嗜麦芽窄食单胞菌产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ的克隆与表达

目的对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch810(SM gzch810)携带的产氨基糖苷类修饰酶基因APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ进行扩增、测序及原核表达,为下一步功能试验的开展提供基础材料。方法提取SM gzch810基因组染色体,PCR扩增APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果以染色体DNA为模板,成功扩增800bp APH(3′′)-Ⅰ基因和550bp AAC(2′)-Ⅰ基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性分别达91%及95%;SM gzch810APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ序列已登录GenBank(登录号:HQ315852和HQ315853);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白相对分子质量分别约为56×103和46×103。结论从SM gzch810中成功克隆及表达了APH(3′′)-Ⅰ和AAC(2′)-Ⅰ基因,为下一步检测上述两种重组体大肠杆菌对相应抗菌药物的耐药性及其功能评价做好准备。

ICU多重耐药铜绿假单胞菌产氨基糖苷类修饰酶基因的研究

目的 探讨重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌产氨基糖苷类修饰酶基因的表达.方法 采用PCR法检测60株多重耐药铜绿假单胞菌的4种氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ 、ant(3″)-Ⅰ 、anc(6')-Ⅰ和anc(6')-Ⅱ.结果 60株多重耐药铜绿假单胞菌中检测到含有氨基糖苷类修饰酶基因的菌株共16株,检出率为26.67%(16/60);8株含ant(2″)-Ⅰ基因,检出率为13.33%(8/60);10株含有anc(6')-Ⅱ基因,检出率为16.67%(10/60);其中两株同时含ant(2″)-Ⅰ基因和anc(6')-Ⅱ基因,未检测出ant(3″)-Ⅰ和anc(6')-Ⅰ基因.结论 重症监护室多重耐药铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶基因的表达率较高,氨基糖苷类修饰酶介导的耐药在多重耐药铜绿假单胞菌的耐药机制中占有重要的地位.

产ESBLs肺炎克雷伯菌中新的氨基糖苷类修饰酶基因型

目的:了解一株产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药基因存在情况。方法:采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ,aac(3)-Ⅱ,aac(6′)-Ⅱ,ant(3″)-Ⅰ,ant(2″)-Ⅰ,aac(6′)-Ⅰb,TEM,SHV,LEN,OKP,CTX-M-1,CTX-M-2,CTX-M-9,GES,PER,VEB,OXA-10,OXA-1,DHA,ACT-1,intI1基因,部分产物进行测序。结果:TEM、aac(6′)-Ⅰb、intI1阳性,其他阴性。aac(6′)-Ⅰb经测序并与已在美国国立生物信息中心[NCBI]登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族比对,发现与先前登录的均不相同(包括2006年初美国学者发现的新氨基糖苷类修饰酶aac(6′)-Ⅰb-Cr型)。结论:从该株产ESBLs肺炎克雷伯菌中发现的aac(6′)-Ⅰb氨基糖苷类修饰酶为新的基因型。以aac(6′)-Ⅰb-Suzhou型命名,已登录于美国NCBI(登录号:EF375621)。

产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解产ESBLs肺炎克雷伯菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应(PCR)检测aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果35株肺炎克雷伯菌中,共有26株检出氨基糖苷类修饰酶基因(74.3%)。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。

产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与修饰酶基因研究

目的分析临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性，并了解其修饰酶基因携带状况及耐药机制。方法采用纸片扩散法测定临床分离的32株产ESBLs大肠埃希菌对5种氨基糖苷类抗生素的耐药性，用CLSI推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株，采用PCR法检测氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅰ，aac（3）-Ⅱ，8aC（6’）-Ⅰ ad，aac（6＇）-Ⅰ b，aac（6＇）-Ⅱ，ant（3＂）-Ⅰ，ant（2＂）-Ⅰ。提取携带单一修饰酶基因临床菌株的质粒并转化入宿主菌BL21中，比较临床分离菌与转化菌对5种氨基糖苷类药物敏感性及产ESBLs情况的区别。结果32株产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高（84．3％），对阿米卡星耐药率最低（25％）。检出氯基糖苷粪修饰酶基因aac（6＇）-Ⅱ，ant（3＂）-Ⅰ，ant（2＂）-Ⅰ，阳性分别为22株（68．8％），9株（28．1％），5株（15．6％），1株（3．1％）。质粒转化菌产ESBLs且同时检出原携带基因，但耐药表型有区别。结论临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高，对阿米卡星敏感性最高，氨基糖苷类耐药与氨基糖苷类修饰酶基因表达有关，临床应对此类菌株引起重视。

