C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备及抗体效价研究

为制备具有高效保护力的C型产气荚膜梭菌类毒素疫苗,利用C型产气荚膜梭菌标准菌株(NCTC 3180)所产外毒素经甲醛灭活并加入佐剂乳化后制备该疫苗。参照《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》分别对疫苗进行了安全性检验、无菌检验和免疫效力检验。分别在分娩前30天和15天免疫接种怀孕母猪,通过间接ELISA和毒素中和试验评估母猪初乳和14日龄仔猪血液中抗体效价水平。结果显示,母猪初乳和仔猪血清中抗毒素效价分别为1∶3200和1∶1600,母猪初乳和仔猪血清中的中和效价均为1∶6。表明制备的类毒素疫苗效价高并安全可靠,免疫实验动物后能对母体和其所产幼畜起到一定的保护作用。

抗产气荚膜梭菌ι毒素Phage-ScFv库的构建与筛选

选取经产气荚膜梭菌ι毒素免疫且抗体效价较高的小鼠,提取脾脏mRNA,通过PT-PC技术,分别获得340,325bp的重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)获得大小为750bp的VH-Linker-VL单链抗体基因(ScFv)。利用One Step Cloning Kit试剂盒将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB5E连接,构建库容约为3.5×106抗ι毒素噬菌体初级抗体库。以Ia、Ib为抗原进行Phage-ScFv表面展示文库的5轮亲和富集筛选,最终阳性率均可达70%。选取亲和力最强的3株阳性抗体(Ia-4、Ia-8和Ib1)进行可溶性表达,为ι毒素特异性抗体的大量制备奠定基础,并对产气荚膜梭菌ι毒素感染病例的检测和临床治疗研究具有一定的理论价值和实践意义。