原生质体融合选育肌苷产生菌产氨短杆菌GMA-2802

以肌苷产生菌产氨短杆菌ＧＭＡ－２７２２（Ａｄｅ－、 Ｇｕａ－、ＶＢ１－、Ｒｉｆｒ）和 ＧＭＡ－２７７６（Ａｄｅ－、 Ｂｉｏｔｉｎ－、ＶＢ１－、Ｓｍｒ）为出发菌株，经原生质体融合，将目的标志加以组合，获得遗传性状稳定、摇瓶发酵６１ｈ，产肌苷２５．４ｇ／Ｌ的融合子 ＧＭＡ－２８０２（Ａｄｅ－、Ｇｕａ－、Ｂｉｏｔｉｎ－、ＶＢ１－、 Ｒｉｆｒ、Ｓｍｒ）。

产氨短杆菌生长曲线的测定

为了解产氨短杆菌的繁殖规律,试验采用分光光度法测定产氨短杆菌的不同生长时间培养液适宜比例稀释液的OD600 nm值,以培养时间为横坐标,OD600 nm值为纵坐标作产氨短杆菌生长曲线图,同时再利用平板菌落计数法绘制生长曲线进一步验证。结果表明:产氨短杆菌在适宜生长条件下经历延滞期、对数期、稳定期和衰亡期4个时期,符合细菌生长的规律,为人们根据不同需要有效地利用和控制产氨短杆菌的生长提供参考。

产氨短杆菌GMA-28021.2L罐肌苷发酵试验

采用诱变得来的产氨短杆菌GMA -2 80 2 ,在 1 2L自控发酵罐上进行 5批发酵肌苷试验 ,发酵周期 5 4小时 ,平均产肌苷 2 0 4 g/L。结果表明该菌株是一株具有较多优良特性的肌苷产生菌。

采用产氨短杆菌合成辅酶A的研究

用产氨短杆菌鲜菌体在以腺嘌呤代替ATP的反应系统中酶促合成辅酶A(CoA),每毫升反应液的 CoA 产量达221单位(u);在不加任何核苷酸类物质的条件下,也可达185u;合成在5小时左右达高峰。CoA 合成主要在细胞内进行。提出了连续式碳-阴离子交换树脂柱提纯CoA 的新方法,既提高了收率,又避免了原锌汞齐法的毒物危害,方法简易可行。用本法制得的结晶品含 CoA 231u/mg,收率17.0%;阴柱洗脱液不经结晶直接制成 CoA 注射液,提取率20.9%,经广州药检所检验,各项指标均符合国家标准。

新型肌苷产生菌──产氨短杆菌GMBA—800选育和特性的初步研究

采用多种方法诱变获得一株新型肌苷产生菌──产氨短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍａｍｍｏｎｉａｇｅｎｅｓ）ＧＭＢＡ－８００（具有腺嘌呤、生物素双重营养缺陷型和对８－氮杂鸟嘌呤、磺胺胍、６－流基嘌呤有抗性），对其生长和发酵条件进行初步研究。肌苷产量从５ｇ／Ｌ提高到１８．４１ｇ／Ｌ，发酵周期从８４ｈ缩短为６３ｈ。菌株遗传性状稳定。

固定化产氨短杆菌MA-2、黄色短杆菌MA-3反应动力学的研究

The kinetics of immobilized cells of \%Brevibacterium ammoniagenes MA\|2\% and \%Brevibacterium flavum MA\|3\% cells were studied. By means of both a theoretical analysis of diffusion in the gel particles and an experimental determination of apparent kinetic parameters, the intrinsic kinetic parameters of immobilized cells of \%B.ammoniagenes MA\|2\% and \%B.flavum MA\|3\% cells were obtained.