产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类抗菌药耐药性及修饰酶基因的研究

目的了解本地产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷类抗菌药(AGs)的耐药情况,并分析其氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因的检出情况。方法对临床分离的75株大肠埃希菌用表型确证试验检测ESBLs,用KB纸片扩散法对6种AGs做药敏试验以及采用PCR技术检测AMEs基因。结果在临床分离的75株大肠埃希菌中共检出产ESBLs菌37株(49.33%)。产ESBLs菌耐药情况:依次为庆大霉素(78.38%)、链霉素(70.27%)、卡那霉素(62.16%)、妥布霉素(50.05%)、奈替米星(18.92%)、阿米卡星(10.81%)。与非产ESBLs菌株比较,除奈替米星和阿米卡星外差异均有统计学意义,且产ESBLs菌中耐多药模式明显,差异有统计学意义(P<0.05)。产ESBLs菌携带AMEs基因检出情况:共检出5种基因,其中以aac(3)-Ⅱ(64.86%)和aac(6′)-Ⅰ(45.95%)为主,未检出aac(6′)-Ⅱ。除ant(2")-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ外,其余3种基因检出率高于非产ESBLs菌株,且两基因携带率也明显高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论 ESBLs的产生可使大肠埃希菌对AGs的耐药情况加重。

ICU产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因的分析

大肠埃希菌是临床常见的条件致病菌，也是重症监护病房（ICU）感染的主要病原菌之一。近年来，随着抗生素的广泛使用，产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌日益增多。ESBLs由质粒介导，易在种属甚至不同种属细菌间传递造成暴发流行。这一现象已成为医院感染的突出问题。氨基糖苷类抗菌药物（aminoglycosides，

产ESBLs大肠杆菌的耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠杆菌的耐药性,尤其要了解产ESBLs大肠杆菌氨基糖苷类的耐药性及其修饰酶基因流行情况。方法2006年1～12月我院分离的大肠杆菌用VITEK-32GNI+鉴定,K-B法检测对氨基糖苷类、β-内酰氨类等18种抗菌药物的耐药性,并对其中17株产ESBLs大肠杆菌用聚合酶连反应(PCR)检测氨基糖苷类修饰酶aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ。结果产ESBLs大肠杆菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢唑啉、头孢匹肟、头孢他啶、头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、头孢西丁、呋喃妥因、哌拉西林/他唑巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明的耐药率分别为100%、100%、41.6%、100%、69.5%、30.5%、98.2%、81.0%、81.0%、79.6%、79.2%、34.4%、12.5%、7.1%、7.9%、5.4%、81.0%、,未见亚安培南耐药株,产ESBLs检出率为46.4%。其中17株产ESBLs大肠杆菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素的耐药率分别为52.9%(9/17)、100%(17/17)和100%(17/17)。氨基糖苷类酰基转移酶基因检出率以aac(3)-Ⅱ最高,占94.1%,aac(6′)-Ⅰb次之,占35.3%,ant(3″-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,分别占11.8%和5.9%,其中1株表型耐药,但未检出以上基因。6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠杆菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠杆菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠杆菌多重耐药更为突出。氨基糖苷糖苷类修饰酶基因以aac(3)-Ⅱ最高,aac(6′)-Ⅰb次之,ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ较低,aac(3)-Ⅰ和aac(6′)-Ⅱ未检出。大肠杆菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

广州地区产AmpC酶肺炎克雷伯菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的调查广州地区临床分离产AmpC酶肺炎克雷伯菌对抗菌药物耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因分布。方法采用纸片扩散法(即K-B法)测定51株产AmpC肺炎克雷伯菌对15种抗菌药物的耐药情况,聚合酶链反应(PCR)分析ampC和氨基糖苷修饰酶基因型。结果51株产AmpC肺炎克雷伯菌呈现多重耐药,对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为39.2%、66.7%、58.8%和43.1%,除亚胺培南外其余抗生素耐药率在47.0%-100%;41株(80.3%)检出氨基糖苷修饰酶基因。结论临床分离的产AmpC酶肺炎克雷伯菌多重耐药严重,氨基糖苷修饰酶基因携带率很高。

