产志贺样毒素大肠埃希菌Ⅰ类整合子的鉴定和分析

目的阐明各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producingE.coli,STEC)中Ⅰ类耐药整合子的分布、特征、所含基因盒的状况以及所表达的耐药信息。方法常规分离出大肠埃希菌、血清学分型,PCR法鉴定产stx1-2毒素性菌株;纸片扩散法对17种抗菌药物进行耐药性监测和分析;PCR法鉴定Ⅰ类整合子阳性株;PCR产物测序并对结果进行分析。结果各种标本中共鉴定出46株产志贺样毒素大肠埃希菌,其中23株为O157∶H7;全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%,氨苄西林为30.4%,而且有5株对至少>4种抗菌药物多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-氨苄西林-庆大霉素;46株分离株中有11株(23.9%)鉴定出Ⅰ类整合子,PCR产物测序得知9株携带aadA1基因盒,2株携带aadA2基因盒,均来自氨基糖苷类抗菌药物耐药菌株(39.3%),传递对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性。结论Ⅰ类整合子存在于各种来源的产志贺样毒素大肠埃希菌中,并携带相应的基因盒,决定着对氨基糖苷类抗菌药物的耐药性。

产志贺毒素大肠埃希氏菌活菌检测方法的应用现状及展望

产志贺毒素大肠埃希氏菌作为一种重要的食源性致病菌,会对人体健康造成严重威胁。对其进行快速、准确的鉴定检测是预防和控制相关疾病的有效手段。基于此,文章对目前可用于检测活体产志贺毒素大肠埃希氏菌的方法进行综述,主要包括传统的细胞培养方法、免疫学检测方法和分子生物学方法等,并对这些方法的应用和发展前景展开了深入探讨。随着分子生物学和生物工程技术的发展,不同检测方法联合使用可以克服单一方法的缺陷,从而取得更高效、准确的检测结果。

牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

于2018年9月—2019年3月,每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本,共抽取140个牛肉及制品样本,在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%,eae的阳性率为52.2%。每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%;eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份,样本阳性菌株检出率为2.9%;检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份,样本阳性菌株检出率为8.6%。

网状分枝扩增技术检测产志贺样毒素大肠埃希菌

目的 通过检测产志贺毒素大肠埃希菌中的志贺样毒素,确定网状分枝扩增技术的灵敏度和特异性,从而进一步探讨该方法用于检测食品和临床标本中0157:H7和STEC的可行性。方法 用网状分枝扩增技术检测合成的志贺样毒素2的基因和临床分离的菌株,确定该方法的灵敏度和特异性,与聚合酶链反应进行比较。结果 网状分枝扩增技术最少能检测10个志贺样毒素DNA分子,与PCR灵敏度一样。E.coli0157:H7和志贺痢疾杆菌志贺样毒素阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性。用网状分枝扩增技术与PCR对分离的菌株进行检测,结果也一致。结论 网状分枝扩增技术具有高度的灵敏度和特异性,操作简便,而且在等温条件下扩增核酸,因此可替代PCR检测食品和临床标本中的产志贺样毒素大肠埃希菌。

肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希氏菌和肠侵袭性大肠埃希氏菌的侵袭基因比较

目的比较肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希氏菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ＳＬＴｓ－ＰｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｄＩｎｖａｓｉｖｅＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌ－ｉ，ＥＳＩＥＣ）和肠侵袭性大肠埃希氏菌的侵袭基因，阐明它们之间的异同。方法使用质粒酶切图谱分析，侵袭性基因ｉｐａＢ、ｉ－ｐａＣ、ｉｐａＤ的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交实验，以及利用ＥＩＥＣ８４０１菌株的侵袭性大质粒酶切产物作为探针与ＥＳＩＥＣ大质粒进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交等方法。结果发现ＥＳＩＥＣ菌株不具有ＥＩＥＣ、志贺氏菌所特有的ｉｐａＢ、ｉｐａＣ、ｉｐａＤ基因；ＥＳＩＥＣ菌株质粒与ＥＩＥＣ、志贺氏菌质粒同源性很小。结论ＥＳＩＥＣ菌株编码侵袭力的基因与ＥＩＥＣ及志贺氏菌的侵袭基因是完全不同的，证明对ＥＳＩＥＣ的分类是正确的。

我国产志贺样毒素的大肠埃希菌的流行状况和预行措施

产志贺样毒素的大肠埃希菌(shiga-like-toxin producing E.coli,SLTEC)是近年来才被认识的一种新的病原性细菌。一部分肠致病性大肠埃希菌(enteropathogenic E.coli,EPEC)产生志贺样毒素,绝大多数肠出血性大肠埃希菌(enterohaemorrhagic E coli,EHEC).

