胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌检测中的应用评价

目的评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值。方法收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株。采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48-like)、bla_(NDM)),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能。结果PCR结果发现25株菌携带bla_(KPC)基因、7株携带bla_(NDM)基因、4株携带bla_(IMP)基因、4株同时携带bla_(KPC+NDM)基因、1株同时携带bla_(KPC+NDM+IMP)基因,另外24株未检出相应耐药基因。41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性。24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性。mCIM试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000;检测金属酶的敏感性为68.75%、特异性为100.00%,Kappa值为0.725。胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00%,Kappa值为1.000。结论胶体金免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用。

Vitek MS快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌的效果评估

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CP-CRE)的效果。方法选取2018年12月至2020年10月承德医学院附属医院分离的52株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和30株碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌(CSE)。采用酶水解法建立Vitek MS检测CP-CRE的判断标准。定义logRQ=log(亚胺培南水解产物峰强度/亚胺培南峰强度),结合PCR结果绘制受试者工作特征曲线。当logRQ值≥cut-off值时,该菌产碳青霉烯酶,为CP-CRE,反之,该菌不产碳青霉烯酶。用同期46株肠杆菌目细菌进行前瞻性研究,以验证基于酶水解法的Vitek MS的检测效果。结果医院分离的52株CRE的logRQ值0.996±0.184,均为CP-CRE菌株;30株CSE的logRQ值-1.419±0.187,均不产碳青霉烯酶。酶水解法最适温育时间为30 min,cut-off值为-0.678,敏感性为100%,特异性为100%。前瞻性研究中,Vitek MS检测出40株CP-CRE和6株不产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌,该结果与PCR检测结果一致性极强(Kappa=1.0)。结论基于酶水解法的Vitek MS能在短时间内检测出全部CP-CRE,敏感性高、特异性好、价格便宜,可用于临床CP-CRE的快速鉴定。

医院获得性耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌血流感染危险因素

目的分析医院获得性耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)血流感染的特点及影响因素。方法采用回顾性巢式病例对照研究方法,选取2020年1月—2022年12月某三级综合医院发生医院获得性CRE血流感染的56例病例为CRE组,按1∶1选择同期56例碳青霉烯类敏感肠菌目细菌(CSE)血流感染患者为CSE组,分析感染菌株和科室分布,并通过单因素和多因素logistic回归分析CRE血流感染的相关因素。结果CRE血流感染科室分布以重症监护病房(ICU,23例,41.07%)和血液科(17例,30.36%)为主;感染菌株主要为肺炎克雷伯菌(32例,57.14%)和大肠埃希菌(16例,28.57%)。单因素分析结果显示,恶性肿瘤、60 d内住院史、感染前入住ICU>48 h、机械通气、留置中央静脉导管、使用二联及以上抗菌药物、抗菌药物使用时间≥10 d均与CRE血流感染有关(均P<0.05)。多因素logistic回归分析发现,感染前入住ICU>48 h、感染前抗菌药物使用时间≥10 d是医院获得性CRE血流感染的独立危险因素(P<0.05)。结论临床尤其是ICU应关注患者的流行病学史,尽早识别CRE血流感染高危因素的患者,同时合理使用抗菌药物,规范有创操作,以减少医院获得性CRE血流感染的发生。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测的研究进展

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生的碳青霉烯酶也不同,因此,碳青霉烯酶和耐药基因的早期检测对于控制耐药菌的传播起到重要作用。目前对于碳青霉烯酶的表型检测方法有改良Hodge实验、改良碳青霉烯灭活试验、Carba NP试验、免疫学技术、质谱技术,对于耐药基因型的检测方法有实时荧光定量PCR技术、微阵列技术、等温扩增技术、测序技术,这些方法在碳青霉烯酶的检测中均具有广泛应用。了解各检测技术的优缺点对于在实际应用中选择最适检测方法是非常重要的。本文主要对CRE碳青霉烯酶检测方法的研究进展和各方法的优缺点进行综述,为CRE的检测、预防以及院内感染控制提供数据支持。

