L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肝脏的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒性大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了各组小鼠肝脏与脾脏系数,血清谷丙转氨酶(Alanine aminotranferease,ALT)与谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量,肝组织匀浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性,肝组织病理学变化,以及血清中γ-干扰素(γ-Interferon,IFN-γ)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达量,以探明L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌免疫应激小鼠肝脏的保护作用。结果表明,不同剂量的茶氨酸干预处理均能明显降低由大肠杆菌E44813感染引起的肝脏、脾脏系数的升高,降低血清ALT、AST及肝组织匀浆MDA水平,提高肝组织匀浆SOD、CAT、GSH-PX活性,减少IFN-γ、IL-4表达量,改善肝脏组织病理损伤,其中以300 mg·kg-1剂量组效果最好,说明茶氨酸干预对产肠毒性大肠杆菌诱导的免疫应激小鼠肝损伤具有保护作用,而且可能是通过减少IFN-γ与IL-4的表达、降低炎症反应、提高抗氧化能力等途径达到保护肝脏的作用。

宁夏羔羊腹泻的产肠毒性大肠杆菌的研究

1985～1988年,本试验从腹泻羔羊分离到大肠杆菌共95株,并对其中54株菌株做血清型鉴定,明确了分离菌株,其血清分属O_8,O_(101),O_(78),O_9四类O类型,其中O_8为主要O类型。采用MRHA反应和K_(99)单抗及F_(41)抗血清的直接凝集反应,鉴定出分离菌株表面携带有K_(99)或K_(99):F_(41)粘着素抗原。由此选出H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)菌株,用乳鼠胃内投服试验和平板免疫溶血试验,测定出该3株菌具有产生热稳定性肠毒素的特性;且H_(8720)、H_(8724)、H_(8729)对实验动物和初生羔羊有致病作用。其它分离菌株皆能与6株菌株H_(8720)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8724)(O_8∶K_(99)∶F_(41))、H_(8729)(O_9∶K_(99)∶F_(41))、BH_(871)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))、BH_(872)(O_(78)∶K_(99)∶F_(41))、Bj_(877)(O_(101)∶K_(99)∶F_(41))的抗血清发生强烈的凝集性和交叉性反应。上述结果均表明:自腹泻羔羊分离到的菌株是携带有共同抗原成份,即K_(99)或K_(99)∶F_(41)粘着素抗原的产肠毒素性大肠杆菌。

几种功能性物质抑制产肠毒性大肠杆菌的效果及作用机制研究

不同浓度葛根素(PR)、丙酮酸乙酯(EP)、酪醇(TS)、氧化锌(ZnO)处理IPEC-1细胞,CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogena,sLeDH)试剂盒检测几种功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞损伤程度的影响;实时荧光定量PCR法检测不同功能性物质对ETEC K88感染IPEC-1细胞相关基因相对表达水平的影响。结果:PR、EP和ZnO均可促进IPEC-1细胞增殖,其最适添加浓度分别为5μmol/L、1 mmol/L和1μmol/L;TS无促进IPEC-1细胞增殖作用。ETEC K88感染IPEC-1细胞后导致LDH活性显著升高(P<0.05);与K88组相比,添加5μmol/L PR、1 mmol/L EP和1μmol/L ZnO均能显著降低LDH活性(P<0.05)。ETEC K88感染后引起白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子配体2(CXCL2)、热休克蛋白70(HSP70)和核因子E2相关因子(Nrf2)的相对表达量显著升高(P<0.05),细胞周期蛋白D(cyclin D)和绒毛蛋白(Villi)n基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。PR显著提高了细胞IL-8和Villin基因的相对表达量(P<0.05);EP显著降低了(P<0.05)细胞TNF-α和CXCL2基因的相对表达量;ZnO显著提高了Villin和Cyclin D基因的相对表达量(P<0.05)。此外,PR、EP和ZnO均能降低大肠杆菌16S rRNA基因的相对表达量(P<0.05)。综上所述,PR、EP和ZnO均能抑制ETEC K88的增殖,具有抑菌效果,EP可以降低K88造成的炎性基因的表达,PR可以增加肠绒毛基因表达,ZnO可以增加细胞周期基因的表达。

