定量产肠毒素性大肠埃希氏菌F_(41)黏附素反向间接血凝试验的建立

利用 F41 单因子血清 IgG 致敏绵羊红细胞,建立了定量产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)F41黏附素的反向间接血凝试验。经致敏的绵羊红细胞能被F41单因子血清特异性地抑制,且不与 ETEC K88、ETEC K99、ETEC 987P、致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 O138、鼠伤寒沙门菌和猪链球菌2型菌液出现交叉反应,其敏感性比甘露糖抵抗血凝反应(MRHA)至少高 25 倍。结果表明,该反向间接血凝试验具有很高的特异性和敏感性,可用于生物制品中黏附素含量的定量。

产肠毒素大肠埃希菌sfmH基因的原核表达及多克隆抗体的制备

以产肠毒素大肠埃希菌F4ac(F4ac^+ETEC)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Sfm菌毛操纵子顶端黏附素sfmH基因,然后将PCR产物插入原核表达载体pET-28a(+)中,构建出阳性重组质粒pET-28a(+)-sfmH,再将其导入大肠埃希菌BL21中进行诱导表达。通过对IPTG浓度、诱导温度和诱导时间进行探究,发现重组菌在0.8mmol·L^(-1)IPTG、25℃诱导7h时蛋白表达量最高,且重组蛋白以包涵体形式存在,大小约为26ku。将重组蛋白在最优诱导条件下进行大量表达并纯化,利用纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得SfmH多克隆抗体(简称多抗),通过ELISA和Western blot试验对多抗效价和特异性进行鉴定。这一研究构建并获得了高纯度的融合蛋白rSfmH,将其免疫小鼠后成功获得鼠源高免血清,为进一步探究Sfm菌毛的功能奠定了研究基础。

抗猪产肠毒素大肠埃希氏菌卵黄抗体的研制及攻毒治疗试验

利用产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)标准菌株K88,K99,987P制备灭活苗,免疫待开产母鸡,应用琼脂扩散试验检测母鸡血清抗体和卵黄抗体(IgY)效价,在琼扩效价≥1∶64时收集卵黄,卵黄经氯仿去脂、硫酸胺沉淀后提纯出卵黄抗体,将提纯卵黄抗体对攻毒仔猪口服治疗,结果显示治疗仔猪腹泻状况明显减轻,与对照组相比有显著差异;治疗组未出现死亡而对照组仔猪有33%～67%的死亡率。试验结果表明,研制的IgY对ETEC所致的仔猪腹泻具有明显的效果。

双重PCR检测猪产肠毒素性大肠埃希菌耐热肠毒素基因

为了研究猪产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素基因(STa、STb)的临床快速诊断方法,试验以已发表的猪ETEC耐热肠毒素基因保守区为目的片段设计合成了2对可扩增182bp和108bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因的双重PCR检测方法。结果表明:该方法对猪肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌、鼠伤寒沙门杆菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性;对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果STa+5株、STb+2株,其中STa+STb+1株。

产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达

为构建产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体Ad STa-K99,通过PCR技术分别克隆了STa及K99基因,并与腺病毒穿梭质粒连接构建了穿梭质粒pAd5 STa-K99,将pAd5STa-K99和骨架质粒(含GFP基因)分别用PacⅠ酶切线性化,利用LipofectamineTM LTX&PLUS共转染293细胞进行同源重组包装重组腺病毒,通过PCR及Western blot对重组腺病毒进行鉴定。结果显示,重组腺病毒Ad5STa-K99构建正确并表达融合蛋白,且表达的融合蛋白能够被抗体所识别,为研制由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒载体疫苗奠定了基础。

新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌致病因子的分子生物学研究进展

阐述了新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)菌毛的结构、分子生物学特性、基因检测技术、菌毛抗原受体的生化特性以及菌毛载体系统的优点;另外,从分子结构与功能、作用机理、基因检测三方面叙述了新生仔猪ETEC不耐热肠毒素和耐热肠毒素的研究进展。

