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产蛋白酶枯草芽胞杆菌益生菌种的筛选与应用 被引量:18
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作者 常维山 张春阳 +2 位作者 牛钟相 朱立贤 谢幼梅 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2003年第3期10-11,共2页
本研究从健康鸡体内分离、选育出一株可产中性蛋白酶的枯草芽胞杆菌 ;将其作为益生素生产菌种 ,制备了微生态制剂———益生素 ;并对该菌的生物学性状、产酶性状和饲喂效果进行了系统研究。研究表明该枯草芽胞杆菌培养48小时 ,培养液中... 本研究从健康鸡体内分离、选育出一株可产中性蛋白酶的枯草芽胞杆菌 ;将其作为益生素生产菌种 ,制备了微生态制剂———益生素 ;并对该菌的生物学性状、产酶性状和饲喂效果进行了系统研究。研究表明该枯草芽胞杆菌培养48小时 ,培养液中含蛋白酶活力可达 1 0 32 .56U ml;Bulb C小鼠腹腔注射和海兰白蛋公雏鸡口服试验均表明 ,该菌对动物安全 ;连续传代及体外保存一年生物性状稳定。饲喂实验表明 ,该益生素能明显促进肉用仔鸡的生长发育 ,到实验期末 ,提高肉用仔鸡体重 7.32 % ,肉用仔鸡的累积饲料转化率提高 8.96 %。对肉用仔鸡 ,合适的添加剂量为 0 .1 %(W W) (含H1菌 7.1 0× 1 0 5CFU g饲料 ) 展开更多
关键词 肉用仔鸡 生长发育 产蛋白酶枯草芽胞杆菌 益生菌种 菌种筛选 应用 生物学性状 酶性状 饲喂效果
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1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其产脂肪酶特性
2
作者 张震 张岩 +4 位作者 杨朋坤 任双慧 高雅欣 孙玉娇 王永芬 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第4期66-74,共9页
【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY01... 【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2 h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10^(9)CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10^(9)CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。 展开更多
关键词 草芽杆菌 菌株鉴定 脂肪酶
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几种离子和有机化合物对枯草芽胞杆菌蛋白酶活力的影响 被引量:6
3
作者 陈营 桂远明 陈晓刚 《大连水产学院学报》 CSCD 北大核心 2001年第2期125-129,共5页
研究了不同浓度的金属离子及有机化合物对枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis )蛋白酶活力的影响 ,结果表明 :①在 5种金属离子中 ,Mg2 +、Na+、K+对酶有激活作用 ,其中Mg2 +浓度为 2mmol/L时 ,激活作用最大。随着金属离子浓度的降低 ,K+和... 研究了不同浓度的金属离子及有机化合物对枯草芽胞杆菌 (Bacillussubtilis )蛋白酶活力的影响 ,结果表明 :①在 5种金属离子中 ,Mg2 +、Na+、K+对酶有激活作用 ,其中Mg2 +浓度为 2mmol/L时 ,激活作用最大。随着金属离子浓度的降低 ,K+和Na+对酶的激活作用均减弱 ,Ca2 +和Zn2 +对酶活力有抑制作用。②在 7种重金属离子中 ,除Mn2 +对蛋白酶有激活作用外 ,Cu2 +、Pb2 +、Cd2 +、Co2 +、Cr3+和Cr6+均对蛋白酶有抑制作用。③在有机化合物中 ,半胱氨酸和EDTA对酶均有激活作用 ,且在 2 0mmol/L时最为强烈。④Na+-K+、Ca2 +-Mg2 +和Cu2 展开更多
关键词 草芽杆菌 蛋白酶 酶活力 金属离子 有化合物
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枯草芽胞杆菌NRCB002发酵液的促生效应及高产乙偶姻发酵条件优化
4
作者 李林梅 刘柠 +4 位作者 马长义 胡椿 李珊珊 沈慧 高南 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1105-1112,共8页