产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法的建立与应用

双启动寡核苷酸引物（dual-priming oligonucleotide，DPO）是一种新型的引物设计方法，具有设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌LT基因为靶基因，设计了一对DPO引物，经过对TaqDNA聚合酶、Mg2＋、dNTP反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大肠杆菌DPO-PCR检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，该方法检测灵敏度为1．24×10^2CFU／ml，在45℃～65℃退火温度范围内，均可实现靶基因的高效扩增。该方法特异性强，测试菌株中4株产肠毒性大肠杆菌均为阳性结果，其余菌株为阴性结果，且无非特异性扩增发生。与常规PCR方法相比，DPO—PCR方法不需要对引物参数特别是退火温度反复优化，同时DPO引物的特殊结构又增强了检测特异性，为致病性微生物的快速准确检测提供了新方法。

一起肠产毒性大肠杆菌O128:H45引起的院内新生儿腹泻暴发

目的探讨一起院内新生儿腹泻暴发的病原及其特征。方法常规方法对可疑腹泻暴发住院新生儿患者粪便、医护人员肛拭子、婴儿奶粉和医院环境标本进行病原分离和鉴定,将分离到的病原菌进行毒力基因检测、药敏试验及PFGE和MLST分子分型分析。结果从12名住院新生儿腹泻患者黄色水样便和1份新生儿ICU病房配奶间的环境标本中分离出13株大肠杆菌O128∶H45和1株大肠杆菌O55,13株大肠杆菌O128∶H45耐热肠毒素基因st均为阳性、具有高度相似性的PFGE带型、MLST的型别均为ST2332型且具有相似的耐药谱。结论首次报道了由肠产毒性大肠杆菌O128∶H45引起的一起院内新生儿腹泻暴发。

中国肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 了解耶尔森菌强毒力岛在中国肠产毒性大肠杆菌中的分布及插入位点。方法 使用PCR扩增、DNA打点杂交和DNA测序及分析方法。结果 在 94株分离自中国的肠产毒性大肠杆菌中 ,14株耶尔森菌强毒力岛核心区的 8个基因PCR扩增阳性 ,除 3株菌的整合酶基因外 ,PCR扩增产物长度均与预期一致 ,但天冬酰胺转运RNA(asnTtRNA)位点扩增阴性 ;上述 14株菌进行全菌DNA打点杂交试验 ,均与irp2和 fyuA探针杂交 ;选择上述 3株菌中的 1株 ,对其整合酶基因的PCR产物测序 ,并与鼠疫耶尔森菌强毒力岛的整合酶基因序列比较 ,发现该整合酶基因于 5’端缺失了 347bp的片段。 结论 14 %肠产毒性大肠杆菌携带的耶尔森菌强毒力岛 ,且均插入在天冬酰胺转运RNA位点处 ;部分菌株所携带的耶尔森菌强毒力岛的整合酶基因发生了缺失。

2014～2018年北京市人源性肠产毒性大肠埃希菌耐药性与PFGE分子分型研究

目的分析北京市门诊腹泻病例肠产毒性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichiacoli,ETEC)分离株抗生素敏感性及分子分型特征。方法采用微量肉汤稀释法对2014~2018年北京市门诊腹泻病例ETEC分离株进行8大类14种抗生素敏感性检测。参照PulseNet中非O157大肠埃希菌脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型方法,对不同区县不同采样时间分离的菌株采用随机抽样原则,对178株菌基因组经限制性内切酶Xba I酶切后进行分子分型和聚类分析。结果 578株2014~2018年北京市门诊腹泻病例ETEC菌株总耐药率为94.29%,对萘啶酸、氨苄西林、头孢唑林耐药率较高,分别为61.58%、60.38%、36.19%。578株菌分为152个耐药谱,耐3种及3种以上抗生素的菌株数达340株(59.00%),有1株菌对12种抗生素耐药。常见耐药谱为耐喹诺酮类的萘啶酸,占20.18%,其次为耐β-内酰胺类的氨苄西林-头孢唑林-头孢噻肟,占12.29%,再次为耐β-内酰胺类的氨苄西林-喹诺酮类的萘啶酸-大环内酯类的阿奇霉素,占6.79%,且耐药谱种类逐年缓慢上升。其中178株菌共产生153种PFGE带型,带型分布较为分散,无优势带型,菌株之间的相似系数为31.60%~100.0%。结论 2014~2018年北京市腹泻病例肠产毒性大肠埃希菌耐药情况严重,耐药谱复杂广泛,多重耐药菌株占比呈逐年缓慢上升趋势。PFGE带型呈多态性分布。

