新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌致病因子的分子生物学研究进展

阐述了新生仔猪产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)菌毛的结构、分子生物学特性、基因检测技术、菌毛抗原受体的生化特性以及菌毛载体系统的优点;另外,从分子结构与功能、作用机理、基因检测三方面叙述了新生仔猪ETEC不耐热肠毒素和耐热肠毒素的研究进展。

定量产肠毒素性大肠埃希氏菌F_(41)黏附素反向间接血凝试验的建立

利用 F41 单因子血清 IgG 致敏绵羊红细胞,建立了定量产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)F41黏附素的反向间接血凝试验。经致敏的绵羊红细胞能被F41单因子血清特异性地抑制,且不与 ETEC K88、ETEC K99、ETEC 987P、致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 O138、鼠伤寒沙门菌和猪链球菌2型菌液出现交叉反应,其敏感性比甘露糖抵抗血凝反应(MRHA)至少高 25 倍。结果表明,该反向间接血凝试验具有很高的特异性和敏感性,可用于生物制品中黏附素含量的定量。

一株产H_2S变异产肠毒素性大肠埃希菌O15:K?的鉴定与初步研究

目的对新发现的1株产H2S大肠埃希菌进行细菌学鉴定,并对其生物学特性进行初步研究。方法对临床1例腹泻病患儿粪便标本中分离的产H2S大肠埃希菌采用形态学、培养特性、生化反应、血清学等方法进行鉴定,并用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果经全面鉴定,该菌为产H2S的产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)O15:K?,耐药性不强,对大多数抗菌药物敏感。结论产H2S的ETEC O15:K?是变异的致泻性大肠埃希菌,应引起临床和实验室的高度重视。致泻性大肠埃希菌产H2S变异的现象值得进一步深入研究。

检测987p^+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88+ (+为菌毛阳性 )、K 99+ 、F 41+ 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该方法的敏感度可达 10 2 CFU ,对 2 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,有 1株为阳性 ,与血清学检测的结果一致。结果表明 ,此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床

表达产肠毒素性大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒的免疫学特性研究

为研究表达产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热性肠毒素STa与粘附素K99融合蛋白重组腺病毒r Ad.STa-K99的免疫学特性,本实验将r Ad.STa-K99经肌肉注射免疫小鼠,采用ELISA法分别检测了特异性Ig G、SIg A、脾脏淋巴细胞增殖活性水平及CD4+、CD8+T淋巴细胞分型比值;并通过攻毒保护试验对其免疫效果进行评价。结果表明,免疫后小鼠特异性Ig G、SIg A及脾脏淋巴细胞增殖活性水平显著升高;CD4+/CD8+值显著增大;动物攻毒保护率达到70%。结果表明r Ad.STa-K99可以刺激小鼠机体产生较高水平的体液免疫、特异性细胞免疫和肠道粘膜免疫反应,并对小鼠提供有效保护。本实验为研制预防由ETEC引起的新生动物腹泻重组腺病毒疫苗奠定了基础。

产肠毒素性大肠埃希菌主要毒力因子及疫苗的研究进展

产肠毒素性大肠埃希菌是目前幼畜腹泻的主要致病因素。文章综述了在畜牧业中产肠毒素性大肠埃希菌的主要致病因子黏附素和肠毒素、EatA及其生化特性,并介绍了产肠毒素性大肠埃希菌的传统灭活苗及新型基因工程疫苗的研究进展。

猪大肠埃希菌肠毒素基因的多重PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素(STa、STb)基因和不耐热肠毒素(LT)基因保守序列为靶序列,设计合成了3对可扩增目的片段为182、108和336 bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因和不耐热肠毒素基因的多重PCR方法.该方法对肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌Streptcoccus、鼠伤寒沙门氏杆菌Salmonella typhimrium和猪肺疫巴氏杆菌Pasteurella pneumotropic的检测结果均为阴性,并且能检测到102cfu/mL稀释度的标准菌.对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果为:含STa基因的菌株为5株;含STb基因为2株;含LT基因为3株,其中2株同时具有STb和LT基因.结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查.

猪大肠杆菌不耐热肠毒素基因的PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法。该方法对987p+、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均为阴性。对15株分离自腹泻仔猪的待检菌株进行检测,有3株LT基因阳性。结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查。

产肠毒素性大肠埃希菌K99-987P-F41原核表达载体的构建、表达及其纯化

目的构建产肠毒素性大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41原核表达载体,诱导表达后进行纯化。方法利用PCR技术,从ETEC基因组DNA中扩增出K99、987P、F41部分基因片段,将3段目的基因融合亚克隆至大肠埃希菌原核表达载体p ET30a(+),构建重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经镍离子亲和层析纯化。结果重组表达质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41经PCR、酶切及测序鉴定证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约60 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的63.8%,纯度为81.2%,浓度为8.953 mg/ml,可同时被天然和重组抗原多抗识别,具有良好的反应原性。结论 ETEC重组质粒p ET30a(+)-K99-987P-F41可在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,利用镍离子亲和层析柱纯化可获得融合蛋白。

双重PCR检测猪产肠毒素性大肠埃希菌耐热肠毒素基因

为了研究猪产肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)耐热肠毒素基因(STa、STb)的临床快速诊断方法,试验以已发表的猪ETEC耐热肠毒素基因保守区为目的片段设计合成了2对可扩增182bp和108bp的引物,建立了检测ETEC耐热肠毒素基因的双重PCR检测方法。结果表明:该方法对猪肠出血性大肠埃希菌(EHEC)EDL933、猪链球菌、鼠伤寒沙门杆菌和猪肺疫巴氏杆菌的检测结果均为阴性;对11株分离自广东佛山地区腹泻仔猪的待检菌株进行检测,结果STa+5株、STb+2株,其中STa+STb+1株。