临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌菌株的分子流行病学及碳青霉烯酶抑制剂增强试验的应用

目的:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的流行已成为临床抗感染治疗的巨大挑战。本研究探讨本地区CRE耐药情况及分子流行病学特征,并评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验在临床实验室的应用价值,旨在为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:收集中南大学湘雅医院临床标本中分离的非重复性CRE,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,KB)检测菌株的药物敏感性,PCR方法检测13种碳青霉烯酶基因。使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对126株经PCR确定为产碳青霉烯酶的菌株进行表型检测,了解该方法与金标准PCR结果的符合程度。结果:704株CRE呈现出高度耐药的情况,经检测,501株为产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(carbapenemase producing Enterobacterales,CPE);CPE菌株以肺炎克雷伯菌为主,其次为阴沟肠杆菌和大肠埃希菌;碳青霉烯酶有9种,包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase,KPC)、新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)、维罗纳整合子金属酶β-内酰胺酶(Verona integronencoded metallo-β-lactamases,VIM)、亚胺培南酶(imipenemase,IMP)、苯唑西林酶48型(oxacillinase-48,OXA-48)以及罕见的亚胺培南水解β-内酰胺酶(imipenem-hydrolyzingβ-lactamase,IMI)、阿德莱德亚胺培南酶(adelaide imipenemase,AIM)、圭亚那超广谱β-内酰胺酶(guiana extended-spectrumβ-lactamase,GES)和Bicêtre碳青霉烯酶(bicêtre carbapenemase,BIC),KPC型丝氨酸酶检出率最高,为61.7%(309/501);碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测单产A类丝氨酸碳青霉烯酶、单产B类金属酶以及同时产A类和B类酶菌株的符合率均为100%。结论:湖南省长沙市CRE菌株分布非常广泛,产碳青霉烯酶(特别是KPC型丝氨酸酶)是这类细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要机制。在湖南省长沙市首次检出了肠杆菌目细菌携带GES、IMI型基因。碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示该方法能准确检测产A类丝氨酸酶和B类金属酶的CRE,且操作简单、结果容易判读,能满足临床微生物实验室丝氨酸碳青霉烯酶和/或金属酶检测的需求,为临床精准用药提供依据。

佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的产酶型别及耐药性分析

目的了解佛山市中医院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的产酶类别、对头孢他啶/阿维巴坦(CZA)等常用抗菌药物的耐药性,以及CZA与美罗培南(MEM)、氨曲南(ATM)的联合作用,为临床合理用药提供依据。方法收集佛山市中医院2020年1月1日至2022年3月1日临床分离的CRE 95株,对临床常用抗菌药物的耐药性进行回顾性分析,用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)联合乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM试验)与胶体金免疫层析技术2种方法检测碳青霉烯酶,采用纸片扩散法检测CZA同MEM、ATM的联合药敏试验。结果95株CRE中,mCIM试验阳性菌株93株(97.9%),不产酶2株(2.1%);eCIM试验阳性菌株49株(51.6%)。93株产酶CRE菌株中产丝氨酸酶44株(47.3%),产金属β-内酰胺酶49株(52.7%)。胶体金免疫层析法检测6个基因型结果除了1株不是KPC基因型外,其他与mCIM和eCIM表型结果一致。44株产丝氨酸酶菌株的敏感率为97.7%,49株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为0.0%。35株携带KPC基因型肺炎克雷伯菌中有33株CZA和MEM、CZA和ATM有协同作用,23株携带NDM基因型大肠埃希菌中有19株CZA和ATM有协同作用。结论佛山市中医院CRE的碳青霉烯酶型以金属β-内酰胺酶为主,肺炎克雷伯菌以KPC基因型为主,大肠埃希菌以NDM基因型为主,产丝氨酸酶菌株对CZA有较高敏感性;通过检测CZA和ATM是否有协同作用可以给临床抗感染治疗提供有力证据。

头孢他啶/阿维巴坦单用或与氨曲南联用对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体内、外抗菌活性的比较