[目的]本文旨在明确枯草芽胞杆菌发酵液组分对番茄幼苗生长的影响,针对有效代谢产物进行发酵条件优化,为制备高效微生物肥料提供技术支持。[方法]以枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)NRCB002为供试菌株,通过温室... [目的]本文旨在明确枯草芽胞杆菌发酵液组分对番茄幼苗生长的影响,针对有效代谢产物进行发酵条件优化,为制备高效微生物肥料提供技术支持。[方法]以枯草芽胞杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)NRCB002为供试菌株,通过温室盆栽试验,明确NRCB002发酵液组分对番茄幼苗生长和根系形态的影响;以NRCB002菌株生长量及代谢产物乙偶姻产量为评价指标,通过单因素优化法确定碳源和氮源的种类、浓度、发酵温度和发酵时间,通过正交试验设计和极差分析优化无机盐成分。[结果]与去离子水和发酵培养基对照相比,重悬菌液、发酵菌液上清、发酵菌液及含乙偶姻的重悬菌液均显著提高番茄株高、茎粗、叶面积、根冠比、总根长、总根表面积、总根体积、侧根数、地上部和根部的干重;其中,发酵菌液上清及含乙偶姻的重悬菌液处理的番茄幼苗地上部干重显著高于重悬菌液的幼苗地上部干重;发酵菌液上清、发酵菌液及含乙偶姻的重悬菌液处理的番茄幼苗根部干重显著高于重悬菌液处理的幼苗根部干重。以80 g·L^(-1)蔗糖为碳源、以25 g·L^(-1)酵母浸粉为氮源时菌株NRCB002的生物量和乙偶姻浓度均较高;最优无机盐组合:KH_(2)PO_(4)1.5 g·L^(-1)、MgSO_(4)·7H 2O 1.0 g·L^(-1)和MnSO_(4)·H_(2)O 0.2 g·L^(-1);优选的发酵温度为37℃,发酵时间96 h。使用优化后的发酵条件,用1 L摇瓶进行发酵,NRCB002生物量(D 600)为15.70,乙偶姻浓度为29.65 g·L^(-1),分别是初始发酵培养基的3.4和11.8倍。[结论]菌株NRCB002发酵液对番茄生长具有良好的促生作用,乙偶姻是其发酵液中关键的促生物质。 展开更多
关键词 草芽杆菌 植物根际促生菌 乙偶姻 发酵条件优化 微生物肥料
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枯草芽胞杆菌GXHZ16抑制烟草疫霉病菌的表达谱分析 被引量:1
5
作者 胡亚杰 范啟铃 +4 位作者 李群岭 周效峰 丁婷 汪章勋 吴峰 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2024年第3期608-619,共12页
烟草黑胫病由烟草疫霉菌Phytophthora nicotianae侵染引起,是烟草生产上一种分布广泛、为害严重的土传病害。本实验室前期从广西贺州富川烟区健康烟株根际土壤中分离筛选获得一株枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis GXHZ16,对峙培养发现该... 烟草黑胫病由烟草疫霉菌Phytophthora nicotianae侵染引起,是烟草生产上一种分布广泛、为害严重的土传病害。本实验室前期从广西贺州富川烟区健康烟株根际土壤中分离筛选获得一株枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis GXHZ16,对峙培养发现该菌株对烟草疫霉菌具有良好的拮抗活性(抑制率65.79%)。为探究菌株GXHZ16对烟草疫霉菌的可能抑制分子机理,本研究分别针对枯草芽胞杆菌GXHZ16与烟草疫霉菌对峙培养36h(处理组)和0h(对照组)的混合样品,采用高通量转录组测序(RNA-Seq)技术结合生物信息学分析对峙培养36 h后枯草芽胞杆菌的基因差异表达谱及所涉及的信号通路变化。结果发现:对峙培养36 h后枯草芽胞杆菌GXHZ16有1607个基因发生了显著差异表达,包括810个上调表达基因和797个下调表达基因;其中筛选获得的显著表达基因特别是上调表达的基因(包括鞭毛装配、细菌趋化性相关基因以及与表面活性素、丰原素和制磷脂菌素合成相关的10个相关基因)可能均涉及枯草芽胞杆菌对烟草疫霉菌的抑制作用。进一步的GO富集分析显示,共有1343个差异表达基因被注释到不同的功能亚类中,涉及差异基因最多的为细胞组分类别中的细胞解剖实体。特别地,KEGG富集分析显示,共有551个差异表达基因归到数百个Pathway中,其中涉及差异表达基因最多的是微生物在不同环境中的代谢途径;其他主要代谢途径有鞭毛装配和淀粉蔗糖代谢等;此外,细菌趋化性通路和单环菌素生物合成通路也高度富集。总之,本研究从转录组水平分析获得了枯草芽胞杆菌(与烟草疫霉对峙培养后)的基因差异表达图谱及相关调控代谢途径;为进一步阐明芽胞杆菌抑制植物病原真菌的生防机制并提高枯草芽胞杆菌的生防效果奠定了基础。 展开更多
关键词 草芽杆菌 烟草疫霉菌 转录组分析 差异表达基因
