富马酸与肉桂醛联用调节产肠毒素型大肠杆菌诱导猪肠上皮细胞氧化应激的分子机制

本试验旨在研究富马酸(FA)与肉桂醛(CA)联用调节产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)K88诱导猪肠上皮细胞IPEC⁃J2氧化应激的分子机制。试验选用IPEC⁃J2细胞建立氧化损伤模型,用不同浓度FA和CA处理IPEC⁃J2细胞12和24 h,并用CCK⁃8法检测细胞活力,确定最佳处理浓度和时间;以最佳处理浓度的FA和CA预处理细胞,ETEC K88感染细胞3、6、12和24 h,检测其活菌黏附率,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞因子含量和抗氧化指标,并用实时荧光定量PCR(RT⁃qPCR)测定热休克蛋白70(Hsp70)和核因子-κB(NF⁃κB)信号通路相关基因mRNA相对表达量。结果表明:1)FA和CA的最佳处理浓度分别为1.00 mg/mL和1.00μL/mL,最适培养时间为12 h。2)添加FA和CA可有效抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,当ETEC K88感染细胞3 h时其黏附率显著下降(P<0.05),6、12和24 h时极显著下降(P<0.01)。3)添加FA和CA可极显著降低ETEC K88感染细胞中促炎性细胞因子白细胞介素-8(IL⁃8)和肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)含量(P<0.01),极显著提高抗炎性细胞因子白细胞介素-10(IL⁃10)和转化生长因子-β(TGF⁃β)含量(P<0.01)。4)ETEC K88通过激活NF⁃κB信号通路诱导IPEC⁃J2细胞氧化损伤,添加FA和CA可上调Hsp70 mRNA相对表达量并抑制NF⁃κB信号通路缓解IPEC⁃J2细胞氧化应激。5)添加FA和CA可显著提高ETEC K88感染细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH⁃Px)活性(P<0.05),极显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0.01)。综上所述,FA与CA联用可调节炎性细胞因子和氧化应激蛋白平衡并抑制ETEC K88黏附IPEC⁃J2细胞,其可能是通过上调Hsp70抑制NF⁃κB信号通路,增强IPEC⁃J2细胞的抗氧化和抗炎能力,从而缓解ETEC K88诱导的IPEC⁃J2细胞氧化应激。

产肠毒素型脆弱拟杆菌促进结直肠癌发生发展的机制研究进展

脆弱拟杆菌是人体肠道常见的革兰阴性专性厌氧菌。根据能否合成分泌脆弱拟杆菌肠毒素,其可分为产肠毒素型脆弱拟杆菌(ETBF)和非产肠毒素型脆弱拟杆菌。ETBF是结直肠相关性疾病中检出率最高的厌氧菌,但由于分离、培养和检测均相对困难,有关ETBF的研究仍较少。随着宏基因组学的兴起,肠道菌群成为研究热点,ETBF的生物学特性和功能得到进一步阐明,其可能对结直肠癌(CRC)的发生发展有积极促进作用,如诱导慢性炎症的发生,激活Wnt/β联蛋白通路促进结直肠细胞的增殖等。因此,探讨ETBF的生物学功能及其在CRC中的作用机制对CRC的筛查和预防尤为重要,未来应对ETBF在CRC病变早期的丰度变化、功能作用以及具体调控机制进行深入研究。

植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制

本试验旨在研究植物乳杆菌抑制产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)诱发猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制。试验利用植物乳杆菌预处理猪肠上皮细胞IPEC⁃J23 h,ETEC刺激细胞1、3、6、12和24 h,收集细胞及其培养上清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液中白细胞介素-1β(IL⁃1β)、白细胞介素-8(IL⁃8)和肿瘤坏死因子-α(TNF⁃α)的含量,采用实时荧光定量PCR检测细胞中Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)以及NOD样受体3(NLRP3)和NOD样受体6(NLRP6)的表达,采用Western blot检测细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)[p38和细胞外信号调节激酶(ERK)]和核转录因子-κB(NF⁃κB)p65的磷酸化水平以及紧密连接蛋白———闭合小环蛋白-1(zonula occludens⁃1,ZO⁃1)和闭锁蛋白(occludin)的表达。分别采用p38 MAPK抑制剂、ERK⁃MAPK抑制剂和NF⁃κB p65抑制剂处理IPEC⁃J2细胞1 h,再用植物乳杆菌预处理细胞3 h,最后用ETEC处理细胞24 h,收集细胞和培养上清,采用ELISA法检测IL⁃1β、IL⁃8和TNF⁃α含量以及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果表明:1)与ETEC处理相比,植物乳杆菌预处理能够极显著降低ETEC感染12~24 h细胞产生IL⁃1β、IL⁃8和TNF⁃α的含量(P<0.01),显著或极显著提高ETEC感染3~12 h细胞中TLR2、TLR4、NLRP3和NLRP6的mRNA相对表达量(P<0.05或P<0.01),极显著降低ETEC感染24 h细胞中TLR2和NLRP3的mRNA相对表达量(P<0.01),极显著降低ETEC感染3~6 h细胞中p38 MAPK和NF⁃κB p65的磷酸化水平(P<0.01),显著或极显著提高ETEC感染6~24 h细胞中ZO⁃1和occludin的表达量(P<0.05或P<0.01)。2)与ETEC处理相比,抑制剂和植物乳杆菌共同作用能够极显著降低ETEC感染细胞产生IL⁃1β、IL⁃8、TNF⁃α的含量和LDH的活性(P<0.01),植物乳杆菌单独作用也可以极显著降低ETEC感染细胞产生LDH的活性(P<0.01),并且信号通路抑制剂对植物乳杆菌调控部分促炎性细胞因子的产生有协同作用。综上所述,植物乳杆菌可以通过致弱p38 MAPK磷酸化和阻断NF⁃κB信号通路的活化而降低炎症相关因子的产生,从而表现出提高猪肠上皮细胞完整性的潜力。