目的了解头孢他啶/阿维巴坦(CZA)单用或与氨曲南(ATM)联合用药对耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的体内、外抗菌活性,为临床抗感染治疗提供依据。方法采用微量肉汤稀释法对某院2018-2022年临床分离的52株非重复CRE进行CZA及ATM最低抑菌浓度(MIC)测定,采用棋盘稀释法进行联合药敏试验。时间-杀菌曲线和大蜡螟感染模型检测CZA单用或与ATM联合使用的杀菌效果。结果23株产KPC酶的CRE菌株中91.3%(21株)对CZA的MIC≤4μg/mL,8.7%(2株)的菌株对CZA的MIC≥128μg/mL。产NDM、IMP、KPC+IMP、KPC+NDM等酶型的29株CRE对CZA的MIC值均≥128μg/mL。31株CZA耐药的菌株中93.5%(29株)的CZA与ATM联合FIC值<0.5,6.5%(2株)的FIC在0~1。时间-杀菌曲线表明CZA对产KPC酶的菌株具有杀菌效果,CZA联合ATM对耐CZA菌株有杀菌效果。与单药组相比,CZA联合ATM处理组CRE感染大蜡螟生存率显著提高(中位生存时间120 h,P=0.001)。结论CZA对产KPC酶的细菌有较好的抗菌作用。CZA与ATM联用对CZA耐药的菌株具有协同抑菌作用。

全国碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(除外肺炎克雷伯菌)对抗菌药物的敏感性、耐药机制和分子特征

目的了解全国临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)(除外肺炎克雷伯菌)对抗菌药物的敏感性、耐药机制和分子特征。方法收集全国31个省、直辖市和自治区151所医疗机构2021年1—6月临床分离的CRE(除外肺炎克雷伯菌),按区域分别运送至三个中心实验室。中心实验室按照统一的实验方案进行菌种复核鉴定,肉汤微量稀释法测定CRE对抗菌药物的敏感性,所有菌株进行全基因组测序分析菌株产生的碳青霉烯酶基因和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)。结果共收集CRE菌株946株,其中大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和其他肠杆菌目细菌分别占41.1%(389/946)、34.4%(325/946)和24.5%(232/946)。药敏试验结果显示,大肠埃希菌、阴沟肠杆菌及其他肠杆菌目细菌对氨曲南-阿维巴坦、阿米卡星、黏菌素、多黏菌素B和替加环素均高度敏感,敏感率范围为87.1%~95.5%。全基因组测序显示bla_(NDM-5)(71.7%,279/389)和bla_(NDM-1)(64.3%,209/325)分别是大肠埃希菌和阴沟肠杆菌中主要流行的碳青霉烯酶基因类型。弗劳地枸橼酸杆菌和产气克雷伯菌中均以bla_(NDM-1)为主,分别占73.8%(31/42)和57.8%(37/64);产酸克雷伯菌中,bla_(KPC-2)和bla_(NDM-1)分别占30.4%(14/46)和26.1%(12/46)。MLST分型及地域分布显示大肠埃希菌共存在87种分型,主要以ST410(22.1%,86/389)和ST167(10.5%,41/389)型为主,前者主要分布在福建、河北、湖南、内蒙古、云南等地,后者主要分布在北京、海南、河南、辽宁、青海等地;阴沟肠杆菌共存在54种分型,主要以ST171(17.8%,58/325)和ST78(7.1%,23/325)型菌株为主,前者分布在安徽、河北、黑龙江、河南等地,后者多见于湖北、广西、贵州等地区。结论产碳青霉烯酶是中国临床分离肠杆菌目细菌对碳青霉烯类药物耐药最主要的机制。中国不同省市分离的菌株克隆型存在较大差异。

重症监护病房患者碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌感染研究进展

碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌(CRE)作为医院感染的重要病原菌,是医院感染防控的重点,也是全球性公共卫生问题。在医院所有病区中,重症监护病房(ICU) CRE定植和感染情况尤为严重。文章对ICU中CRE定植和感染相关研究进行回顾,梳理全球范围内ICU患者CRE感染特征、感染部位、危险因素等,为CRE医院感染的监测、预防、控制提供参考。

山东省聊城地区耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌黏菌素耐药基因mcr-1相关感染的分子机制及临床特征