鸡抗猪产肠毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价卵黄抗体的变化规律及喷干工艺的研究

为获得具有一定保护力的外源性抗体制剂,用于防治仔猪腹泻,利用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)标准菌株K88、K99、987P和导致仔猪副伤寒的2株沙门菌,制备产毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价的灭活苗,免疫接种待开产母鸡400羽,聚乙二醇沉淀法分离纯化卵黄抗体,然后采用直接试管凝集法检测不同时间的卵黄抗体(IgY)效价。将试验结束后无菌收集的全蛋液稀释过滤后,按照喷干设备进口温度165℃,出口温度85℃进行喷雾干燥,制备卵黄抗体粉,并对其进行表观性状及相关指标的测定。结果表明,免疫接种蛋鸡后,卵黄液中抗体IgY的效价呈现规律性变化,喷雾干燥获得的卵黄抗体粉表观性状较好,粗蛋白含量为12.6%,体外消化率高达95%,IgY的效价为1∶29。通过3次免疫接种获得了高免卵黄抗体,并进行了全蛋喷雾干燥工艺的摸索,制备出了效价较高的抗体制剂,为预防和治疗仔猪腹泻提供了一条途径。

菏泽地区猪源产肠毒素大肠埃希菌的分离鉴定及耐药性分析

采集山东菏泽地区发病猪场病死猪的小肠内容物进行细菌分离,对分离细菌进行生化鉴定、血清型鉴定和药敏试验。结果表明:分离得到的35株细菌均为产肠毒素大肠埃希菌,其主要血清型为O8、O101,分别占42.9%、31.4%。35株分离株对丁胺卡那霉素和多黏菌素B敏感,对阿奇霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、庆大霉素、卡那霉素、链霉素具有不同程度的敏感性;对土霉素和四环素耐药,对其余11种抗生素也有不同程度的耐药性。结果表明,丁胺卡那霉素、多黏菌素B可作为该地区预防该疾病的首选药物,其他药物须减少或暂停使用。

表达产肠毒素性大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒的免疫学特性研究

为研究表达产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热性肠毒素STa与粘附素K99融合蛋白重组腺病毒r Ad.STa-K99的免疫学特性,本实验将r Ad.STa-K99经肌肉注射免疫小鼠,采用ELISA法分别检测了特异性Ig G、SIg A、脾脏淋巴细胞增殖活性水平及CD4+、CD8+T淋巴细胞分型比值;并通过攻毒保护试验对其免疫效果进行评价。结果表明,免疫后小鼠特异性Ig G、SIg A及脾脏淋巴细胞增殖活性水平显著升高;CD4+/CD8+值显著增大;动物攻毒保护率达到70%。结果表明r Ad.STa-K99可以刺激小鼠机体产生较高水平的体液免疫、特异性细胞免疫和肠道粘膜免疫反应,并对小鼠提供有效保护。本实验为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒疫苗奠定了基础。

一起产肠毒素大肠埃希氏菌导致344人腹泻的病原学检查

1993年7月13日，讷河市承丰乡长兴一、二自然屯发生一起多达344人的流行性腹泻．经流行病学和实验室检查．证实为产肠毒素的大肠希氏菌污染水流所致，现将检验结果报告如下。

生鲜牛乳中产肠毒素大肠埃希菌环介导等温扩增技术的建立与应用

为了快速检测生鲜牛乳中的产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC),防止食源性产肠毒素大肠埃希菌给人类造成的危害,建立快速检测不耐热型产肠毒素大肠埃希菌的环介导等温扩增方法(LAMP)。敏感性和特异性试验结果表明,该方法敏感性高,特异性强,能够从生鲜牛乳中检测到1pg产肠毒素大肠埃希菌DNA,与其他型大肠埃希菌及细菌不发生交叉反应。利用建立的LAMP技术对来自西宁市奶牛场及自由市场的21份生鲜牛乳样品进行检测,6份样品呈阳性,阳性检出率为28.6%,从分子水平为生鲜牛乳中产肠毒素大肠埃希菌的检测提供了一种快速、准确的手段,对保障生鲜牛乳的食品安全有重要意义。

