青蒿琥酯联合左氧氟沙星对耐碳青霉烯类大肠埃希菌抗菌活性的影响

目的 探讨青蒿琥酯与抗生素联用对耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)抗菌活性的影响。方法 收集分离的CRECO 20株,采用肉汤稀释法测定抗菌物质青蒿琥酯(ASN)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶(CAZ)、亚胺培南(IMP)最小抑菌浓度(MIC)。用棋盘法测定ASN与LEV、CAZ、IMP协同抗菌活性;用细菌生长曲线法观察不同处理组CRECO临床菌株(E5)生长的情况;用RT-PCR检测外排泵基因以及调控基因的表达。结果 抗菌物质ASN、LEV、CAZ、IMP的MIC50分别为>8 192、64、2 048、32μg/mL。协同抗菌试验显示:ASN (1 024μg/mL)与LEV联用时,LEV的MIC50由64μg/mL降至16μg/mL (即1/4 MIC50),联合作用效果以协同为主;与CAZ联用时,CAZ的MIC50由2 048μg/mL降至1 024μg/mL (即1/2 MIC50),联合作用效果以相加为主。生长曲线显示,ASN联合LEV能有效抑制CRECO生长,曲线走向平缓。20株菌株全部携带外排泵基因AcrA和AcrB基因。RT-PCR结果显示ASN联合LEV可降低外排泵基因AcrB表达。结论 ASN对CRECO无抗菌活性,但ASN联合LEV能有效增强抗生素的抑菌作用,其协同抑菌机制与降低外排泵基因AcrB表达相关。

血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素分析

目的探讨血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的影响因素,为临床提供参考。方法回顾性分析2022年1月至2023年8月于绵阳市中心医院诊断为血流感染大肠埃希菌的200例患者的临床资料,根据是否对碳青霉烯类抗生素耐药分为耐药组(18例)与敏感组(182例)。比较两组患者一般资料[性别、年龄、感染前手术史、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、是否实施过侵入性置管操作、是否入住ICU、是否产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)],分析影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的危险因素。结果两组患者性别、合并疾病(心血管疾病、脑血管疾病、肿瘤、2型糖尿病、慢性肾脏疾病、慢性肝脏疾病和慢性肺部疾病)、入住ICU占比比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);耐药组患者年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs占比均高于敏感组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁、感染前手术史、侵入性置管操作、产ESBLs均是影响血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药的独立危险因素(均P<0.05)。结论血流感染大肠埃希菌对碳青霉烯类抗生素耐药受患者年龄、感染前手术史、侵入性置管操作和产ESBLs影响,临床应予以密切关注。

国产某品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因试剂性能验证

目的评价国产某品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因检测试剂的性能,为临床微生物实验室主动筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)提供参考。方法收集2018年5月—2019年12月同济大学附属东方医院急诊重症内科患者入院时行CRE筛查的直肠拭子219例,采用半巢式实时荧光聚合酶链反应(PCR)进行检测。取CRE阳性和阴性的直肠拭子各20例,并通过培养进行确认。采用多重荧光PCR检测待评价试剂盒,通过凝胶电泳验证其正确度。取CRE阳性和阴性样本各1例,每天重复检测4次,连续检测5d,根据循环阈值(Ct)评价其精密度。取CRE标准品稀释到厂家声明的最低检出限(1000拷贝/mL),验证其最低检出限。取同部位临床微生物实验室培养常见病原菌的纯培养菌液,验证检测试剂有无交叉反应。结果该试剂盒检测结果的符合率为95%,批内、批间Ct值变异系数(CV)≤5%,最低检出限为1000拷贝/mL,与同部位临床常见病原菌无交叉反应。结论该品牌大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌及3种碳青霉烯耐药基因检测试剂可用于临床样本的检测。

产mcr-1耐碳青霉烯类大肠埃希菌的分子特征研究

目的研究mcr基因在耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌中的分布情况。方法回顾性研究2016年1月至2020年12月宁波大学附属人民医院临床分离非重复耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌454株,用PCR方法筛查所有菌株的mcr基因,用质粒接合试验分析相关耐药质粒的可接合情况,并用Nanopore三代测序技术分析相关菌株基因信息。结果仅检测到分离自同一患者的不同标本类型的两株携带碳青霉烯酶NDM-5亚型的大肠埃希菌携带mcr-1基因。基因组测序分析发现,两株细菌相差7个单核苷酸多态性(SNP),可判为同一克隆株,且均成功进行了mcr-1质粒接合试验。结论携带mcr-1耐碳青霉烯类肠杆菌细菌较少,但应注重此类细菌的控制。