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枯草芽胞杆菌突变株ZC-7中性蛋白酶催化区域氨基酸突变导致其活力提高
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作者 王建玲 赵丛 杜连祥 《生物技术通讯》 CAS 2009年第4期526-529,共4页
目的:探讨枯草芽胞杆菌突变株ZC-7高产中性蛋白酶的原因。方法:用PCR方法分别扩增突变株ZC-7与出发菌株枯草芽胞杆菌AS1.398产中性蛋白酶的编码基因,测序比较二者基因的不同;在CPHmodels Server网站进行氨基酸序列分析,模拟突变前后中... 目的:探讨枯草芽胞杆菌突变株ZC-7高产中性蛋白酶的原因。方法:用PCR方法分别扩增突变株ZC-7与出发菌株枯草芽胞杆菌AS1.398产中性蛋白酶的编码基因,测序比较二者基因的不同;在CPHmodels Server网站进行氨基酸序列分析,模拟突变前后中性蛋白酶的二级结构。结果:对比结果显示成熟肽中有5个氨基酸位点发生突变,其中3个位于酶的催化区域内;从预测的二级结构模型上可以看到突变位点所处区域的折叠结构发生细微变化。结论:先前研究中发现枯草芽胞杆菌AS1.398和突变株ZC-7发酵液中的酶蛋白含量基本相同,因此推测高产的原因不是酶量的增加,而是突变的氨基酸使酶与底物结合的部位更加适合催化水解反应,从而提高其比活力。 展开更多
关键词 草芽杆菌 中性蛋白酶 基因克隆 序列分析
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1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其弹性蛋白酶结构研究 被引量:6
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作者 王超 陈启和 +3 位作者 倪辉 李利君 蔡慧农 苏文金 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期13-20,共8页
鉴定弹性蛋白酶产生菌株EL32,确定该酶的基本结构。采用分子生物学、形态学及生理生化性质对菌株EL32进行鉴定;用硫酸铵沉淀、离子交换层析和分子筛层析纯化酶蛋白;借助肽指纹图谱及酶基因克隆技术研究该酶的一级结构;利用同源建模的方... 鉴定弹性蛋白酶产生菌株EL32,确定该酶的基本结构。采用分子生物学、形态学及生理生化性质对菌株EL32进行鉴定;用硫酸铵沉淀、离子交换层析和分子筛层析纯化酶蛋白;借助肽指纹图谱及酶基因克隆技术研究该酶的一级结构;利用同源建模的方法研究该酶的空间结构。菌株EL32的16S rDNA与枯草芽胞杆菌16S rDNA的同源性达到99%,其菌落呈乳白色,其细胞革兰染色阳性,具有芽胞;发酵葡萄糖试验产酸不产气,明胶水解试验呈阳性,能够水解淀粉,V-P反应呈阳性,鉴定为枯草芽胞杆菌。从菌株BL32发酵液中纯化得到了弹性蛋白酶,SDS-PAGE分析显示其分子量为31 ku。用LTQ-MS测定肽指纹图谱表明该弹性蛋白酶是枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin,该酶的基因和蛋白质序列与枯草芽胞杆菌蛋白酶subtilisin的同源性都高达99%。菌株EL32弹性蛋白酶的三维结构含有6个α-螺旋,7个扭曲的平行β-折叠以及2个反平行的β-折叠,His、Asp和Ser是其活性中心的关键基团。鉴定了1株产弹性蛋白酶的枯草芽胞杆菌,确定了其弹性蛋白酶是蛋白酶subtilisin,为该枯草芽胞杆菌蛋白酶的应用提供了基础。 展开更多
关键词 菌株鉴定 草芽杆菌 弹性蛋白酶 纯化 结构
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蜡样芽胞杆菌蛋白酶的克隆及在枯草芽胞杆菌系统中的高效表达 被引量:2
8
作者 承龙飞 朱富成 +1 位作者 刘可可 何冰芳 《生物加工过程》 CAS 2015年第3期20-25,共6页
基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基... 基于来源于Bacillus cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶WQ的液相色谱-双质谱(LC-MS-MS)分析结果,设计引物,克隆耐有机溶剂蛋白酶WQ的基因,测序分析表明该蛋白酶的开放阅读框(ORF)大小为1 701 bp,编码566个氨基酸,其中含有信号肽(28个氨基酸)、前肽(220个氨基酸)及成熟肽序列(含954 bp编码318个氨基酸),相对分子质量约为3.7×104。将不带自身信号肽的蛋白酶基因apr WQ插入穿梭质粒p MA5中,构建了表达载体p MA5/apr WQ。该表达载体导入枯草芽胞杆菌WB600中获得阳性重组子WB600-p MA5/apr WQ,通过优化培养基成分以及培养条件,重组子发酵产蛋白酶体积酶活达到17 400 U/m L,约为高产野生菌产酶量的5倍。重组蛋白酶在多种有机溶剂(体积分数为50%)中表现出了良好的耐受性,验证了重组菌表达的蛋白酶与来源于B.cereus WQ9-2的耐有机溶剂蛋白酶性质一致,该耐有机溶剂蛋白酶的高效表达为进一步发挥其高效生物催化作用等实际应用奠定了基础。 展开更多