鸡抗猪产肠毒素大肠埃希菌-沙门菌二联五价卵黄抗体的变化规律及喷干工艺的研究

为获得具有一定保护力的外源性抗体制剂，用于防治仔猪腹泻，利用产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）标准菌株K88、K99、987P和导致仔猪副伤寒的2株沙门菌，制备产毒素大肠埃希菌一沙门菌二联五价的灭活苗，免疫接种待开产母鸡400羽，聚乙二醇沉淀法分离纯化卵黄抗体，然后采用直接试管凝集法检测不同时间的卵黄抗体（IgY）效价。将试验结束后无菌收集的全蛋液稀释过滤后，按照喷干设备进口温度165℃，出口温度85℃进行喷雾干燥，制备卵黄抗体粉，并对其进行表观性状及相关指标的测定。

产肠毒素大肠埃希菌K99菌毛基因的克隆与原核表达

本试验采用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)K99菌毛基因完整编码框的特异性引物,以牛源大肠埃希菌C83912基因组DNA为模板,扩增出大小为498bp的ETEC K99菌毛基因完整编码框,克隆至pMD19-T载体,阳性重组质粒pMD19-T-K99经PCR、双酶切鉴定和测序正确后,双酶切产物与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-K99,转化原核表达工程菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导获高效表达,Western blot证明原核表达的K99重组蛋白能与K99单因子血清发生特异性反应,重组蛋白免疫家兔后可产生特异性抗体,证明重组蛋白具有良好的抗原性。ETEC K99原核表达质粒的构建和表达产物抗原性研究,为进一步研究K99亚单位疫苗以及制备K99特异性抗体奠定了基础。

产肠毒素性大肠埃希氏菌的检验

为查明夏季一起员工食物中毒的病原菌,采用GB/T4789-2003规定的PCR检测试剂盒进行检测。结果表明:从5份食物中毒者的便样和2份呕吐物中检出产肠毒素(LT)大肠埃希氏菌,其它肠道致病菌未检出。可以认为这起食物中毒是由产肠毒素(LT)大肠埃希氏菌所致。

产肠毒素性大肠埃希菌主要毒力因子及疫苗的研究进展

产肠毒素性大肠埃希菌是目前幼畜腹泻的主要致病因素。文章综述了在畜牧业中产肠毒素性大肠埃希菌的主要致病因子黏附素和肠毒素、EatA及其生化特性,并介绍了产肠毒素性大肠埃希菌的传统灭活苗及新型基因工程疫苗的研究进展。

猪大肠埃希菌肠毒素基因的多重PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素(STa、STb)基因和不耐热肠毒素(LT)基因保守序列为靶序列,设计合成了3对可扩增目的片段为182、108和336 bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因和不耐热肠毒素基因的多重PCR方法.该方法对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌Streptcoccus、鼠伤寒沙门氏杆菌Salmonella typhimrium和猪肺疫巴氏杆菌Pasteurella pneumotropic的检测结果均为阴性,并且能检测到102cfu/mL稀释度的标准菌.对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果为:含STa基因的菌株为5株;含STb基因为2株;含LT基因为3株,其中2株同时具有STb和LT基因.结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查.

产肠毒素大肠埃希菌自然感染后的保护作用

产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)是发展中国家引起小儿腹泻的重要致病原因,也是引起旅游者腹泻的主要病因。致人类腹泻ETEC产生3种肠毒素蛋白——猪和人的耐热肠毒素(STp、STh)、不耐热肠毒素(LT)和一种或多种定植因子(CF)。本文作者选择了地方流行ETEC的几内亚比绍的比绍市郊,进行小儿肠道感染史的大群体研究,从1996年1月～1998年4月,历时18.4个月。

貉产肠毒素型大肠杆菌的分离鉴定

致病性大肠杆菌能产生一种或多种肠毒素,称为毒素型大肠杆菌(ETEC)。ETEC是导致人畜腹泻的主要致病菌,借助于所产生的菌毛抗原黏附于动物小肠粘膜定居并产生作用于肠壁的外毒素称为肠毒素。主要有两类肠毒素:一类是不耐热性肠毒素,即热敏感性肠毒素(LT);另一类是耐热性肠毒素,即热稳定性肠毒素(ST)。仔猪的黄、白痢。