目的 探讨携带mcr-1耐药基因的耐碳青酶烯类肠杆菌目细菌(CRE)相关感染的分子机制及临床特征,为该类菌株感染的临床诊疗及预防区域内传播与暴发流行提供参考依据。方法 收集聊城市第二人民医院2016年1月—2022年12月分离自临床的非重复CRE,采用乙二胺四乙酸碳青霉烯酶失活试验(eCIM)与改良碳青霉烯酶失活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶表型;采用微量肉汤稀释法进行体外药敏试验;采用聚合酶链反应(PCR)扩增并测序分析与黏菌素耐药相关的mcr-1基因及碳青霉烯类耐药基因;采用多位点序列分型技术(MLST)确定菌株的序列分型(ST)。收集mcr-1基因阳性菌株感染患者的病历资料,统计相关信息并进行分析。结果 共分离CRE菌株127株,包括65株大肠埃希菌,52株肺炎克雷伯菌,3株阴沟肠杆菌,3株产酸克雷伯菌,2株奇异变形杆菌,以及产气肠杆菌、弗氏柠檬酸杆菌各1株。所有CRE菌株中有6株携带mcr-1基因,且同时为blaNDM-5基因阳性。携带mcr-1的6株CRE仅对替加环素具有较高的敏感性,表现为低水平耐药。MLST分型结果显示有4种不同的ST型别,其中2株为ST167,2株为ST410,其余2株分别株为ST48和ST361。6例患者的性别、年龄、抗菌药物使用史、基础疾病及病情严重程度均不同,各项感染指标有不同程度的升高,患者最终均治愈出院。结论 黏菌素耐药基因mcr-1在聊城地区临床分离的CRE中检出率较低且呈低水平耐药,但已发现该基因与碳青霉烯酶耐药基因共存的现象,需引起临床重视并加强监测。

2022年美国感染病学会对产超广谱β内酰胺酶肠杆菌目细菌、碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌和难治性耐药铜绿假单胞菌感染的治疗指导

抗菌药物耐药性(AMR)上升是全球性的危机。由于新建或更新临床实践指南(guidelines)需要较长的时间,无法及时解决AMR等快速进展的问题,美国感染病学会(IDSA)决定由一个小型专家组根据对文献的全面(但不一定是系统)审查,编写、制定更为狭义的临床实践指导文件(guidance),作为对综合临床实践指南的替代和补充,解决了目前指南未涵盖的难以处理的感染的具体临床问题。此类指导文件不包括证据的正式分级,至少每年在线更新一次。

崇明岛地区511株碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌临床感染特征及耐药性分析

了解上海崇明岛地区耐碳青霉烯肠杆菌目(CRE)细菌的临床分布特征及耐药情况,为临床控制CRE的流行和传播提供帮助。方法 收集上海新华医院崇明分院2017年1月至2021年12月分离的非重复CRE菌株,对各年检出率、标本来源、病区、感染人群、病原菌组成及耐药性变迁进行分析,用酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶表型。结果 共检出CRE 511株,2017-2021检出率分别为:7.0%(60/863)、5.4%(75/1389),7.8%(108/1377),9.8%(125/1278),10.3%(143/1382)呈增长趋势,差异具有统计学意义(P<0.05);标本来源排名前五的为呼吸道(13.6%)、尿液(7.4%)、血液(6.4%)、无菌体液(5.3%)、分泌物(4.0%);病区分布排名前五的为ICU(30.3%)、外科ICU(20.8%)、神经外科(18.4%)、急诊病区(11.8%)、普外科(6.1%);菌种排名前五的为肺炎克雷伯菌(79.3%)、大肠埃希菌(9.6%)、阴沟肠杆菌(4.9%)、产气克雷伯菌(3.1%)、粘质沙雷菌(1.4%);肺炎克雷伯菌酶型以产丝氨酸碳青霉烯酶(KPC)为主(92.8%),肺炎克雷伯菌以外的其他CRE菌株以产金属β-内酰胺酶(NDM)为主(75.5%)。结论 上海崇明岛地区CRE菌株检出率呈逐年升高的趋势,主要分离自呼吸道标本,主要菌株为肺炎克雷伯菌,主要分离科室为ICU,临床应规范使用抗菌药物,主动加强CRE的筛查,以控制CRE的流行和传播。