絮凝方法收集产氨短杆菌MA-2、黄色短杆菌MA-3条件的优化

采用壳聚糖作絮凝剂收集富含延胡索酸酶活力的产氨短杆菌MA 2、黄色短杆菌MA 3。研究了絮凝剂加入量及加入时混合方式与时间等因素对延胡索酸酶活力及分离效果的影响 ,并对壳聚糖絮凝收集产氨短杆菌MA 2、黄色短杆菌MA

产氨短杆菌的诱变以及TMTD抗性突变株发酵培养基条件的优化

通过对产氨短杆菌进行微波诱变,筛选TMTD(N,N-四甲基二硫双硫羰胺)抗性突变株以期获得辅酶A的高产菌株,并对其中菌株A3进行了培养基的初步优化。获得的优化培养基配方为:葡萄糖1.5%,蛋白胨1.0%,酵母膏0.5%,硫酸镁1%,磷酸氢二钾1%,磷酸二氢钾1%;接种量为15%。在此优化条件下,菌株的OD600可达5.12。

产氨短杆菌GMA-1112利用味精母液发酵生产肌苷

通过亚硝基胍或60 Coγ辐照等选育一株产氨短杆菌GMA 1 1 1 2 (Ade +Gua +VB1 +8 AGr+SGr+6 MPr) ,能以味精母液代替传统肌苷发酵添加酵母粉作为有机营养物 ,进行肌苷发酵 ,平均产肌苷率 2 5.4 0 g/L。具有降低发酵成本、提高产肌苷率等优点。

产氨短杆菌与枯草杆菌发酵产肌苷比较试验

采用诱变得来的枯草杆菌GMI- 74 1和产氨短杆菌GMA - 2 892在 1 2L自控发酵罐上进行肌苷发酵试验 ,产氨短杆菌GMA - 2 80 2在种子培养基中培养 15h后 ,菌浓度达 1 0× 10 11个 /ml,而同样条件下 ,枯草杆菌GMI- 74 1菌浓度只有 9 5× 10 9个 /ml。在 1 2L自控发酵罐上发酵时 ,GMA - 2 80 2发酵周期 5 4h ,产肌苷达 2 0 4 0g/L ,发酵液主要原材料成本为 4 4 1 1元 /吨 ;GMI - 74 1发酵周期 6 0h ,产肌苷达19 5 2g/L ,发酵液主要原材料成本为 5 5 9 1元

固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A的研究

目的利用固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A。方法使用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶为复合载体包埋产氨短杆菌细胞,正交试验确定凝胶配方;正交试验确定合成辅酶A的前体配方;同时考察不同pH、不同表面活性剂对固定化细胞合成辅酶A的影响。结果最佳的凝胶配方为:卡拉胶1.0%,魔芋胶0.4%,刺槐豆胶0.4%;最佳前体配方为:泛酸钙0.3%,半胱氨酸0.3%,ATP 2%;最适pH值为7.0;最适表面活性剂为苯扎溴铵,添加量为0.05%。固定化细胞重复使用8次后,合成辅酶A的活性仍保持在50%以上。结论用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶作为复合载体制备的固定化产氨短杆菌细胞,合成辅酶A的能力较高,稳定性较好,具有应用价值。

产氨短杆菌产辅酶A反应体系的优化设计

采用产氨短杆菌体对Coenzyme A（CoA）酶促合成的最优合成条件进行了研究。经过计算机模拟寻优，得到反应液的最优配方为KH2PO4600mg、氯化十六烷吡啶10mg、泛酸钙70mg、MgSO4·7H2O60mg、半胱氨酸盐酸盐130mg，加水定容至100mL（pH6.0）。CoA的最高效价值为29.99×10^3单位/L，比原配方的效价值提高了2.68倍。

固定化产氨短杆菌连续生产L-苹果酸的研究

本文研究了K-卡拉胶固定化产氨短杆菌连续生产L-苹果酸技术。用0.4％胆酸处理固定化细胞,能有效地抑制反应副产物生成。在固定化介质中添加1.5％多胺试剂,可以提高延胡索酸酶活性50％。采用柱式反应器连续生产L-苹果酸,37 C稳定工作40天,空间流速0.22小时,转化率在85％以上。固定化细胞酶的半衰期为100天,转化液经多步提纯得列白色晶体,提取收率55％。产品经纸层析,红外光谱分析和熔点测定与L-苹果酸标准品一致。

固定化产氨短杆菌的酶学性质及L-苹果酸的制备

本文研究了卡拉胶固定化产氨短杆菌细胞由延胡索酸转化生成 L-苹果酸.固定化细胞经胆酸处理,延胡索酸酶活力比未处理前提高10倍,机械强度增大.比较了固定化细胞和游离细胞延胡索酸酶的性质:两者的最适温度为60℃;最适 pH 为7.0;固定化细胞反应的活化能为675J/mol;其表现米氏常数是游离细胞的4.5倍;固定化细胞比游离细胞更稳定.间歇反应20批,L-苹果酸转化率为88%.用柱式反应器连续转化,控制底物流速12mL/h,37℃稳定工作30天,L-苹果酸转化率为85%.