关键词 耐有机溶剂蛋白酶 草芽杆菌 高表达 发酵优化
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枯草芽胞杆菌XF-1粗蛋白抑菌活性初步研究 被引量:26
9
作者 熊国如 张翠英 +2 位作者 刘庆丰 李顺德 何月秋 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期92-95,共4页
枯草芽胞杆菌XF-1是一株对大白菜根肿病有良好防治效果及对多种植物病原真菌有抑菌效果的生防菌株。为了研究其可能的作用机制,本文用硫酸铵沉淀法提取了发酵液中粗蛋白,并在不同处理条件下对其抑菌活性进行了初步研究。该粗蛋白对蛋白... 枯草芽胞杆菌XF-1是一株对大白菜根肿病有良好防治效果及对多种植物病原真菌有抑菌效果的生防菌株。为了研究其可能的作用机制,本文用硫酸铵沉淀法提取了发酵液中粗蛋白,并在不同处理条件下对其抑菌活性进行了初步研究。该粗蛋白对蛋白酶K和胰蛋白酶及紫外照射均不敏感,对热稳定。经40、60、80℃和100℃处理20 min后,其抑菌作用基本上无变化;经121℃处理20 min后,抑菌活性保持60%。这些结果,为进一步研究XF-1菌株对根肿病的防治机制和进一步应用提供了试验依据。 展开更多
关键词 草芽杆菌XF-1 抑菌蛋白 活性 大白菜根肿病
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枯草芽胞杆菌降解木质纤维素能力及产酶研究 被引量:20
10
作者 王毅 刘云国 +1 位作者 习兴梅 陈芙蓉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期1-6,共6页
从农林废物堆肥中分离得到1株细菌经鉴定为枯草芽胞杆菌,将该细菌用于木质素类化合物利用,固态培养条件下考察其对木质纤维素的降解能力及产酶特性,另外对发酵前后的稻草结构进行了红外光谱分析。结果表明,枯草芽胞杆菌具有木质素降解能... 从农林废物堆肥中分离得到1株细菌经鉴定为枯草芽胞杆菌,将该细菌用于木质素类化合物利用,固态培养条件下考察其对木质纤维素的降解能力及产酶特性,另外对发酵前后的稻草结构进行了红外光谱分析。结果表明,枯草芽胞杆菌具有木质素降解能力,兼具低分子量木质素酚型、非酚型类物质的降解能力。其对木质素降解是木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶、漆酶、纤维素酶和半纤维素酶共同作用的结果。在实验条件下,培养30 d使木质素降解率达9.47%,同时对纤维素、半纤维素也有较高程度的降解;降解率分别为38.8%、41.84%。红外光谱分析结果表明,稻草木质素结构被破坏,枯草芽胞杆菌对木质素各官能团的降解作用有所不同。 展开更多
关键词 草芽杆菌 固态培养 木质纤维素
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枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺优化 被引量:9
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作者 乔俊卿 刘邮洲 +1 位作者 张荣胜 刘永锋 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期447-455,共9页
[目的]枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌,通过优化其摇瓶发酵工艺,从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量,为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法]以水稻纹枯病菌(Rhizoct... [目的]枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌,通过优化其摇瓶发酵工艺,从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量,为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法]以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为指示菌,利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素,并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析,筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分;随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计和响应曲面法,优化T-500菌株高产脂肽类抗生素的发酵培养基成分和发酵条件。