血流感染产碳青霉烯酶大肠埃希菌的耐药基因及同源性研究

目的探讨血流感染中耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药机制和分析同源性。方法收集温州医科大学附属第一医院2015年6月-2016年5月门诊及住院患者血流感染中分离出的大肠埃希菌,共216株,常规方法进行细菌分离培养,进行菌种鉴定和药敏试验,对碳青霉烯类耐药株进行改良Hogde试验和金属酶初筛试验,聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测碳青霉烯酶耐药基因,测序确定其基因型,采用多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)和脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)对碳青霉烯类耐药株进行同源性分析。结果在216株血流感染大肠埃希菌中,有6株耐碳青霉烯类抗菌药物,占2.8%,其中3株亚胺培南耐药株改良Hodge试验阳性,1株金属酶初筛试验阳性,3株厄他培南耐药株则均为阴性。3株亚胺培南耐药株中1株携带blaNDM-5基因,2株携带blaKPC-2基因。6株碳青霉烯类抗菌药物耐药大肠埃希菌临床分离株中,其克隆分型分别为ST648、ST5150、ST131、ST964、ST2003和ST38。PFGE共分为5个型别,其中C1与C6为同一型别,其余4株为不同型别。结论本研究中6株耐碳青霉烯类大肠埃希菌的主要耐药机制为产KPC-2酶和NDM-5酶,MLST和PFGE的结果显示属于不同的克隆型。

同时产碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的猪源大肠埃希氏菌的鉴定及耐药性研究

为了解携带碳青霉烯酶NDM-1及其亚型在猪场的流行情况,对来自猪场产房仔猪腹泻病例分离鉴定的87株大肠杆菌进行了碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的耐药基因扩增及测序。从87株大肠杆菌中分离鉴定出一株同时携带碳青霉烯酶NDM-1和NDM-5的大肠埃希菌(Escherichia coli),并命名为HN2106。为深入了解HN2106全基因组及其携带的质粒和耐药基因情况,对NH2106进行了16S rRNA菌种鉴定,bla耐药基因确认,全基因组测序,应用BLAST和MEGA软件对序列进行生物信息学分析、系统进化树分析。结果显示,该菌株含有7个质粒(plasmid A、plasmid B、plasmid C、plasmid D、plasmid E、plasmid F 和plasmid G),3种类型,分别为Col、IncFII、IncQ1。同时携带NDM-1和NDM-5基因,属B族β-内酰胺酶,其中bla位于质粒pNDM-HN2106(plasmid C)上,bla位于质粒pNDM5-HN2106(plasmid B)上,分别介导bla和bla耐药基因,是耐药菌传播的重要载体。全基因组耐药基因预测HN2106同时还携带21种类型的抗生素耐药基因。对HN2106菌株进行了85种抗菌药物敏感性测试,结果显示,HN2106菌株对亚胺培南、青霉素G等均耐药,对磺胺甲恶唑、头孢美唑等敏感。研究结果表明,养殖场NDM-1耐药质粒是NDM-1及其亚型耐药基因的重要载体,对养殖产业健康养殖和公共卫生安全带来较大隐患和威胁,应加强抗菌药物的合理应用和感染的防控措施,重视细菌耐药性的监测工作,以期为临床耐药菌株感染的防治提供理论参考。

产碳青霉烯酶大肠埃希菌的耐药机制研究进展

碳青霉烯类药物的大量及不合理使用,使得耐药菌株出现并不断扩散。既往临床常见碳青霉烯类药物耐药菌株为铜绿假单胞菌和不动杆菌等非发酵类细菌[1],近年有关碳青霉烯类药物耐药现象在肠杆菌科细菌中也越来越多的报道[1]。而大肠埃希菌在临床分离的肠杆菌科细菌中最为多见,因此耐碳青霉烯类药物的大肠埃希菌出现,往往造成较为严重的临床后果。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶检测研究

目的了解大肠埃希菌和肺炎克雷伯茵产碳青霉烯酶的情况，为临床合理使用抗生素提供依据。方法收集2010年1月至2011年6月临床分离的大肠埃希茵和肺炎克雷伯菌，采用K—B纸片扩散法进行药敏试验，以厄他培南、美罗培南为检测底物进行初筛试验，采用改良Hodge试验作为表型确认试验。结果在180株大肠埃希茵和65株肺炎克雷伯菌中，以初筛试验阳性菌株数分别为14株和13株，以厄他培南为底物，确认试验阳性菌株数分别为3株和2株。产碳青霉烯酶初筛实验阳性的27株菌株经改良Hodge试验检测后有5株阳性，阳性率18．2％。结论改良Hodge试验是检测碳青霉烯酶的简便可靠方法，临床微生物实验室应常规开展改良Hodge试验，以确保药敏试验的准确性。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因检测及同源性分析