一起肠产毒性大肠杆菌腹泻爆发的流行病学调查

目的对深圳市近期发生的一起不明原因群体性腹泻进行现场流行病学调查和实验室检测,探讨该次群体性腹泻的原因,提出应对类似爆发流行的防制策略。方法描述性流行病学分析爆发过程的三间分布,对采集的18份肛拭子以细菌学培养、分子生物学分析和脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)分析等方法进行实验室检测。结果18份肛拭子中检出4株肠产毒性大肠杆菌,证实为同一血清型O78:K80,菌株同源性达到96.3%。结论本次在居民小区发生的爆发的群体性腹泻致病菌为产毒性大肠杆菌(ETEC),小区二次供水系统的渗露和连续的暴雨可能是污染的来源,居民个人卫生习惯不良是导致爆发的重要因素。建议对二次供水系统开展季节性检修,并对居民实施有针对性的健康教育,将有利于预防此类疫情的发生。

一起由肠产毒性大肠埃希菌引起的食物中毒调查报告

2007年7月25日下午，广西百色市右江区大楞乡某村屯发生一起细菌性食物中毒。经调查，确认为一起由肠产毒性大肠埃希菌引起的食物中毒。现报告如下。

94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛的检测

目的 检测 94株肠产毒性大肠杆菌中耶尔森菌强毒力岛。方法 对分离自中国腹泻病人的肠产毒性大肠杆菌 ,采用 PCR和 DNA打点杂交的方法 ,检测耶尔森菌强毒力岛核心区的 irp8、irp 2、irp 3、irp 4、irp 5及 fyu A基因。结果 分离的肠产毒性大肠杆菌 ,14 % (13/94 )的菌株 irp8、irp 2、irp 3、irp 4、irp 5及 fyu A基因扩增阳性 ,以 irp 2及 fyu A为探针进行 DNA打点杂交 ,上述菌株均为阳性。结论 14

东莞口岸首次检出肠产毒性大肠埃希菌O6

目的:检测进口水产品中是否污染致泻性大肠埃希菌。方法:按照GB/T4789.6-2003致泻性大肠埃希菌检验进行。结果:从进口冻贝肉中检出肠产毒性大肠埃希菌O6,并对该菌的形态及生化等特性进行研究。结论:东莞口岸首次检出该菌,该批冻贝肉被彻底销毁,消除了疫病隐患,确保了卫生安全。

泉州市某区食品中致泻性大肠埃希菌的检测情况

目的 分析泉州市某区集贸摊点和超市食品中致泻性大肠埃希菌携带情况。方法 选择2021年1—12月从泉州市鲤城区超市以及集贸摊点采集的100份食品样本作为研究对象,严格按照GB 4789—2016《食品安全国家标准食品微生物检验致泻性大肠埃希菌检验》对所有标本开展致泻性大肠埃希菌微生物检验以及毒力基因检测,统计最终的检测结果。比较不同食品类型的致泻性大肠埃希菌检出率差异。结果 100份检测样本当中,总共20份检出致泻性大肠埃希菌,检出率为20.00%;其中包含产肠毒性大肠埃希菌(entero toxigenic Escherichia coli,ETEC)共6株,占比为30.00%;肠致病性大肠埃希菌(entero pathogenic Escherichia coli,EPEC)共5株,占比为25.00%;肠出血性大肠埃希菌(entero hemorrhagic Escherichia coli,EHEC)共5株,占比为25.00%;肠侵袭性大肠埃希菌(entero invasive Escherichia coli,EIEC)共4株,占比为20.00%。牲畜肉类、生禽肉类、凉拌类、海产类以及蔬菜类食品的致泻性大肠埃希菌检出率依次为38.89%、45.00%、5.00%、10.00%、4.55%,其中牲畜肉类、生禽肉类的致泻性大肠埃希菌检出率高于其他食品类型(P <0.05)。分离获得的致泻性大肠埃希菌20株内,出现EHEC的O157共5株;血清凝集予以H7鉴定,其中共有5株EHEC的O157:H7鉴定血清凝集,1株O157在羊肉上分离获得,SLT2、hly、eaeA毒力基因均在H7菌中携带,其他O157共4株,4种毒力基因均为阴性。结论 严格按照有关标准开展微生物检验能有效检出食品中的大肠埃希菌以及致泻性大肠埃希菌毒力基因,有关部门应该要加强卫生监督的力度,确保人民群众的食品安全。