[结果]T-500菌株高产脂肽类抗生素的最佳培养基为:黄豆饼粉7.00 g·L^(-1),蛋白胨4.92 g·L^(-1),酵母粉1.90 g·L^(-1),小麦粉5.00 g·L^(-1),玉米糊5.00 g·L^(-1),NaCl 1.00 g·L^(-1),MgSO_40.20 g·L^(-1),MnSO_45.0 mg·L^(-1),FeSO_40.5 mg·L^(-1)。最佳发酵培养条件为:装液量500 mL三角瓶装105 mL,接种量0.87%,发酵时间41.35 h,温度28℃,转速180 r·min^(-1)。利用最佳摇瓶发酵工艺,T-500菌株所产生的脂肽类抗生素对纹枯病菌的抑菌带最宽,达(11.23±0.15)mm,菌含量达(7.41±1.18)×109CFU·mL^(-1)。经摇瓶发酵试验和抑菌活性验证,理论预测值与实际值无显著差异。质谱和色谱检测表明:优化发酵工艺后产生的Surfactin含量较基础培养基提高了48.2%,Iturin含量较基础培养基提高了180.9%;优化发酵工艺后检测到了Fengycin的产生,但优化前未发现Fengycin的产生。[结论]利用响应曲面法成功优化了枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺;优化后,T-500产脂肽类抗生素产量增加,抑菌活性增强。 展开更多
关键词 草芽杆菌 脂肽类抗生素 响应曲面法 发酵培养基 发酵条件
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枯草芽胞杆菌芽胞表面展示外源蛋白的研究进展 被引量:13
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作者 余小霞 田健 伍宁丰 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期31-38,共8页
枯草芽胞杆菌是一种生物安全的革兰氏阳性细菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽胞。枯草芽胞杆菌的芽胞由核心、皮层、孢子外套蛋白三部分组成,目前已成功利用枯草芽胞杆菌芽胞外套蛋白CotB、CotC、CotG、CotX和OxdD为载体,... 枯草芽胞杆菌是一种生物安全的革兰氏阳性细菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽胞。枯草芽胞杆菌的芽胞由核心、皮层、孢子外套蛋白三部分组成,目前已成功利用枯草芽胞杆菌芽胞外套蛋白CotB、CotC、CotG、CotX和OxdD为载体,将酶蛋白、抗原蛋白或荧光标记蛋白等展示于芽胞表面。芽胞表面展示的蛋白通常具有较好的稳定性、易于纯化和安全性好等优点,可应用于医药、食品及饲料工业等领域,具有较大的应用前景。详细介绍了枯草芽胞杆菌芽胞的分子特点及芽胞表面展示系统的构建过程及其应用前景,为芽胞表面展示载体的基础及应用研究奠定基础。 展开更多
关键词 草芽杆菌 外源蛋白 表面展示
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枯草芽胞杆菌B006产表面活性素的培养条件优化 被引量:9
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作者 王军强 王连国 +2 位作者 郭荣君 马桂珍 李世东 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期214-221,共8页