肠杆菌目细菌致导尿管相关性尿路感染患者发生碳青霉烯类药物耐药的影响因素分析

目的:分析肠杆菌目细菌致导尿管相关性尿路感染(catheter-associated urinary tract infections,CAUTI)患者发生碳青霉烯类药物耐药的影响因素,为临床针对耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Entero‐bacterales,CRE)制定更有效的感控措施提供参考。方法:利用杏林医院感染实时监控系统,选取2016年1月-2021年12月苏北人民医院收治的719例肠杆菌目细菌致CAUTI患者作为研究对象,采集患者的年龄、性别、手术史、用药情况、基础疾病、侵入性操作情况、住院时间、病原学检查结果等情况,分析CAUTI患者耐碳青霉烯类药物的发生情况及其影响因素。结果:719例肠杆菌目细菌致CAUTI患者中,检出CRE的有96例(占13.35%),而检出碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌(carbapenem-sensitivity Enterobacterales,CSE)的则有623例(占86.65%);回归分析结果显示,男性、入住ICU、特殊使用级抗菌药物使用天数是肠杆菌目细菌致CAUTI患者发生碳青霉烯类药物耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论:CAUTI患者病情多危重,是院感防控重点人群,尤其需要关注留置导尿管的男性患者,同时需与药学部、医务处、检验科协作提高临床抗菌药物合理使用率,并联合医务处、护理部全面落实多重耐药菌防控措施,对ICU转至普通病房的患者要加强感控措施交接。

耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药的临床危险因素分析

了解耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药的相关影响因素。方法 本研究100例接受治疗的患者均于2022年1月至2023年1月接受实验,其中发生耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌感染的患者和未发生感染的患者人数一致,均为50例,对选取研究对象的各项资料进行统计分析。结果 住院ICU>7d、使用碳青霉烯类抗生素和使用β-内酰胺酶抑制剂对耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药有显著影响。结论 住院ICU>7d、使用碳青霉烯类抗生素和使用β-内酰胺酶抑制剂会对耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐药产生影响,应加强对易感患者的监控。

基于改良碳青霉烯灭活试验(mCIM和eCIM)对耐碳青霉烯肠杆菌目(CRE)表型及分布研究

分析对耐碳青霉烯肠杆菌目(CRE)表型及分布进行改良碳青霉烯灭活试验(mCIM和eCIM)研究。从我院的患者中收集了103例,时间跨度为2021年1月至2023年1月。在进行临床细菌分离时,排除了同一患者同一部位的重复菌株,最终筛选出了138株CRE菌株。使用全自动细菌鉴定仪进行细菌分离试验,采用PCR法检测CRE耐药基因,分析了mCIM/eCIM与碳青霉烯酶抑制剂增强试验的结果。结果 我院2021年1月-2023年1月共纳入103例患者,从138株CRE菌株中分离出97株肺炎克雷伯菌(占比70.29%),15株黏质沙雷菌(占比10.87%),以及26株大肠埃希菌(占比18.84%)。这些菌株分布在不同的医学科室,其中重症医学科占比最高(56.52%),其次是神经内科重症病房(21.74%)。在这138株CRE菌株中,检测到101株产KPC-2,7株产KPC-3,23株产NDM-1,5株产NDM-5,以及2株同时产KPC-2和NDM-1。对于产KPC的108株菌株,mCIM/eCIM检测准确率为98.15%,与PCR结果的一致性为高。而对于产NDM的28株菌株和同时产KPC和NDM的2株菌株,mCIM/eCIM也能够准确鉴定,但无法区分同时产KPC和NDM的情况。与PCR结果相比,方法 的一致性Kappa值分别为1.000和0.560。在对108株产KPC的菌株进行碳青霉烯酶抑制剂增强试验时,准确鉴定了105株,敏感性为97.22%,特异性为100%。与PCR比较,一致性Kappa值为0.972。对于28株产NDM菌株,该试验准确鉴定了27株,敏感性为96.43%,特异性为100%。与PCR比较,一致性Kappa值为0.976。因此,mCIM和eCIM对CRE型检测敏感性较高,可快速准确鉴定CRE表型,操作简单,且干扰因素较少,具有较高的临床价值。

2016-2018年东莞地区耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的耐药表型、耐药机制和分子流行病学分析

