提高甘蓝型油菜游离小孢子产胚率的研究

以 10个甘蓝型油菜基因型为材料进行游离小孢子培养 ,对如何提高可培养的基因型范围和产胚率进行了研究。结果表明 ,严格选择小孢子处于单核晚期的花蕾 ,在低温下分离小孢子 ,并采用含活性碳的NLN固液双层培养基 ,可大大提高产胚的基因型范围及产胚率。在固液双层培养基上 ,10个供试材料中有 7个获得了小孢子胚 ,产胚量最高的达 5 80个胚 /蕾。而在单层液体培养基上 ,仅有 4个基因型得到了胚 ,最高产胚量为 4 8个 /蕾。前者比后者平均产胚率提高 1～ 10倍。在小孢子胚发育至球形和早期鱼雷型阶段时 ,添加新培养液进行振荡培养 ,可提高胚胎发育的同步性 ,畸形胚大大减少。经过这些改进 ,使在含琼脂浓度较高的培养基上培养的子叶形胚直接发育成植株的频率大大提高。

秋水仙碱对油菜小孢子产胚率和再生植株二倍体率的影响

为探索适用于长江流域主产区生态条件下的甘蓝型油菜小孢子培养技术中最佳秋水仙碱浓度,以2个适合进行小孢子培养的油菜材料为对象,研究了4种不同浓度（0、100、200和400mg/L）的秋水仙碱处理对小孢子产胚率和二倍体率的影响。结果表明,200mg/L的秋水仙碱处理24h后,小孢子的产胚率和二倍体率都达到最大,与对照有显著的差异。用这一浓度,对40份不同基因型油菜的小孢子进行诱导培养,结果表明不同基因型油菜小孢子产胚率和二倍体率存在较大差异,小孢子产胚率为0.12~10.39胚/蕾,再生植株二倍体率为26.7%~90.0%。按照种皮颜色分类后发现,黄籽油菜与黑籽油菜的小孢子产胚率有显著差异,而二倍体率因材料基因型而异,推测油菜种皮颜色与小孢子的产胚率有一定相关性,而与再生植株二倍体率的相关性不大。

基于小孢子培养创制DW871矮秆彩色油菜新种质

彩色油菜具有油用和观赏价值,因易种植、花色鲜艳和开花时间长等特点备受关注。然而,目前报道彩色油菜多为高芥酸、高硫甙的高秆株型,不满足兼作观赏和油用推广应用要求。因此,选育品质优良、株型适宜的彩色油菜新种质是观赏油菜的育种目标之一。本研究中以具有特异花序性状、观赏价值大的DW871为基础材料,与普通彩色高秆油菜杂交后,F1代利用小孢子培养技术创制具有DW871特性同时品质优良的彩色花新种质。研究表明,采用前期集成的油菜小孢子培养技术,产胚率达到了312~507胚/蕾,共纯合到14株彩色花油菜,其中白色花5株,橘红色花4株,金桔色花5株。经过农艺性状调查和品质分析,从DH植株中筛选出的Y57是一株含有DW871特异花序、矮杆、金桔色花、品质“双低”的优良新种质,株高88 cm,一次分支数18个,含油量39%,蛋白质含量25.96%,芥酸为0.95%,硫苷为28.15μmol/g饼,是培育集观赏和油用价值的甘蓝型彩色油菜新种质,具有较高的利用价值和广阔的应用前景。

奶牛胚胎分割试验研究

简单分割7～8天奶牛胚胎59枚(117个半胚)。裸半胚成对移给59头奶牛或黄牛,80～90天有27头(45.8％)妊娠。最后24头受体产犊34头,半胚产犊率29.1％(34/117)。有10对双胎,双胎率41.7％(10/24)。比较在不同情况下—7天或8天;晚桑椹或囊胚期;透明带软化处理或不软化处理—分割的半胚,成对移植后受体妊娠率分别是40.0％和57.9％;35.7％和54.8％;48.6％和41.7％。半胚产犊率分别是26.6％和34.2％;23.6％和33.9％;30.0％和27.7％。均无显著差异(P>0.05)。分割优质胚胎得到最好的(35.7％)半胚产犊率。半胚在体外5小时内移植有较高(30.5％)的产犊率。试验探索了奶牛半胚移给远处分散的农户黄牛的可能性。11对奶牛半胚移给11头黄牛有6头(54.5％)妊娠。最后5头受体产下7头奶牛犊,两对同卵双胎。

奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法(即胚胎透明带不经链霉蛋白酶软化处理)直接分割7—8日龄新鲜胚胎(一分为二)。裸半胚成对移植给66头受体,90天妊检,移植妊娠率为56.1％(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6％(9/26),半胚产犊率为29.2％(35/120)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5％(5/11)产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0％(1/4)和57.4％(4/7)。

甘蓝型油菜小孢子离体培养条件改良

应用低含油量甘蓝型油菜品系1064与高含油量品系H105杂种F1花蕾进行小孢子培养,研究了两个种植地点的油菜小孢子产胚率的影响。对长度在0.4cm～0.6cm,0.6cm～0.8cm以及0.8cm以上的胚分别培养,并比较了秋水仙碱悬浮处理离体小孢子、浸根和滴芽3种染色体加倍方法的加倍效率。结果表明,种植在西宁的材料小孢子产胚率比南京高,为8.6枚/皿;0.6cm～0.8cm大的胚转接到B5固体培养基,其成苗率高达48.53%;3种加倍处理方法中以50mg/L秋水仙碱悬浮小孢子48h染色体加倍效率最高,达到46.23%。本研究构建了含有123个株系的DH群体,可用于油菜含油量性状的QTL分析。