一起由肠产毒性大肠杆菌所致两批就餐者食物中毒的调查

怀化市某酒店发生一起先后两批就餐人员共同食物中毒的事故,通过对分析两批就餐中毒人员的罹患率、潜伏期、临床表现和病原学调查分析,结果显示两批就餐中毒人员除罹患率呈现高度显著性差异之外,其潜伏期(χ2=4.36,P>0.05)、临床症状(χ2=0.76,P>0.05)均无明显区别。在剩余食物红扒肘子和患者大便中同时检出肠产毒性大肠杆菌O153血清型。确认两批就餐者均为肠产毒性大肠杆菌所致食物中毒。

重组B亚单位/菌体霍乱疫苗预防儿童产毒性大肠埃希菌感染性腹泻的双盲随机对照研究

目的探讨重组B亚单位/菌体霍乱疫苗(商品名可唯适疫苗)对儿童产毒性大肠埃希菌(ETEC)感染性腹泻的预防效果。方法采用随机、双盲、对照的方法,选择2011年3月—2012年9月深圳市上梅林社区2～12周岁符合ETEC感染性腹泻诊断标准的儿童108例,分为疫苗组与对照组(每组54例),在双盲背景下口服可唯适疫苗或安慰剂(LB培养基干粉胶囊),随访观察12个月。服苗前和全程服苗后2周取空腹静脉血进行血常规、肾功能检查;服苗前和首次服苗后2、6、12个月留取血液及全程服苗后1、2、4周留取粪便进行抗霍乱毒素(抗-CT)、抗霍乱弧菌脂多糖(抗-LPS)及杀弧菌抗体(Vab)测定。结果疫苗组儿童全程服苗后ETEC感染性腹泻发生率为3.7%(2/54),低于对照组的13.0%(7/54),差异有统计学意义(P<0.001);疫苗组儿童全程服苗后12个月内ETEC感染性腹泻次数平均为(0.9±0.5)次,少于对照组的(5.2±0.8)次,差异有统计学意义(t=2.936,P<0.05)。血清抗体:首次服苗后2、6、12个月疫苗组3种抗体阳转率均较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。粪便抗体:全程服苗后1、2、4周两组抗体阳转率间差异有统计学意义(P<0.05)。血清抗体几何平均滴度(GMT):首次服苗后2、6、12个月两组3种血清抗体GMT间差异有统计学意义(P<0.05),且疫苗组首次服苗后6个月高于首次服苗后2、12个月(P<0.05)。粪便抗体GMT:全程服苗后1、2、4周两组粪便抗体GMT比较,差异有统计学意义(P<0.05)。全程服苗后两组儿童血常规与肾功能比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。研究过程中疫苗组出现发热2例,呕吐1例,腹痛1例;对照组出现发热3例;程度较轻,均不需特殊处理。结论可唯适疫苗对儿童ETEC感染性腹泻的预防效果安全而明显,值得在社区推广应用。

产肠毒素性大肠埃希氏菌基因工程疫苗的研究进展

简述了产肠毒性大肠埃希氏菌(ETEC)K88-K99、K88ac-LTB、K99-F41和ST-LT双价基因工程疫苗的研制方法、生产工艺、免疫效果及生态效应及其研究进展,同时阐明了用这些疫苗免疫妊娠母畜,可使吸吮了母畜初乳的幼畜的腹泻发病率和死亡率显著下降,且不会带来生态环境污染。认为这些基因工程疫苗仍有不足之处,需要进一步加以改进。