芽胞杆菌产生的环脂肽类生物表面活性素surfactin具有重要抗菌、促进生物膜形成等功能,其含量和同系物组分构成影响其功能。为了提高芽胞杆菌B006产生表面活性素的产量,通过单因素实验和正交实验,测定了碳源、氮源和无机盐等营养物质及... 芽胞杆菌产生的环脂肽类生物表面活性素surfactin具有重要抗菌、促进生物膜形成等功能,其含量和同系物组分构成影响其功能。为了提高芽胞杆菌B006产生表面活性素的产量,通过单因素实验和正交实验,测定了碳源、氮源和无机盐等营养物质及接种量、培养时间、装液量和初始pH值对芽胞杆菌B006摇瓶发酵产生表面活性素的影响;采用排油圈法测定发酵液中表面活性素的产量,采用HPLC-MS方法比较培养基优化前后surfactin的产量和组分含量。结果表明,适合芽胞杆菌B006摇瓶发酵产生表面活性素的培养基组成为:牛肉膏10 g/L、玉米粉15 g/L、硝酸铵3 g/L和氯化钠3 g/L;适合的培养条件为:初始pH值7.0、接种量10%、装液量60 m L/500 m L,发酵周期64 h。优化后surfactin的产量约为314.73 mg/L,比优化前提高了74.88%;surfactin各组分比例发生改变,其中C16和C17组分的含量明显提高,为优化前相应组分含量的1.64和8.34倍。优化的培养基组分和培养条件可明显提高芽胞杆菌B006菌株产生surfactin的产量,改变surfactin同系物组分的构成,为利用芽胞杆菌B006进行高活性表面活性素的工业生产和代谢调控研究奠定了基础。 展开更多
关键词 草芽杆菌 表面活性素 正交实验 排油圈法
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枯草芽胞杆菌B201产芽孢培养基优化 被引量:13
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作者 刘春红 张丽霞 +4 位作者 李燕 华贵荣 田一龙 林梦梦 王琦 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2016年第5期650-656,共7页
采用单因素试验及正交试验设计对枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis B201产孢培养基进行了碳源、氮源、无机盐筛选及优化,最终确定B201发酵培养基配方为玉米粉3 g/L,糖蜜10 g/L,豆粕粉10 g/L,鱼粉10 g/L,K_2HPO_4 2 g/L,Na_2HPO_4 2 g/L,Mg... 采用单因素试验及正交试验设计对枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis B201产孢培养基进行了碳源、氮源、无机盐筛选及优化,最终确定B201发酵培养基配方为玉米粉3 g/L,糖蜜10 g/L,豆粕粉10 g/L,鱼粉10 g/L,K_2HPO_4 2 g/L,Na_2HPO_4 2 g/L,MgSO_4 0.5 g/L,MnSO_4 0.5 g/L。优化后的培养基在500 L通气式机械搅拌发酵罐中进行了小试,结果表明B201生长快速,发酵16 h开始形成芽孢,26 h放罐后发酵液活菌量达到1.06×10^(10) CFU/m L,芽孢量8.8×10~9 CFU/m L,芽孢形成率为83.0%,活菌含量和芽孢形成率较高,为B201工业化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 草芽杆菌 发酵 培养基 芽孢 生物防治
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不同碳氮源对枯草芽胞杆菌BAB−1产抗菌脂肽的影响 被引量:5
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作者 张晓云 郭庆港 +8 位作者 王培培 苏振贺 鹿秀云 赵卫松 曲远航 董丽红 丛蓉 李社增 马平 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2021年第2期251-258,共8页
枯草芽胞杆菌BAB−1是一株对设施蔬菜气传病害具有较好防治效果的生防菌,前期研究表明脂肽类抗生素是其产生的主要抑菌物质之一。为提高菌株BAB−1脂肽类抗菌物质的产量,本研究通过快速蛋白液相层析(Fast protein liquid chromatography,F... 枯草芽胞杆菌BAB−1是一株对设施蔬菜气传病害具有较好防治效果的生防菌,前期研究表明脂肽类抗生素是其产生的主要抑菌物质之一。为提高菌株BAB−1脂肽类抗菌物质的产量,本研究通过快速蛋白液相层析(Fast protein liquid chromatography,FPLC)分析了5种碳源及5种氮源对菌株BAB−1脂肽类抗菌物质产量的影响,进一步采用溶血圈试验及排油圈法测定粗脂肽的性质。结果表明,熊果苷是BAB−1菌株产生surfactin的最佳碳源,其surfactin产量分别是葡萄糖、D−木糖、D−核糖及L−阿拉伯糖的2.95、7.01、4.26及5.60倍,此时菌株BAB−1粗脂肽的溶血活性与排油能力最强;熊果苷与葡萄糖利于该菌株产生fengycin,二者的fengycin产量没有显著差异,但显著高于D−木糖、D−核糖及L−阿拉伯糖。L−天冬酰胺与L−谷氨酸钠是菌株BAB−1产生抗菌脂肽的良好氮源,二者的surfactin与fengycin产量没有显著差异,但显著高于L−半胱氨酸、L−脯氨酸及L−谷氨酰胺,以这2种物质为氮源时菌株BAB−1粗脂肽的溶血活性与排油能力均较强。通过RT−qPCR技术分析了不同碳源对surfactin合成酶基因srfAA表达的影响结果表明,以熊果苷为碳源时,菌株BAB−1中srfAA基因的表达量相比葡萄糖提高了2.9倍。上述结果为菌株BAB−1产抗菌脂肽类物质发酵工艺的优化及其工业化生产提供了一定的理论支持。 展开更多