目的通过研究东莞地区的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)的耐药情况和基因分型,研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的亲缘性、耐药机制和bla_(KPC-2)基因环境,为临床寻找控制和治疗该致病菌的更优方案提供参考。方法回顾性收集2016年1月—2018年12月东莞市人民医院、东莞东华医院、康华医院、东莞市中医院和东莞市妇幼保健院等十三所医院的住院患者的CRE菌株进行常规微生物培养、鉴定和药敏试验。以美罗培南或亚胺培南纸片法(K-B法)或最小抑菌浓度(MIC)测定法对肠杆菌目细菌进行初筛;采用改良Hodge试验、亚胺培南-EDTA双纸片协同试验和CIM试验检测CRE产酶情况;聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测并鉴定CRE的碳青霉烯类耐药基因(bla_(KPC)、bla_(NDM)、bla_(IMP)、bla_(DHA)、bla_(CTX-M)和bla_(CMY)),以及CRKP的多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和孔蛋白(OmpK35、OmpK36和OmpK37);通过Junction PCR、Mapping PCR和Crossing PCR检测bla_(KPC-2)基因环境;使用WHONET 5.6软件统计分析CRE临床分离株在标本和科室中的分布与耐药情况,以及碳青霉烯酶基因在科室中的分布情况。结果从37217株肠杆菌目细菌中共检出131株CRE(占0.35%),其中肺炎克雷伯菌79株(占60.31%)、大肠埃希菌21株(占16.03%)和阴沟肠杆菌12株(占9.16%);检出CRE的临床科室主要为ICU(66株,占50.38%);在检出CRE的标本中,位于前3位分别是痰液标本(56株,占42.75%)、尿液标本(21株,占16.03%)、伤口分泌物标本(12株,占9.16%);CRE对目前临床中常使用的抗菌药物表现出高耐药性,仅对阿米卡星耐药率较低,为21.38%。检测104株CRE(包括肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌)发现的碳青霉烯酶有KPC-2型(57,54.81%)、NDM-1型(7株,6.73%)和NDM-5型(2株,1.92%);其中,CRKP主要为ST11型(49株,占62.03%),其次为ST1型(25株,占31.65%);ompK35(75株,占94.94%)、ompK36(77株,占97.47%)和ompK37(79株,占100%)发生突变的占比高;bla_(KPC-2)的基因环境主要为B1型突变型(38株,占48.10%),其次为A型突变型(14株,占17.72%)。结论2016—2018年东莞地区临床CRE检出率为0.35%,耐药性强,其中,CRKP主要为ST11型,主要流行的是KPC-2型,其基因环境为B1型突变型,而且孔蛋白突变占比极高,这提示东莞地区bla_(KPC-2)基因主要通过质粒进行传播,并且孔蛋白突变在CRE中发挥重要作用,院内感染医务工作者应根据该菌科室分布、耐药情况和耐药机制等特点,采取合理有效的预防和治疗方法。

耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐消毒剂基因及四种消毒剂最低抑菌浓度检测

目的 了解临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)耐消毒剂基因qacE、qacE△1、qacE△1-SUL1携带情况,以及四种常用消毒剂最低抑菌浓度(MIC),为医院做好科学消毒提供参考依据。方法 收集某院2021年10月—2022年3月所有临床送检标本分离的CRE非重复菌93株,对菌株进行鉴定和药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测菌株耐消毒剂基因qacE、qacE△1和qacE△1-SUL1携带情况,采用琼脂稀释法检测戊二醛、碘伏、84消毒剂(含氯消毒剂)和乙醇对CRE的MIC值。结果 93株CRE以肺炎克雷伯菌(52株)和阴沟肠杆菌(25株)为主;CRE菌株耐药率较高,对大部分抗菌药物耐药率达100%;耐消毒剂基因qacE、qacE△1和qacE△1-SUL1携带率分别为72.0%(67株)、81.7%(76株)、89.2%(83株)。四种消毒剂对CRE的MIC值,戊二醛为500 mg/L,碘伏为625~2 500 mg/L,84消毒剂(有效氯浓度)为250~500 mg/L,乙醇为75%;碘伏中有4株CRE MIC值(2 500 mg/L)高于标准菌株,84消毒剂中有24株CRE MIC值(有效氯500 mg/L)高于标准菌株。结论 该院临床分离的CRE耐消毒剂基因携带率较高,部分CRE菌株对碘伏和84消毒剂有抗性,临床工作中需科学、规范地使用消毒剂,防止耐药菌医院内传播。