基于Web of Science肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)研究领域文献可视化分析

基于Web of Sience数据库,以核心文集内收录的1998—2017年的ETEC文献为数据源,以引文可视化软件HistCite与应用知识图谱工具CiteSpace为工具分析了该领域内影响力较大的国家/地区、研究机构、期刊、作者与研究热点等信息.研究结果表明,ETEC研究领域内影响力最大的国家为美国与瑞典,影响力最大的研究机构是瑞典的哥德堡大学,全球论文被引用数量排名前10的作者有5位来自于哥德堡大学.近20年来,ETEC的相关研究主要集中在其对仔猪的影响、腹泻疾病及产生的肠毒素等几个方面.中国在ETEC相关研究领域内科研实力及影响力相对低,需要加强与优秀科研机构的交流与合作,努力提高自身研究水平和论文质量.

重组B亚单位/灭活菌体霍乱疫苗预防肠产毒性大肠埃希菌感染性腹泻专家共识

肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)感染后表现为水样腹泻,严重者可致脱水、电解质失衡并导致死亡。重组B亚单位/灭活菌体霍乱(rBS/WC)疫苗是预防ETEC感染性腹泻的有效手段。国家儿童健康与疾病临床医学研究中心(浙江大学医学院附属儿童医院)和浙江省疾病预防控制中心组织国内临床医学、预防医学领域的专家参考有关病原学、流行病学、疫苗效果、安全性,以及卫生经济学等方面最新循证证据,制订了rBS/WC疫苗预防ETEC感染性腹泻的专家共识,指导临床医师和预防接种专业人员科学、规范接种疫苗,降低ETEC感染性腹泻的发病率。

临床血液分离大肠埃希菌株耐药性及生物被膜形成分析

目的探讨该院血流感染产超广谱酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌(ECO)检出率及其对常用抗菌药物的耐药性及生物被膜形成能力。方法采用法国生物梅里埃公司的Vitek2-Compact全自动微生物分析仪进行鉴定和药物敏感性分析,采用结晶紫半定量方法检测菌株的生物被膜形成能力。结果 92株ECO临床血液分离菌株中,产ESBLs菌株53株(占57.61%),ESBLs阴性菌株39株(占42.39%)。对3类以上抗菌药物耐药ECO 73株(占79.35%),其中,产ESBLs菌株52株,占总菌株数的56.52%,占产ESBLs菌株数的98.11%。耐药率最高的为氨苄西林(94.57%),其次为头孢唑啉(71.74%)和氨苄西林/舒巴坦(67.39%);环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均在60%以上。对于临床常用的氨苄西林/舒巴坦、头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类的妥布霉素和单酰胺类抗菌药物,与ESBLs阴性菌株相比,产ESBLs菌株的最小抑菌浓度(MIC)值显著升高,耐药率显著升高(P<0.05)。而对头霉素类、呋喃类、氨基糖苷类的庆大霉素和阿米卡星、含酶抑制剂的哌拉西林/他唑巴坦和碳青霉烯类抗菌药物的敏感性ESBLs阳性组与ESBLs阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。96.74%的ECO临床血液分离株具有生物被膜形成能力,生物被膜形成量以中量为主。结论该院ECO血液分离菌株产ESBLs比例高,生物被膜形成能力强,呈现多药耐药的特征。

双歧杆菌纯化黏附素对ETEC和EPEC黏附肠上皮细胞的竞争抑制作用

目的 观察双歧杆菌分泌型黏附素对产毒性大肠杆菌 (ETEC)和致病性大肠杆菌 (ETEC)黏附肠上皮Lovo细胞的竞争抑制作用。方法 采用黏附试验计数肠上皮Lovo细胞黏附的细菌数并比较其结果。结果 除黏附素浓度为 1μg/ml和 5 μg/ml时不能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附外 ,10 μg/ml、2 0 μg/ml、30 μg/ml浓度组均能明显抑制ETEC和EPEC对Lovo细胞的黏附 ,且随浓度的逐渐增加 ,这种抑制作用也逐渐增强。