量有差异,这将为进一步研究产孢量差异因素提供参考。

小麦条锈菌一个产孢相关基因PsCon1的克隆及表达特征分析

【目的】克隆小麦条锈菌产孢相关基因PsCon1,分析其在病菌不同发育时期的表达水平。【方法】利用RT-PCR和PCR技术克隆PsCon1的cDNA序列和基因组序列,采用生物信息学技术预测分析该基因的DNA序列结构及其编码蛋白的保守域等基本特性,运用实时荧光定量RT-PCR技术分析PsCon1在夏孢子,芽管以及不同侵染时间的表达水平。【结果】PsCon1由3个外显子和2个内含子构成,开放阅读框长为252bp,编码83个氨基酸;编码的蛋白PSCON1不含跨膜区,无信号肽,定位在细胞质,具有2个conidiation-specific protein6保守结构域。PsCon1与小麦秆锈菌核苷酸序列的一致性在外显子区为78%,内含子区为43%,与小麦秆锈菌(Puccinia graminis)的亲缘关系最近,与烟曲霉(Aspergillus fumigatus)和费氏新萨托(Neosartorya fischeri)的亲缘关系次之。PsCon1在小麦条锈菌萌发夏孢子时期基因表达量为新鲜夏孢子中的1.69倍。在亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后6h和24h表达量最高,分别为在新鲜夏孢子中表达量的3.21倍和2.91倍;在接种后24h至168h,基因表达基本呈下调趋势,在接种后168h的表达量最低,仅为夏孢子时期的0.0004倍,在接种后216h和264h,表达量有所增加,表达量约为接种后168h的15倍。在非亲和组合中,PsCon1在小麦条锈菌接种小麦后36h表达量最高,但仅为新鲜夏孢子基因表达量的0.13倍,基因表达总体呈下调趋势。【结论】PsCon1参与了小麦条锈菌对小麦的侵染,可能作为一个致病相关基因影响了条锈菌芽管和吸器的形成,同时促进了条锈菌在侵染过程中的产孢。PsCon1的克隆为进一步研究该基因在小麦与条锈菌互作过程中的功能奠定了基础。

稻瘟病菌致病机制及无毒基因的研究进展

介绍了国内外近年来关于稻瘟病菌致病机制、有性世代、无毒基因分析 ,重要功能基因克隆以及稻瘟病菌产孢遗传规律的研究进展和成果。

两株非典型烟曲霉临床株抗真菌药物敏感性和形态异常相关分子机制研究

目的:比较两株白色不产孢烟曲霉临床株(A1j和A2j)的抗真菌药物敏感性及形态异常产孢基因与Af293的差异性。方法:采用改良的琼脂稀释药敏实验方法检测A1j和A2j与模式对照菌Af293对伏立康唑(VRC)、伊曲康唑(ITC)和两性霉素B(AMB)的敏感性。采用PCR和RT-PCR的方法对A1j和A2j产孢相关基因brlA和wetA进行检测。结果:抗真菌试剂可抑制Af293、A2j和A1j的生长,差异无统计学意义。产孢诱导6h后,Af293中brlA基因转录水平显著上升,而A1j和A2j中对应的产孢基因转录水平无明显变化。brlA基因测序结果示A1j菌株无突变,A2j存在TCCT碱基缺失。结论:非典型烟曲霉A1j和A2j与标准株Af293在抗真菌药物敏感性方面没有差异,A2j存在形态异常产孢基因brlA突变。