产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因的检测

目的了解某地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因存在状况及耐药情况。方法对临床分离的75株大肠埃希菌用表型确证试验检测ESBLs,K-B纸片扩散法对6种氨基糖苷类抗生素做药敏试验,并采用聚合酶链反应(PCR)检测AMEs基因。结果 75株大肠埃希菌中共检出产ES-BLs菌37株(49.33%)。产ESBLs菌对氨基糖苷类抗生素耐药率(包括中介株):庆大霉素78.38%,链霉素75.68%,卡那霉素67.57%,妥布霉素64.86%,奈替米星24.32%,阿米卡星13.51%;共检出5种基因,其中以aac(3)-Ⅱ(64.86%)和aac(6′)-Ⅰ(45.95%)为主,其次为ant(3″)-Ⅰ(29.73%)、ant(2″)-Ⅰ(10.81%)、aac(3)-Ⅰ(5.41%),未检出aac(6′)-Ⅱ;除ant(2″)-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ外,其余3种基因检出率均高于非产ESBLs菌株,且2个基因携带率也明显高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论该地区产ESBLs大肠埃希菌携带AMEs基因的比率较高,对氨基糖苷类抗生素的耐药率亦高,应加强监测与防控。

肠球菌产β内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因检测

目的 探讨肠球菌耐药机制和耐药基因流行状况。 方法 对 2 0株肠球菌的 β内酰胺酶TEM基因、氨基糖苷类修饰酶aac(6’) /aph(2”)和aph(3’) Ⅲ基因进行检测。 结果 2 0株肠球菌中有 9株表型为青霉素 /阿莫西林耐药并均检出TEM基因 ;12株对高浓度庆大霉素耐药并均检出aac(6 ') /aph(2”)和 /或aph(3') Ⅲ基因。 结论 国内产 β内酰胺酶、产氨基糖苷类修饰酶的肠球菌比率较高。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解大肠埃希菌(ECO)新的氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法用聚合酶链反应(PCR)法对34株分离自患者的ECO进行aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果34株ECO中氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性8株(23.5%)、aac(3)-Ⅱ阳性27株(39.4%)、ant(3″)-Ⅰ阳性3株(8.8%),其余基因均阴性。结论氨基糖苷类高耐药性与氨基糖苷类修饰酶基因高检出率(85.3%)有关;在同一所医院的ECO中同时检出aac(6′)-Ⅰb和aac(6′)-Ⅰb-cr两种亚型,为国内外首次报道。

多药耐药铜绿假单胞菌16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的研究铜绿假单胞菌连续分离株的16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰基因的分布状况。方法以K-B法检测铜绿假单胞菌对17种抗菌药物的耐药性;以PCR法检测20株铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因;以PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序。结果20株铜绿假单胞菌检出1种16S rRNA甲基化酶基因(rmtB);检出5种氨基糖苷类修饰酶基因,分别为:aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ;1号株和3号株进行甲基化rmtB基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的rmtB氨基酸序列比较,均存在氨基酸序列差别,因此均可确认为新亚型。结论医院铜绿假单胞菌氨基糖苷类抗菌药物耐药主要与16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB及5种氨基糖苷类修饰基因有关,并发现两种铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶编码基因rmtB新亚型。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学研究

目的 研究铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因分子流行病学。方法 用 PCR方法对 35 株铜绿假单胞菌的氨基糖苷类耐药相关基因、氨基糖苷类修饰酶基因 aac(3) Ⅰ、aac(3) Ⅱ、aac(3) Ⅲ、aac(3) Ⅳ、aac(6′) Ⅰ、aac(6′) Ⅱ、aph(3′) Ⅵ、ant(3″) Ⅰ和ant(2″) Ⅰ等9种基因进行了检测与分析。结果 35株中20株检出氨基糖苷类修饰酶基因(57 1%);9种基因由高到低的检出率分别为 aac(6′) Ⅱ(34 2%)、ant(2″) Ⅰ(28 6%)、aac(3) Ⅱ(17 1%)、aac(6′) Ⅰ(17 1%)、ant(3″) Ⅰ(14 3%) 、aac(3) Ⅰ(0)、aac(3) Ⅲ(0)、aac(3) Ⅳ(0)、aph(3′) Ⅵ(0)。结论 本研究表明,湖北襄樊地区铜绿假单胞菌耐氨基糖苷类药物,主要机制为产氨基糖苷类修饰酶(57 1%),本组铜绿假单胞菌中另有15株表型为氨基糖苷类药物不敏感但 9 种基因检测为阴性,可能存在其他修饰酶基因,或者存在16S rRNA基因突变。