仔猪大肠杆菌病K_(88)K_(99)-987P-F_(41)四价亚单位疫苗制苗株的生物学特性

对仔猪大肠杆菌病K88+(+为黏附素阳性)、K99+、987P+、F41+制苗株的血凝性、传代稳定性等生物学特性进行了研究。结果表明,K88+株不能凝集绵羊红细胞,但能凝集鸡、猪、豚鼠、兔红细胞,以鸡红细胞凝集价最高;K99+株不能凝集兔红细胞,但能凝集鸡、猪、豚鼠、绵羊红细胞,以绵羊红细胞凝集价最高;F41+株对这5种红细胞均能凝集,以绵羊红细胞凝集价最高;而987P+株对这5种红细胞均不能凝集。传代结果表明,K88+株使用限定代次可达22代,K99+、987P+、F41+至少可达42代。

LAMP技术快速检测产肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素

目的:建立环介导恒温扩增快速检测肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素的方法。方法:采用环介导恒温扩增反应(LAMP)技术扩增肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素特异性基因,优化反应条件,并与传统PCR比较。结果:与传统的PCR技术相比,LAMP法更加简便快速,且在等温条件下进行,具有更高的灵敏性及特异性。结论:该方法灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备,为检测产肠毒素性大肠埃希菌的LTⅠ毒素提供了一个快速简便的新方法。

牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕的制备及裂解条件的优化

目的制备牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对裂解条件进行优化。方法将裂解质粒pHH43电转入牛肠产毒素性大肠埃希菌中,37℃培养至A_(600)值为0.6时,升温至42℃诱导裂解,制备菌蜕。同时对起始诱导A_(600)值(0.4、0.6、0.8、1.0、1.2)和培养基成分含量(2/3、3/4、4/5和正常含量)进行优化,并计算裂解效率。结果在起始诱导A_(600)值为0.6,培养基营养成分为正常含量的3/4时,裂解效率最高,达99.93%。结论成功制备了牛产肠毒素性大肠埃希菌菌蜕,并对其制备条件进行了优化,为进一步开展对其免疫效果和佐剂效应等研究奠定了基础。

新疆沙湾县新生仔猪大肠杆菌流行株的分离鉴定及防治研究

新生仔猪的大肠杆菌性腹泻是由产肠毒素性大肠埃希氏菌引起的一种仔猪腹泻病，目前，已经发现的肠道致病性大肠杆菌主要有肠毒素性大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌、肠出血性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌和肠凝集性大肠杆菌。

犊牛产肠毒素性大肠杆菌病的防治

致病性大肠埃希菌共有5种,其中产肠毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是一种常见的消化道致病菌,可导致犊牛发热、腹泻,甚至造成死亡,对畜牧养殖造成很大损失。本文从该病菌的致病机制、临床诊断、防治措施等方面进行简要综述。

表达ETEC F41的干酪乳杆菌免疫小鼠后的黏膜免疫应答

将SPF级Balb/c小鼠随机分为免疫组和对照组,免疫组小鼠以pLA-F41/L.casei重组干酪乳杆菌滴鼻免疫,对照组用pLA/L.casei干酪乳杆菌滴鼻免疫,应用间接ELISA测定血清中特异性IgG抗体水平和鼻咽部冲洗液、肠道冲洗液、阴道冲洗液及粪便中ETEC F41特异性SIgA抗体水平。分离并计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数目,利用免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群水平,观察重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组织(GALT)黏膜部位的免疫应答。结果表明重组干酪乳杆菌滴鼻免疫小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答。

仔猪大肠埃希菌病的发生和防治

1病原大肠埃希菌为革兰阴性短杆菌,长2~3微米,宽0.4~0.7微米,呈散在或成对出现,约50%的大肠埃希菌有周身鞭毛,致病性菌株常有荚膜和菌毛。根据大肠埃希菌的致病作用主要分为6种,即产肠毒素性大肠埃希菌、肠致病性大肠埃希菌、肠道出血性大肠埃希菌、肠聚集性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌以及产志贺毒素性大肠埃希菌,产肠毒素性大肠埃希菌是动物发生腹泻的主要病原体。

牦牛ETEC灭活疫苗安全性与免疫效力试验

对本实验室制备的4批牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗进行了安全和免疫效力试验。结果表明,该疫苗对家兔和牦牛初次和再次倍量接种均是安全的,皮下和肌肉接种也是安全的。免疫效力试验结果表明,当免疫机体体内抗体效价达到1∶128时,即可产生可靠的免疫力,抵抗牦牛大肠埃希氏菌的攻击。家兔对免疫攻毒保护率为80%,牦牛保护率为95%。说明牦牛大肠埃希氏菌病灭活疫苗对于预防牦牛大肠埃希氏菌病安全有效。

欧盟成员国多种食源性细菌性人畜共患病传播情况报告

本文总结了欧盟成员国中多种食源性细菌性人畜共患病,如弯曲杆菌病、沙门氏菌病、李氏杆菌病和产肠毒素性大肠埃希氏菌病的发生情况,为评价动物源性食品对人类健康的危害、制定防治措施提供了一定的参考。