不同载体制备固定化产氨短杆菌合成辅酶A的研究

目的用不同载体制备固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A。方法分别使用聚丙烯酰胺、聚乙烯醇和卡拉胶为载体包埋产氨短杆菌细胞。比较不同载体制备的凝胶性能、固定化细胞合成辅酶A能力、合成稳定性以及不同表面活性剂对辅酶A合成的影响。结果聚丙烯酰胺制备的凝胶性能良好,但合成辅酶A的能力低;聚乙烯醇制备的凝胶漏菌率较高,卡拉胶制备凝胶的操作温度较高,但两者制备的固定化细胞均有较强的辅酶A合成能力和较高的稳定性。结论聚乙烯醇和卡拉胶是制备产氨短杆菌固定化细胞的良好载体,固定化细胞合成辅酶A的研究具有良好的应用前景。

发酵法生产5’-肌苷酸的研究 Ⅰ.高产菌株的选育

报道了从自然界分离产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)进行遗传诱变,获得突变株直接发酵法生产5′—肌苷酸的研究结果.从采集的婴幼儿大便及鸟类粪便中,分离鉴定出6株产氨短杆菌.将其中的No.18和No.20用紫外线,硫酸二乙酯,亚硝基胍以多种不同方式进行诱变处理,用青霉素浓缩缺陷型.通过对2万多个单菌落的逐个检查,筛选鉴定出7株腺嘌呤缺陷型(A-),1株鸟嘌呤缺陷型(G-),12株腺嘌呤鸟嘌呤双重缺陷型(A-G-).摇瓶发酵结果,有3株A-G-产多量5′—肌苷酸,其中No.18—AG—17产量比较稳定,最高产量达12.1mg/mL。

固定化细胞生产L－苹果酸新工艺及动力学研究

对产氨短杆菌ＭＡ－２固定化细胞在富马酸铵体系中转化生成Ｌ－苹果酸的优化工艺条件做了探讨，结果表明，富马酸铵浓度为１．８ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０～８．０，反应温度为３７℃时，Ｌ－苹果酸得率达２００ｇ／Ｌ左右。同时，对固定化细胞的动力学进行了研究，结果为：ｒ（ｍａｘ）＝５８ｍｍｏｌ／（Ｌ·ｈ·ｇ固定化湿细胞）），Ｋｍ＝６．２５×１Ｏ￣（－２）ｍｏｌ／Ｌ，Ｐ＿ｍ＝１．

GMA-2802菌发酵生产肌苷试验

采用诱变得来的产氨短杆菌 GMA-2802,在1.2L 自控发酵罐上进行5批发酵肌苷试验,发酵周期54h,平均产肌苷20.4g/l。结果表明该菌株是一株具有较多优良特性的肌苷产生菌。

电极固定延胡索酸还原酶产琥珀酸的研究

通过研究产氨短杆菌发酵产延胡索酸还原酶的代谢过程,优化提取条件,分离纯化出高酶活的延胡索酸还原酶,以还原石墨烯复合材料为基质构建新型酶电极传感器,用电极代替辅酶为体外代谢提供电子,实现生产放大过程中实时在线监测琥珀酸含量。研究表明:优化后的延胡索酸还原酶酶活可达83.22U/mL,纯化倍数达17.4倍,回收率为42%;循环伏安图法检测峰电位分别为-0.454V和0.432V,峰电流分别为-0.646μA和0.726μA,表明固定在电极表面的高酶活延胡索酸还原酶不仅保持一定的生物活性和催化活性,而且能实现高效监测琥珀酸含量。