大肠埃希菌新的氨基糖苷类修饰酶基因型别研究

目的研究大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb各亚型的流行情况。方法对氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb阳性的菌株进行DNA序列测定,测得序列与已在美国国立生物信息中心(NCBI)登录的aac(6′)-Ⅰb基因家族序列比对,确定型别。结果6株aac(6′)-Ⅰb阳性的大肠埃希菌,经DNA序列测定,其中4株为经典型,1株为aac(6′)-Ⅰb-Cr型,另外1株为aac(6′)-Ⅰb新亚型。结论大肠埃希菌氨基糖苷类修饰酶基因aac(6′)-Ⅰb至少存在3种型别,以经典型为主,同时存在aac(6′)-Ⅰb-Cr型和aac(6′)-Ⅰb新亚型。

南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型的调查

目的调查和研究南京地区鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类型及其耐药特性。方法用K-B法测定97株鲍曼不动杆菌对庆大霉素、阿米卡星2种抗菌药物的耐药性,用PCR法检测氨基糖苷类药物修饰酶基因。结果同时耐庆大霉素、阿米卡星的鲍曼不动杆菌44株,庆大霉素耐药阿米卡星敏感的有4株,庆大霉素敏感阿米卡星耐药的有3株,从51株表型耐药菌中检出4种修饰酶基因,其中带有aac(3)Ⅰ-基因19株(37.3%);带有aac(3)-Ⅱ基因15株(29.4%);有aac(6′)-Ⅰ基因8株(15.7%);ant(3″)Ⅰ-基因为3株(5.8%);同时具有aac(3)Ⅰ-和aac(6′)Ⅰ-基因的5株(9.8%);有aac(3)-Ⅱ和aac(6′)Ⅰ-基因的1株(1.9%)。结论南京地区鲍曼不动杆菌所带基因以aac(3)-Ⅰ和aac(3)-Ⅱ为主,其与氨基糖苷类药物耐药有一定的关系。

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因研究

目的了解我院鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)氨基糖苷类修饰酶和Ⅰ类整合酶基因存在情况。方法根据美国CLSI/NCCLS2004年版要求进行抗菌药物敏感性试验,应用PCR技术对AB菌进行氨基糖苷类修饰酶和I类整合酶基因检测。结果AB菌对13种抗菌药物耐药严重。27株AB菌中氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-I阳性23株(85.2%)、aac(6′)-Ⅰ阳性18株(66.7%)、ant(3")-Ⅰ阳性22株(81.5%)。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为85.2%。I类整合酶基因(intI1)阳性23株(85.2%)。结论我院AB菌不仅具有多重耐药性,而且氨基糖苷类修饰酶基因、Ⅰ类整合酶基因携带率高。

20株多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)氨基糖苷类修饰酶基因存在情况。方法采用PCR对20株MDR-ABA进行了aac(6′)-Ⅰad、aac(6′)-Ⅰb、aac(3)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因检测研究。结果20株MDR-ABA中aac(3)-Ⅰ阳性12株(60%)、aac(6′)-Ⅰb阳性15株(75%)、ant(3″)-Ⅰ阳性18株(90%),aac(6′)-Ⅰad基因阴性;本组20株MDR-ABA中未发现AAC新亚型aac(6′)-Ⅰad基因。结论20株MDR-ABA中均检出氨基糖苷类修饰酶基因;基因型与氨基糖苷类耐药表型相符,可导致克隆传播医院感染,对鲍氏不动杆菌进行aac(6′)-Ⅰad基因研究为国内首次。

铜绿假单胞菌氨基糖苷类药物修饰酶基因研究

目的调查铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特性及氨基糖苷类药物修饰酶基因表达。方法用Phoen ixTM-100系统鉴定细菌和药敏试验。用琼脂扩散法检测20株多重耐药铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星4种药物的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)扩增4种氨基糖苷类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果190株铜绿假单胞菌对氯霉素、四环素、复方磺胺耐药率最高,均为98.9%;对亚胺培南、美洛培南的耐药率分别为15.3%和6.8%。从20株菌中检出aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和ant(2″)-Ⅰ3种修饰酶基因,阳性率分别为10%、60%和65%,未发现ant(3″)-Ⅰ基因。20株菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星的耐药率分别为35.0%、90.0%、70.0%、60.0%。结论本地区铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药与修饰酶基因的传播表达有关。