目的探讨耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistan Escherichia coli,CREco)的耐药基因分布情况,并进行同源性分析,为细菌感染的治疗和预防其传播提供理论依据。方法自2016年1月至2022年7月济宁医学院附属医院住院患者分离出的大肠埃希菌1311株中筛选出CREco 16株。最低抑菌浓度法进行药敏试验,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增碳青霉烯酶基因及喹诺酮类耐药基因,对阳性基因进行测序比对,用脉冲场凝胶电泳检测菌株间的同源性。结果16株CREco仅对个别抗生素敏感,对多数抗生素表现为耐药,其中对β-内酰胺类和喹诺酮类耐药率最高。经PCR扩增发现,100%携带碳青霉烯酶基因,包括NDM-1型13株,NDM-5型3株,KPC-2型8株,未检测出OXA、IMP和VIM。喹诺酮类耐药基因中,5株扩增出qnrS基因,14株扩增出aac(6’)-Ib基因。脉冲场凝胶电泳分型共获得12种谱型,C谱型最多,为流行谱型。结论CREco耐药形势严峻。碳青霉烯酶以NDM-1最常见,其次为KPC-2。喹诺酮类耐药基因aac(6’)-Ib阳性率最高。脉冲场凝胶电泳分型呈现多态性,C谱型在院内存在流行趋势。应加强CREco耐药基因的监测,采取感染控制措施以帮助遏制耐药菌的传播。

大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制

目的探讨大肠埃希菌临床株QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药的机制。方法通过二代Illumina和三代Nanopore测序技术平台获得大肠埃希菌QD24株的染色体和质粒序列,然后对其进行在线软件分析。液相接合试验、S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测菌株携带的质粒。结果测序分析显示大肠埃希菌QD24属于ST69型,携带了黏菌素耐药基因mcr-1.1和碳青霉烯类耐药基因blaNDM-13,且这两个基因分别位于IncHI2型质粒pQD24-1和IncB/O/K/Z型质粒pQD24-3上。液相接合显示大肠埃希菌QD24能将blaNDM-13基因传递到大肠埃希菌J53Azi^(R)。结论大肠埃希菌QD24对黏菌素和碳青霉烯类耐药是因为携带了mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因。经检索,同时携带mcr-1.1和blaNDM-13耐药基因ST69型大肠埃希菌为国内外首次报道。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌耐药基因及同源性分析

目的 分析某院分离的耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)的耐药基因及同源性,为临床治疗及感控提供参考。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院2017-2021年分离的CRECO 36株,对成功复苏的15株CRECO进行耐药基因及同源性分析;用PCR扩增碳青霉烯酶(CPAs)基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48));多位点序列分型(MLST)用于检测其基因序列(ST型)。结果 (1)36株CRECO标本类型主要为尿液(55.56%)。(2)CRECO对哌拉西林、左氧氟沙星等8种抗菌药物耐药率达100.0%,对庆大霉素、氯霉素等7种抗菌药物耐药率>50.0%,对阿米卡星、多黏菌素耐药率分别为19.4%、2.8%,尚未发现对替加环素耐药。(3)通过PCR扩增15株复苏菌株的耐药基因,共获得14株阳性:2株bla_(KPC-1),11株bla_(NDM-5),1株bla_(NDM-1);1株阴性。(4)MLST将11株携带bla_(NDM-5)的CRECO的ST型分为ST156、ST117、ST2177、ST744、ST405和ST10Cplx(复合群)。结论 CRECO呈多重耐药状态,对碳青霉烯类耐药与携带耐药基因bla_(NDM-5)密切相关,携带bla_(NDM-5)的CRECO以ST10Cplx流行为主。

慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生耐碳青霉烯类大肠埃希菌感染的危险因素及耐药基因分析

目的:分析慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生耐碳青霉烯类大肠埃希菌(carbapenem-resistant Esche‐richia coli,CREC)感染的危险因素及细菌的耐药基因。方法:选取2021年4月—2022年3月医院收治的143例慢性乙肝肝硬化失代偿期患者作为研究对象,分析患者发生CREC感染情况和耐药基因,并采用单因素分析与Logistic多因素回归分析与其相关的危险因素。结果:143例医院感染患者中,24例(占16.78%)发生CREC感染为感染组,其余的为未感染组;单因素分析结果显示,患者年龄、肝功能分级、有无侵入性操作、有无腹水、预防性使用抗菌药物数量、住院时间、白蛋白水平与患者发生感染相关(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,年龄≥60岁(OR=2.516)、肝功能分级为C级(OR=4.363)、有侵入性操作(OR=5.332)、有腹水(OR=2.769)、预防性使用抗菌药物数量<1种(OR=3.562)、住院时间>3 d(OR=6.731)、白蛋白水平≤35 g/L(OR=4.130)是慢性乙肝肝硬化失代偿期患者发生CREC感染的独立危险因素(P<0.05);分离出的24株CREC中,经基因分析结果显示,含NDM-1基因11株(占45.83%)、CTM-M1基因8株(占33.33%)、TEM基因6株(占25.00%)、CTM-M9基因4株(占16.67%)、SHV基因2株(占8.33%)和KPC-2基因1株(占4.17%),未检出OXA48基因和IMP-4基因。结论:年龄、肝功能分级、侵入性操作、腹水、预防性使用抗菌药物、住院时间、白蛋白水平均为慢性乙肝肝硬化失代偿期患者CREC感染相关的独立危险因素,其耐药基因以NDM-1、CTM-M1为主。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌临床分离情况及碳青霉烯酶基因研究

目的:研究碳青霉烯酶基因,探讨临床分离的大肠埃希菌碳青霉烯类抗生素的耐药基因分布情况,为相关抗感染治疗提供依据。方法:收集2009年3月至2017年10月期间,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌菌株;使用MicroflexTMMALDI-TOF MS进行菌种复核;用Vitek-2 Compact全自动微生物分析仪联合纸片扩散法进行药物敏感性试验;采用碳青霉烯类抗菌药物灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)快速筛查大肠埃希菌的产碳青霉烯酶表型;采用耐药基因常规PCR及测序的方法检测常见碳青霉烯酶基因;另收集所有患者的临床资料,分析其临床特征。结果:2009年3月至2017年12月,我院住院患者临床标本中分离到的非重复耐碳青霉烯类大肠埃希菌共84株。药物敏感性(药敏)试验结果显示,只有氨基糖苷类抗生素中阿米卡星的耐药率<50%,其他各种药物的耐药率都非常高,达到80%~100%。mCIM检测共筛选出71株产碳青霉烯酶菌株,而耐药基因PCR及测序的结果则显示,有65株携带blaNDM,以blaNDM-5(64.6%,42/65)和blaNDM-1(24.6%,16/65)为主,其中2株同时携带blaNDM-1和blaMCR-1。另有6株携带blakpc-2,未检测到blaGES、blaIMP、blaVIM、blaOXA等碳青霉烯酶基因。检测到产碳青霉烯酶菌株来自23个科室的17种标本,其中尿液占30.95%(26/84)和痰占21.43%(18/84);标本检出产碳青霉烯酶的患者则以儿科最多(66.7%,56/84)。儿童及婴幼儿中分离的大肠埃希菌中产酶型占96.4%(54/56),且以产酶型别blaNDM-5最多(63.0%,34/54);而老年患者中分离的非产酶型大肠埃希菌占62.5%(10/16);在这些患者中,54%(45/84)的患者在住院期间曾接受过手术,33%(28/84)的患者曾接受留置深静脉导管等侵入性医疗操作。结论:我院临床患者分离到的耐碳青霉烯类大肠埃希菌呈多重耐药,产碳青霉烯酶的类型为NDM和KPC 2种,其中NDM-5检出率高达50%(42/84);来自儿科病房尤其是儿重症病房的标本,耐碳青霉烯类大肠埃希菌分离率最高。