从食品从业人员中分离到产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希菌

自一食品从业人员粪便标本中，分离到１株ＥＳＩＥＣ，该菌生化反应符合大肠杆菌特性，ＩＭＶＣ反应＋＋－－，与Ｉｎｖ及ＳＬ３２ＤＮＡ探针杂交，对ＨＥｐ－２细胞呈集聚状粘附。符合ＥＳＩＥＣ的典型特征。该菌株对昆明小鼠有较强的致病性。在所检测到的２０余种抗生素中，仅对复达欣、丁按卡那、呋喃妥因敏感，为多重耐药株。

双重实时荧光定量PCR检测产志贺毒素大肠埃希菌stx_1和stx_2基因

目的建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法。方法根据stx1和stx2及其变种序列,设计PCR引物和TaqMan探针,建立双重实时荧光定量PCR检测体系,进行灵敏度和特异性评价,并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析。结果双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×102copies/反应体系;该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增,对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100%;对模拟粪便标本的检测下限为3.55×103CFU/g;对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。结论建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法,亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查。

新疆部分地区牛羊源产志贺毒素大肠埃希菌菌株检测与分析

产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli, STEC)是一类携带了前噬菌体编码的一种或两种志贺毒素基因的新发高致病性食源性病原菌,已成为威胁人类健康的重要公共卫生问题。为了解新疆部分地区牛、羊源各个环节产志贺毒素大肠埃希菌的感染情况及其遗传多样性,以及分离株对17种常见抗生素的敏感性,笔者采用PCR方法对STEC分离株进行了4种毒力基因(stx1、stx2、eae、hlyA)的检测和ERIC-PCR基因分型研究。结果表明:从屠宰场、养殖场和市场共431份样品中分离出产志贺毒素的大肠埃希菌64株,其中,编码stx1+stx2的STEC有31株(48.4%),只编码stx1的STEC有29株(45.3%),只编码stx2的STEC有4株(6.3%),4种毒力基因同时存在的有1株。药物敏感性检测发现STEC菌株对麦迪霉素(61%)、头孢噻吩(4.7%)、头孢西丁(4.7%)、氨苄西林(3.1%)、哌拉西林(1.6%)、妥布霉素(1.6%)、头孢唑啉(1.6%)等7种抗生素存在耐药。ERIC-PCR检测结果呈多态性分布,分为A(36株)和B(28株)两个簇。STEC菌株在新疆部分地区牛、羊源各个环节被检出,其中一些菌株可能会增加对食物的污染,从而引起人发病。

藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的分离与PCR鉴定

为研究外观健康藏系绵羊携带沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌情况,对采自外观健康藏系绵羊的19份肛门拭子进行大肠埃希菌和沙门菌分离鉴定。用选择性培养基及普通PCR方法共分离鉴定出1株沙门菌和13株大肠埃希菌,其中产志贺毒素大肠埃希菌4株,3株含有产志贺毒素基因Stx 1,1株含有产志贺毒素基因Stx 2,沙门菌invA基因和产志贺毒素大肠埃希菌Stx基因同源性分析表明,分离株沙门菌的invA与NCBI上已登录的5种血清型沙门菌核苷酸序列同源性为99.8%,4株产志贺毒素大肠埃希菌与NCBI上已登录菌株的核苷酸序列同源性都大于95%。本研究结果为高原地区藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的流行病学调查奠定了基础。

浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7的分子生物学特性研究

目的:了解自浙江省杭州市腹泻婴儿中分离的1株大肠埃希菌O157:H7(HZ1-11株)的分子生物学特性。方法:应用ATB1525细菌半动化生化鉴定系统鉴定菌种。应用O157特异性抗血清玻片凝集试验、H7特异性抗血清试管凝集试验、以及PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因,进行菌株血清型的鉴定。应用多重Real-tim ePCR和常规PCR检测stx1、stx2、hly和eae毒力基因。对菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,并与国内代表菌株进行比较。ATB1525药敏检测仪和纸片法检测菌株的抗药性。结果:细菌生化鉴定为大肠埃希菌,山梨醇阴性。血清型为O157:H7。毒力基因stx2、hly和eae均阳性,stx1阴性。PFGE谱带同江苏分离O157:H7菌株几乎完全相同,带型的相似度为97%。结论:该菌株为浙江省首株产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)O157:H7,与国内近年在江苏等地流行的STECO157:H7菌株密切相关。STEC O157:H7已开始对浙江地区的人民健康构成了威胁。