貉产肠毒素型大肠杆菌的分离鉴定

致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热敏感性肠毒素(LT);另一类是耐热性肠毒素,即热稳定性肠毒素(ST)。仔猪的黄、白痢。

非产肠毒素型脆弱拟杆菌通过下调NF-κB通路抑制TNF-α诱导的结肠上皮细胞炎症反应

目的探讨非产肠毒素型脆弱拟杆菌(NTBF)抑制TNF-α诱导的人正常结肠上皮细胞hcoEPIC炎症反应的机制,为结肠炎的预防和治疗探索新的益生菌疗法。方法建立NTBF与hcoEPIC细胞共培养体系,分别检测NTBF的黏附和侵袭能力;NTBF与hcoEPIC细胞共培养4 h后加入TNF-α诱导细胞炎症,24 h后CCK-8试验和AnnexinⅤ-FITC/PI法检测细胞存活率及凋亡情况;Western blot和RT-qPCR检测不同处理组中hcoEPIC细胞内NF-κB信号通路关键蛋白质的变化;ELISA法检测该通路下游细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-10的表达;体内动物实验评估NTBF干预对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠的影响。结果NTBF能够黏附于hcoEPIC细胞,对细胞无毒害作用。与对照组相比,NTBF单独处理并不影响hcoEPIC细胞增殖(P>0.05),但显著降低由TNF-α诱导的细胞损伤和凋亡(P<0.05);与TNF-α单独处理组相比,NTBF+TNF-α组中磷酸化NF-κB p65和磷酸化IκBα蛋白表达水平与NF-κB和IκBαmRNA水平显著降低(P<0.05);细胞上清液中IL-1β和TNF-α减少,IL-10增加(P<0.05)。动物实验表明NTBF能有效缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎模型小鼠症状,主要表现为抑制结肠炎小鼠体重减轻、降低疾病活动指数评分、改善结肠缩短、减轻结肠病理损伤。结论NTBF可能通过下调NF-κB通路抑制TNF-α诱导的结肠上皮细胞炎症反应。

产肠毒素型大肠杆菌腹泻小鼠模型中小肠AQP3和AQP4的表达

为探讨产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)小鼠腹泻模型中小肠水通道蛋白表达量的变化,运用Real time PCR和ELISA分别检测了ETEC腹泻小鼠模型中空肠AQP3和回肠AQP4的基因表达量和蛋白质质量浓度。结果显示,小鼠在感染ETEC产生腹泻后,空肠AQP3和回肠AQP4的基因表达量和蛋白质质量浓度均呈时间依赖性下降。结果提示,ETEC引起腹泻的机制可能与其改变了小肠水通道蛋白的表达有关。

肠毒素型大肠杆菌F18菌毛对产蛋鸡免疫的原性

提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.

仔猪肠产毒素型大肠杆菌的分离与鉴定

从腹泻死亡仔猪分离出一株大肠埃希氏杆菌，经家兔回肠结扎试验证明能产生热敏肠毒素（ＬＴ）；药敏试验表明对ＳＭＺ＋ＴＭＰ、链霉素、丁胺卡那霉素高度敏感，对四环素、氨苄青霉素不敏感；用分离菌株制成灭活油剂苗对８０头怀孕母猪进行免疫接种结果所生小猪在４０ｄ获得１００％保护率。