亚胺培南耐药大肠埃希菌碳青霉烯酶耐药基因及流行病学的分析

目的 对临床分离的亚胺培南耐药大肠埃希菌(IREC)菌株的分布、碳青霉烯酶耐药基因及分子流行病学特征进行分析,为临床抗菌药物的使用及控制院内感染提供依据。方法 对泰安市中心医院2020年6-12月期间分离到的IREC应用 BD hoenix^(TM)100全自动化微生物细菌分析仪对菌株进行鉴定及药物敏感性分析,PCR法检测碳青霉烯酶耐药基因,mCIM 联合eCIM 试验初筛碳青霉烯酶,多位点序列分型(MLST)和脉冲场琼脂凝胶电泳(PFGE)分析IREC分子流行病学特征。结果 10 株IREC均表现出多重耐药的特性,均携带金属酶基因 bla_(NDM),8 株bla_(NDM-5)、2株bla_(NDM-1)。MLST分子分型共检出3个ST 型,分别为ST405(6/10)、ST167(3/10)、ST131(1/10),ST405是主要的序列类型,其次为ST167。PFGE同源性分析共分为5个克隆群,A、B、C、D、E群,其中6株ST405型菌株均属于 E群。结论 院内IREC耐药性严重,以携带bla_(NDM-5)和_(NDM-1)为主,主要流行于重症医学科和肾内科,尿液标本是其主要来源,E群ST405型大肠埃希氏菌在院内存在播散流行。

耐碳青霉烯类大肠埃希菌产碳青霉烯酶基因型和同源性检测及分析

目的检测并分析耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CRECO)产碳青霉烯酶基因型及其同源性。方法对2020年湖北省十堰市3家三甲医院临床分离的31株CRECO采用MALDI-TOF质谱仪进行菌种再鉴定,K-B纸片扩散法和E test条复核药敏结果,得到23株CRECO。采用碳青霉烯类药物的协同试验初筛产碳青霉烯酶基因型,PCR法检测8种常见碳青霉烯酶基因型并对阳性产物测序,用肠杆菌科基因间重复一致序列(ERIC)PCR法检测其同源性。结果23株CRECO中,9株产NDM-5酶,6株产KPC-2酶,2株产IMP-4酶。产碳青霉烯酶的大肠埃希菌大多从呼吸系统标本中分离出,多数来自呼吸重症病房,大多数为70岁以上老年患者,且患者经历过机械辅助通气、留置尿管或外科手术等侵入性操作。23株CRECO只对少数几种抗生素(阿米卡星、庆大霉素、复方新诺明)耐药率较低。同源性分析结果显示,本地区CRECO分7型,未见覆盖本地区的优势型别。结论十堰地区CRECO耐药机制复杂,产酶基因型主要是NDM-5和KPC-2基因,菌株对多种抗生素耐药。未发现本地区的克隆菌株爆发流行。

2010—2016年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌临床分布及其耐药特征

目的了解临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)及耐碳青霉烯类大肠埃希菌(CREC)的临床分布状况及耐药特征。方法回顾性分析某院2010年1月—2016年12月临床标本分离的肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌,统计分析CRKP及CREC分离情况。结果 2010—2016年7年共收集临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)310株(CRKP268株,CREC42株),CRKP检出率由2010年的1.33%上升到2016年的12.70%,呈逐年上升趋势(χ2=123.73,P<0.01);CREC检出率则处于相对稳定状态,2010—2016年均约为1.00%;标本来源和病区分布最多者分别为呼吸道标本(45.49%)和重症监护病房(31.93%)。药敏试验结果显示,CRKP和CREC除对阿米卡星耐药率稍低(分别为80.60%、38.10%)外,对大多数临床常用抗菌药物如第三代头孢菌素类、第四代头孢菌素类、β-内酰胺类/酶抑制剂类、喹诺酮类等耐药率CRKP均>90%、CREC均在80%左右,而非CRE菌株的耐药率低于CRE菌株(P<0.01)。结论 7年间临床分离的CRKP的检出率呈现快速增加的趋势,几乎对常用抗菌药物均耐药,应予以高度关注。

耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌耐药机制的研究

目的了解河南省人民医院耐碳青霉烯类抗菌药物大肠埃希菌的耐药特点和耐药机制。方法收集临床送检合格样本分离到的细菌,采用BD Phoenix 100微生物分析系统进行细菌鉴定及体外药物敏感性分析,依照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准筛选出耐碳青霉烯类大肠埃希菌。采用改良Hodges和美罗培南(MEM)-乙二胺四乙酸(EDTA)-Na2双纸片协同试验进行表型筛选。聚合酶链反应(PCR)检测耐药基因blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48。对blaKPC阳性菌株进行接合转移试验。结果从1 238株大肠埃希菌中筛选到8株耐碳青霉烯类菌株,7株对亚胺培南(IPM)、MEM均耐药,有1株仅对MEM耐药。8株改良Hodges试验均为阳性,6株双纸片协同试验阳性。2株携带blaKPC-2,3株携带blaIMP-4。blaKPC-2可以发生接合转移。结论首次在河南省人民医院发现产blaIMP-4的大肠埃希菌,其耐碳青霉烯类抗菌药物的机制主要为携带blaKPC-2和blaIMP-4,blaKPC-2基因可以通过质粒水平传播。

碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌中bla_(NDM)基因型检测及流行病学分析

目的检测上海交通大学附属瑞金医院临床分离碳青霉烯类耐药的大肠埃希菌产NDM型碳青霉烯酶的情况,研究其流行病学特征。方法收集该医院2013年11月-2015年1月临床分离的18株对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤19 mm的大肠埃希菌。采用聚合酶链反应(PCR)检测bla_(NDM)型碳青霉烯酶基因并对阳性产物进行测序以确定基因型别;通过质粒转移接合试验了解耐药基因是否可以通过质粒进行水平传播;应用多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对产NDM酶的大肠埃希菌进行同源性分析。结果 18株耐碳青霉烯类大肠埃希菌中6株扩增到bla_(NDM)基因,其中4株为bla_(NDM-1),2株为bla_(NDM-5)。6株产NDM酶的大肠埃希菌中3株成功进行转移接合试验,MLST发现6株产酶菌株共分为5个ST型(ST5018,ST354,ST405,ST2967,ST156),与PFGE结果中5种不同的DNA谱型(A^E)相对应,其中2株菌株同为ST5018型且为PFGE-DNA谱型中A型的不同亚型(A1,A2)。结论本研究检出产NDM酶碳青霉烯类耐药大肠埃希菌。bla_(NDM)阳性病例多为散发,但由质粒介导的水平传播在bla_(NDM)的播散中可能起重要作用。上海地区首次检出NDM-5型碳青霉烯酶,应引起重视。

耐碳青霉烯类抗生素大肠埃希菌的耐药基因检测及传播机制探讨

目的检测耐碳青霉烯类抗生素大肠埃希菌的耐药基因,并探讨其传播机制。方法临床分离的耐碳青霉烯类抗生素大肠埃希菌3株,分别编码为DC10、DC44、DC52。用PCR法扩增筛查DC10、DC44、DC52的耐药基因,对扩增产物测序确定基因型别;通过接合实验得到DC10、DC44、DC52与耐叠氮钠的大肠埃希菌J53的接合子,对接合子进行菌种鉴定、药敏试验、耐药基因检测及测序;采用多位点序列分析(MLST)确定DC10、DC44、DC52的基因序列型(ST型),并利用e BURST软件进行亲缘性分析。结果 DC10、DC44、DC52中bla NDM基因均阳性,其它碳青霉烯类耐药基因、喹诺酮类耐药基因均阴性。经测序确认DC10、DC52均携带bla NDM-1基因,其中DC52同时携带bla TEM-1基因; DC44携带bla NDM-3基因,同时携带bla TEM-1基因和bla CTX-M-15基因。DC10、DC44、DC52均与J53接合成功,接合子为大肠埃希菌。接合子除对替加环素、阿米卡星敏感外,对β-内酰胺酶类和碳青霉烯类抗生素均耐药,接合子均含有与DC10、DC44、DC52相同的碳青霉烯酶基因。DC10的MLST分型为ST744、DC44为ST7219、DC52为ST167。ST744和ST167同属于CC10克隆群,ST7219属于CC131克隆群。结论耐碳青霉烯类抗生素大肠埃希菌的耐药基因为bla NDM基因,耐药基因bla NDM均能通过质粒水平传播。

碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药基因型检测及同源性分析

目的检测临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药基因型,并对其同源性进行分析,研究其流行情况。方法收集铜陵市人民医院2012年9月至2016年10月临床分离碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,EDTA双纸片协同试验进行金属酶初筛,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因(bla KPC、bla IMP、bla VIM、bla NDM和bla OXA-48),并对阳性扩增产物进行基因测序;同源性分析采用肠杆菌科基因间重复一致序列聚合酶链反应技术(ERIC-PCR)。结果共收集碳青霉烯类耐药大肠埃希菌25株,8株改良Hodge试验阳性,13株金属酶初筛试验阳性,其中4株携带bla NDM-1基因,1株携带bla IMP-4基因,1株携带bla KPC-2基因;ERIC-PCR检测分为10种型别。结论碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的耐药机制主要是产金属酶,携带NDM-1型碳青霉烯酶大肠埃希菌需重点监测;碳青霉烯类耐药大肠埃希菌未在医院引起克隆流行。