关键词 草芽杆菌 抗菌脂肽 碳源 氮源
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绿色荧光蛋白标记的枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖研究 被引量:11
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作者 陈燕红 黎永坚 +1 位作者 喻国辉 陈远凤 《中国农学通报》 CSCD 2014年第9期237-241,共5页
为了更直观地了解植物内生枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖情况,评估其定殖能力,为西芹黄萎病生物防治提供依据。通过原生质体转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pHT315-gfp导入枯草芽胞杆菌R31细胞中,对菌株进行gfp标记,然后利用gfp标... 为了更直观地了解植物内生枯草芽胞杆菌R31在西芹根际定殖情况,评估其定殖能力,为西芹黄萎病生物防治提供依据。通过原生质体转化法将携带绿色荧光蛋白基因的质粒pHT315-gfp导入枯草芽胞杆菌R31细胞中,对菌株进行gfp标记,然后利用gfp标记菌株灌根处理西芹苗,研究其在西芹根际的定殖形式和能力。结果获得了携带pHT315-gfp质粒的R31-gfp菌株,该质粒可以在R31细胞中稳定表达,标记菌R31-gfp在蓝光激发下可以稳定发出强的绿色荧光。利用标记菌接种西芹幼苗后,可以在根系表皮检测到绿色荧光膜。对其定殖量的检测发现,接种3天后标记菌在根表和根际土中稳定定殖,定殖量分别达到1.4×104cfu/g和7.6×104cfu/g,并长期以该水平稳定定殖,到第65天仍可在根表和根际土检测到9.1×104cfu/g和3.17×105cfu/g的R31-gfp。由此得出,R31可以在西芹根表形成菌膜,并在根际长期稳定定殖。 展开更多
关键词 草芽杆菌 绿色荧光标记 西芹根际 定殖
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不同培养条件对枯草芽胞杆菌BS168-ΔsinR生物膜形成及维生素K2产量的影响 被引量:5
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作者 吴静 李伟 +10 位作者 冯静静 周梦洁 胡汶松 汪剑 SOKHNA MBACKE Gningue 吴佳雯 赵礼军 徐文瀚 薛正莲 王洲 刘艳 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2021年第14期23-30,共8页
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)是合成维生素K2的微生物之一,维生素K2的合成量又与细菌生物膜有重要关系。其中sinR是生物膜形成环节中的关键调节基因,我们用同源重组的方法构建枯草芽胞杆菌sinR缺失突变体(ΔsinR)菌株,再以BS168-Δs... 枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)是合成维生素K2的微生物之一,维生素K2的合成量又与细菌生物膜有重要关系。其中sinR是生物膜形成环节中的关键调节基因,我们用同源重组的方法构建枯草芽胞杆菌sinR缺失突变体(ΔsinR)菌株,再以BS168-ΔsinR菌株为出发菌株,采用微孔板法-结晶紫染色测定生物膜形成量,核酸定量仪测定胞外蛋白,苯酚硫酸法测定胞外多糖,HPLC测定维生素K2的生物合成量。比较分析了不同温度、pH、以及不同浓度的金属离子(Mn^(2+)、 Fe^(2+)、Ca^(2+))对枯草芽胞杆菌BS168及BS168-ΔsinR生物膜形成能力以及维生素K2合成量的影响。结果表明,重组菌BS168-ΔsinR生物膜形成能力和维生素K2合成能力均优于原始菌BS168,且重组菌在生物膜形成、维生素K2合成过程中对温度、酸碱性的适应能力也强于原始菌。一定浓度的金属离子可以促进生物膜的形成及维生素K2的合成。2株菌生物膜形成的最佳条件为温度37~40℃、pH 8.0、Mn^(2+)浓度0.01 mmol/L、 Fe^(2+)浓度1μmol/L、Ca^(2+)浓度0.01 mmol/L,维生素K2合成的最佳条件是温度40℃、pH 7.0~8.0、Mn^(2+)浓度0.1 mmol/L、 Fe^(2+)浓度50μmol/L、Ca^(2+)浓度1 mmol/L。该研究为深入探究sinR基因参与枯草芽胞杆菌生物膜形成的机制及提高维生素K2合成产量提供实验基础和理论支撑。 展开更多