致病性大肠杆菌感染小鼠肠炎模型的建立及其分子机制研究

本试验旨在建立产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)感染小鼠肠炎模型,并初步揭示其分子机制。将120只小鼠随机分为4组,每组30只,每组5个重复,每个重复6只。低、中、高剂量试验组分别经口腔灌服1×10^(5)、1×10^(6)和1×10^(7) CFU/只ETEC,对照组灌服等体积生理盐水,各组注射剂量均为0.2 mL。分别于攻毒后2、48、72、96和120 h观察小鼠临床表现并称量其体重,同时从每个组中随机取6只采集其血液和组织样本。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的含量,通过组织切片和苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠空肠、肝脏和脾脏的病理变化,利用实时荧光定量PCR检测Toll-样受体4(TLR4)、核因子kappa B p65亚基(NF-κB p 65)、髓样分化因子88(MyD88)、B细胞淋巴瘤因子3(BCl3)mRNA相对表达量。结果显示:与对照组相比,攻毒小鼠精神沉郁,进食减少,攻毒后72和96 h试验组小鼠体重均显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05),肠道、肝脏和脾脏组织切片出现明显的炎症反应;攻毒后48和72 h试验组血清中CRP、TNF-α和IL-8的含量极显著升高(P<0.01);攻毒后48、72和96 h试验组空肠组织中TLR4、NF-κB p 65、MyD88 mRNA相对表达量极显著升高(P<0.01);攻毒后24和120 h试验组空肠组织中BCl3 mRNA相对表达量分别极显著或显著升高(P<0.01或P<0.05),攻毒后72 h呈极显著下降(P<0.01)。综上所述,本研究成功建立了ETEC感染小鼠肠炎模型,并且该病原菌可能是通过TLR4/NF-κB信号通路诱导炎症相关因子生成和组织中炎性细胞浸润,从而引起小鼠炎症反应。

河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定

仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴性菌,克氏三糖铁培养产酸产气,LTB与M17873核苷酸序列同源性为100%,该菌株确定为产肠毒素型大肠杆菌.

特异性IgY抗仔猪断奶腹泻机理的研究概况

针对仔猪断奶腹泻(Post-weaningEscherichia colidiarrhea,PWECD)这一仔猪断奶后的常见病和多发病的病原特异性,阐述了利用K88和F18等特异性菌毛作为抗原免疫产蛋母鸡制备的抗PWECD特异性卵黄抗体对大肠埃希氏菌引起的断奶仔猪腹泻的作用机理。认为,特异性IgY用于防治PWECD,具有安全、高效、成本低、产率高、稳定性好,无药物残留,不会产生耐药性,符合现代动物管理理念等诸多优点,是一种能有效防治PWECD的绿色生物制剂,应用前景广阔。

黏附素F18菌毛研究进展

综述F18菌毛的一般特性、表达和提取、相关血清型和毒力因子、亚单位及基因调控等。

猪大肠杆菌病的流行病学及防治措施

猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的常见猪病,对养猪业造成重大经济损失。由于病原种类多样、致病机制复杂、流行范围广,加之耐药性的日益严重,使得猪大肠杆菌病的防控面临严峻挑战。本文详细探讨了猪大肠杆菌病的病原特征、流行病学、临床表现、诊断方法及防治措施,旨在为猪场管理者和兽医专业人员提供全面而深入的理解,以制定更为科学有效的防控策略,降低猪大肠杆菌病的发病率和死亡率,保障养猪业的健康稳定发展。

赤灵芝多糖对ETEC所致肠炎的影响及机制研究

目的研究赤灵芝多糖(ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)对产肠毒素型大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导小鼠肠炎的作用效果及机制。方法选用24只6~8周龄雄性SPF级昆明小鼠,利用ETEC菌液腹腔注射诱导建立小鼠肠炎模型。采用随机数字表法分为为正常组、ETEC感染组、ETEC感染+高剂量GLP组,ETEC感染+低剂量GLP组,每组6只。采用HE染色观察小鼠小肠组织病理变化,采用免疫印迹法检测各组小鼠小肠组织中C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-6蛋白的表达情况。检测各组小鼠小肠组织中Toll-样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)、核因子κB p65亚基(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)mRNA的表达水平,探查GLP通过TLR4核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路对ETEC诱导的小鼠肠道炎症的调控作用。结果与正常组比较,ETEC感染组小鼠出现精神萎靡,食欲减弱,小肠绒毛破损,组织中可发现大量的炎性浸润,疾病活动指数(disease activity index,DAI)呈上升趋势(P<0.05),小鼠小肠组织中TLR4、NF-κB p65、MyD88 mRNA的相对表达量和CRP、TNF-α、IL-6的蛋白表达水平增高(P<0.01)。与ETEC感染组比较,ETEC感染+不同剂量组中小鼠精神状态和食欲有所改善,小鼠小肠组织中TLR4、NF-κBp65、MyD88的mRNA相对表达量均降低(P<0.01)。ETEC感染+高剂量组中小鼠小肠组织CRP、TNF-α、IL-6蛋白表达水平降低(P<0.01),ETEC感染+低剂量组降低程度差异无统计学意义(P>0.05)。与ETEC感染+低剂量组比较,ETEC感染+高剂量组小鼠小肠组织TLR4、MyD88 mRNA的相对表达量和IL-6蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论GLP可有效缓解ETEC诱导的小鼠肠道的炎症,且可能通过调控TLR4/NF-κB信号通路发挥抗炎作用,其作用效果可能与浓度呈正比。