腹泻标本产志贺样毒素且具侵袭力大肠埃希菌(ESIEC)的分离与实验研究

本文报告自腹泻使中检出6株产志贺样霉素且具侵袭力大肠埃希菌（ESIEC）生化鉴定、DNA探针反应、药敏试验及动物致病试验结果。生化鉴定符合大肠埃希菌，经10种大肠菌DNA探针检测，该组细菌同时与Inv及SLT2探针杂交，对HEP－2细胞呈集聚状粘附，但不与EAggEC探针反应。菌株感染昆明小鼠后，动物表现竖毛、拒食、腹泻、呼吸困难、肢体麻痹、结膜水肿等症状，死亡率85％。解剖取心血、肝脾及肠腔内容物均分离到相应纯菌，对照组正常。23种抗生素敏感试验说明该细菌的抗药谱很广，多重耐药株发生率为100％，临床治疗可选药甚少。

2007年浙江省衢州地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7感染状况

目的：了解2007年浙江省衢州地区产志贺毒素大肠埃希菌O157：H7在动物中的分布情况及其耐药性、PFGE分型及毒力基因携带状况。方法：按全国O157：H7监测方案于5～10月份肠道传染病高发季节，在衢州地区采集各种动物粪便／肛拭，用免疫磁珠富集后进行O157：H7分离培养、鉴定，可疑菌株以PCR法检测O、H抗原及志贺样毒素（SLT1和SLT2）、粘附抹平因子（eaeA）及溶血素（hly）4种毒力基因。用脉冲场凝胶电泳（pulse field gel electrophoresis，PFGE）方法进行同源性分析，同时选择14种抗生素进行药敏试验，分析分离所得菌株的耐药状况。结果：共监测动物粪便标本300份，分离得产志贺毒素大肠埃希菌O157：H7菌株16株，分离率为5．33％。16株O157：H7菌株，毒力基因Hly、eaeA、SLT2均阳性，SLT1均阴性。脉冲场凝胶电泳分型显示，16株O157：H7菌株可分2个PFGE基因型，型间差异较小。耐药性分析显示这些菌株对红霉素、利福平的耐药率最高，达100．0％，对其他受试抗生素均敏感。结论：该地区动物中产志贺毒素大肠埃希菌O157：H7带菌率较高，所分离菌株主要携带SLT2基因，因此推测该地区存在发生产志贺毒素大肠埃希菌O157：H7感染暴发或流行的潜在危险，需增加对动物源性O157：H7的监测力度。

不同来源产志贺毒素大肠埃希菌分布特征

目的探讨不同标本中产志贺样毒素大肠埃希菌(STEC)的分布特征。方法采集动物粪便、肉类食品和排污口污泥样品,常规分离大肠埃希菌,血清学分型,PCR鉴定产志贺样毒素(stxl,stx2)菌株。结果293份标本中鉴定出8株STEC,1株为产志贺毒素O157:H7型,2株为不产志贺毒素O157:H7型,5株为产志贺毒素非O157:H7型。结论STEC存在于不同来源的标本中,菌株表型与毒力因子存在一定差异。

产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株第1类整合子-基因盒的特征

目的:探讨产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株携带第1类整合子的特征及所含基因盒的种类。方法:采用纸片扩散法对8株产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株进行抗生素耐药性监测;制备细菌转接合子,采用PCR技术鉴定第1类整合子,并对PCR产物测序及结果分析。结果:4株产志贺毒素大肠埃希菌对复合磺胺、四环素、氨苄西林、环丙沙星表现多重耐药,其中2株同时对链霉素和壮观霉素耐药。PCR检测第1类整合子1000 bp 2株,PCR产物测序1000 bp整合子携带腺苷酰基转移酶(aadA1)基因盒并存在于7800 bp可接合质粒上,与sul 1和qacEΔ1基因连锁,分别传递着对链霉素、壮观霉素、复合磺胺和季胺盐类消毒剂的耐药性。结论:产志贺毒素大肠埃希菌中国分离株可接合质粒上第1类整合子携带的aadA1耐药基因盒是该菌株对氨基糖苷类抗生素耐药产生和扩散的重要原因。