肠杆菌目细菌常见碳青霉烯酶耐药基因多重PCR检测方法的建立及应用评价

目的探讨多重PCR检测5种常见肠杆菌目细菌碳青霉烯酶耐药基因方法的建立及应用评价。方法收集临床分离对碳青霉烯类药物耐药的非重复肠杆菌目细菌118株和对碳青霉烯类药物敏感的肠杆菌目细菌9株,以普通PCR检测blaKPC,blaNDM,blaVIM,blaIMP,blaOXA-48-like结果为参考。采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对试验菌株进行碳青霉烯酶表型检测;构建多重PCR检测5种常见碳青霉烯酶耐药基因。对多重PCR、抑制剂增强试验与普通PCR检测肠杆菌目细菌耐药的灵敏度、特异度和准确度进行比较。结果与普通PCR相比,多重PCR灵敏度为88.54%,特异度为100.00%,κ值为0.79;抑制剂增强试验灵敏度为92.71%,特异度为93.55%,κ值为0.81。在CRE的检测中,虽然多重PCR检测的灵敏度稍低于碳青霉烯酶抑制剂增强试验,但其在特异度上更具优势;二者在阳性率检测上比较差异无统计学意义(P>0.05),检测一致性良好(κ=0.63)。结论该研究成功构建多重PCR体系,能快速、准确检测肠杆菌目细菌中5种常见碳青霉烯酶耐药基因,与临床现行的碳青霉烯酶抑制剂增强试验相比,二者对肠杆菌目细菌耐药检测具有良好的一致性,能极大缩短检测时间。

三种方法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的临床价值比较

目的探讨三种方法对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶进行筛选时的临床价值。方法54株肠杆菌科细菌,均给予改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)联合EDTA碳青霉烯失活试验(eCIM)、酶抑制剂增强试验、快速碳青霉烯酶检测方法(rCDM)进行筛选。以聚合酶链式反应(PCR)结果为金标准,比较三种方法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的灵敏度、特异度及检测时长。结果54株肠杆菌科细菌经PCR筛查,36株为阳性,18株为阴性。rCDM法筛选肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的灵敏度、特异度分别为88.89%、94.44%,均高于mCIM联合eCIM法的50.00%、50.00%和酶抑制剂增强试验的66.67%、55.56%,差异具有统计学意义(P<0.05)。rCDM法的检测时长为(0.32±0.10)d,短于mCIM联合eCIM法的(1.21±0.25)d、酶抑制剂增强试验的(0.56±0.22)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在对肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶进行筛选时,应用rCDM筛选的效果和效率较好,值得临床推广。

磷霉素联合多黏菌素B对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的体外抗菌活性分析

目的分析磷霉素联合多黏菌素B对碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的体外抗菌活性。方法收集2020~2022年西安交通大学第二附属医院分离的CRE 78株,其中碳青霉烯类耐药大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli,CREC)32株、碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CRKP)46株;碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌(carbapenem-sensitive Enterobacterales,CSE)132株,其中碳青霉烯类敏感大肠埃希菌(carbapenem-sensitive Escherichia coli,CSEC)72株、碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(carbapenem-sensitive Klebsiella pneumonia,CSKP)60株。采用琼脂稀释法和肉汤微量稀释法(broth microdilution,BMD)分别测定磷霉素和多黏菌素B的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),采用肉汤微量稀释棋盘法测定CRE对磷霉素联合多黏菌素B的最低抑菌浓度,并计算部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FIC),判定其联合效应。结果78株CRE中28株对磷霉素耐药,总耐药率为35.90%(28/78),其中6株同时还对多黏菌素B耐药,总耐药率为7.69%(6/78)。132株CSE中18株仅对磷霉素耐药,总耐药率为13.64%(18/132);未检测到对多黏菌素B耐药。多黏菌素B联合磷霉素对CREC为相加作用,对CRKP为协同作用。结论磷霉素和多黏菌素B单药耐药率均明显升高,二者联合用药可有效降低耐药率,提供一种新的治疗思路。