产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型的研究

目的探讨产志贺毒素大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-lactamases,ESBLs)类型及耐药机制。方法采用纸片琼脂扩散法筛选36株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs菌株,接合传递实验、质粒谱分析、PCR检测耐药基因和DNA序列分析产ESBLs菌株的表型和基因型。结果双纸片扩散法证明有2株产志贺毒素大肠埃希菌产ESBLs,美国株E.coli 5nonO157:H7和中国株E.coli 27 O157:H7对头孢他啶等第三、第四代头孢菌素和氨基糖苷类抗生素耐药,并能通过5.8kb的质粒传递给受体菌。PCR检测含有blaTEM基因。DNA同源分析表明861bp的blaTEMDNA片段与blaTEM-IDNA片段同源。结论产志贺毒素大肠埃希菌美国株和中国株产生相同类型的ESBLs,表现出对第三、第四代β-内酰胺酶类抗生素耐药。

产志贺毒素大肠埃希菌的分子生物学鉴定和耐药性分析

为了解产志贺毒素大肠埃希菌 (Shigatoxin producingEscherichiacoli ,STEC)stx1,stx2 ,eaeA ,hlyA 4种毒力基因的分布情况 ,以及分离株对 18种抗生素的敏感性 ,采用多重PCR(multiplexPCR ,mPCR)法对分离株进行毒力基因的分子生物学鉴定 ;用WHO推荐的K B法对分离株进行抗生素的敏感性测定。产志贺毒素的大肠埃希菌共有 4 6株 ,其中 2种毒素均产生的有 2 2株 (4 7.8% ) ;单纯产生stx1的有 16株 (36 .9% ) ,stx2 的有 8株 (17.4 % ) ;4种毒力基因均存在的有 19株 (4 1.3% ) ,血清型为O15 7∶H7,而非O15 7∶H7血清型的菌株 (2 3/46 )中 ,4种毒力基因同时存在的仅有 3株 (6 .6 % ) ,但有 13株 (5 6 .9% )hlyA基因阳性。全部STEC对复方新诺明耐药 ,对链霉素耐药率为 2 8.3% ,氨苄西林为 30 .4 % ,红霉素为 6 9.6 % ,而且有 5株对至少 4种以上抗生素多重耐药 ,耐药谱为复方新诺明 链霉素 红霉素 氨苄西林。非O15 7型STEC耐药菌次为 12 2 ,而O15 7型为 6 3。可见 ,mPCR法可以快速检测STEC特征性毒力基因 ,以判定其致病性能。非O15 7型STEC对抗生素较易形成耐药性。

产志贺毒素肠聚集性大肠埃希菌感染的检验诊断与防治

2011年5月起，德国出现新型肠出血性大肠埃希菌（en—terohhaemorrhagicEscherichiacoli，EHEC）感染的疫情，来势凶猛．很快蔓延到英国、荷兰、法国、奥地利、挪威、西班牙、瑞士、丹麦、芬兰、捷克等几乎整个欧洲国家，美国也发现了确诊病例。截止6月底，已报告有3600余人发病，死亡52人。更为严重的是，有852例感染者（约20％）发生了溶血性尿毒综合征（haemolyticuremicsyndrome，HUS）。患者在腹泻、发热后很快出现急进性的肾功能衰竭、血小板减少和血管内溶血等症状而危及生命阁。因此，及时的诊断和进行抢救性治疗成为关键。

非O157产志贺毒素大肠埃希菌研究进展

产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能产生一种或一种以上志贺毒素的大肠埃希菌的总称,包括400余种血清型,其中以O157∶H7血清型为主。近年来,非O157STEC在世界范围内引起散发感染和暴发的报道明显增加,但由于非O157STEC血清型多样,菌株间表型差异较大,目前尚无一种有效的能用于所有非O157STEC菌株分离的方法,因此非O157STEC的流行情况可能被低估。本文就非O157STEC的病原学、致病机制、流行病学特征、实验室诊断、治疗和预防等方面的研究进展做一简要综述。