关键词 草芽杆菌 SINR 生物膜 培养条件 维生素K2
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枯草芽胞杆菌α-淀粉酶高产菌株的选育 被引量:4
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作者 管斌 谢来苏 +1 位作者 丁友芳 隆言泉 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1997年第S1期90-94,共5页
以Bacilussubtilis14140为出发菌株,经亚硝基胍反复多次处理和筛选,该菌α-淀粉酶酶活从8000U/ml提高到34200U/ml,并探讨了一种高效的α-淀粉酶选育方法.另外在摇瓶培养过程中,探讨了培养... 以Bacilussubtilis14140为出发菌株,经亚硝基胍反复多次处理和筛选,该菌α-淀粉酶酶活从8000U/ml提高到34200U/ml,并探讨了一种高效的α-淀粉酶选育方法.另外在摇瓶培养过程中,探讨了培养基碳源、氮源对该菌株产酶特性的影响. 展开更多
关键词 Α-淀粉酶 草芽杆菌 亚硝基胍诱变处理 酶活 筛选方法
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苏云金芽胞杆菌营养期杀虫蛋白基因vip3A在枯草芽胞杆菌中的表达 被引量:2
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作者 邱思鑫 范晓静 +2 位作者 洪鹏翔 关雄 胡方平 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期508-516,共9页
枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis常被用于表达杀虫和抗菌蛋白。为了探讨苏云金芽胞杆菌B.thuringiensis营养期杀虫蛋白基因(vip3A)在枯草芽胞杆菌中的表达情况,促进杀虫防病工程菌构建,将枯草芽胞杆菌168菌株核糖体小亚基S4蛋白基因的启... 枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis常被用于表达杀虫和抗菌蛋白。为了探讨苏云金芽胞杆菌B.thuringiensis营养期杀虫蛋白基因(vip3A)在枯草芽胞杆菌中的表达情况,促进杀虫防病工程菌构建,将枯草芽胞杆菌168菌株核糖体小亚基S4蛋白基因的启动子与苏云金芽胞杆菌WB7菌株vip3A基因的编码序列连接,插入大肠杆菌Escherichia coli与枯草芽胞杆菌穿梭载体pAD123,得到重组原核表达质粒pADpvip,将重组质粒转化枯草芽胞杆菌标准菌株168和分离自辣椒体内的生防内生枯草芽胞杆菌BS-2菌株中,获得工程菌株。SDS-PAGE分析表明在枯草芽胞杆菌168菌株的部分工程菌株中有约88kDa大小的VIP条带,而BS-2的工程菌株中未见相应的条带,表明Vip3A蛋白仅在168菌株中表达。生物测定表明有5株168的工程菌株(168vip1-4,6)表现较高的杀虫活性,工程菌株发酵稀释液(约107CFU/mL)处理的小白菜叶片饲喂斜纹夜蛾2龄幼虫72h的杀虫效果可达87.64%~92.13%,但vip3A基因转入内生枯草芽胞杆菌BS-2中不表现杀虫作用。毒力测定表明168vip2菌株对斜纹夜蛾2龄幼虫72h的LC50为0.0194mL/mL。这些结果为进一步研究基因在枯草芽胞杆菌中的表达构建杀虫防病工程菌打下了基础。 展开更多
关键词 苏云金芽杆菌 草芽杆菌 营养期杀虫蛋白 异源表达 杀虫活性
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内生枯草芽胞杆菌WZ10对马铃薯枯萎病防效及功能测定
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作者 赵远征 张超 +3 位作者 张岩 徐利敏 周洪友 王东 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期370-377,共8页
为明确枯草芽胞杆菌WZ10的生物学功能及对马铃薯枯萎病的室内防治效果。本研究利用Salkowski’s比色法和分光光度法、室内盆栽试验对菌株WZ10促生能力进行测定;通过室内防病试验和生理生化测定分析菌株WZ10的防病效果;并利用透明圈法对... 为明确枯草芽胞杆菌WZ10的生物学功能及对马铃薯枯萎病的室内防治效果。本研究利用Salkowski’s比色法和分光光度法、室内盆栽试验对菌株WZ10促生能力进行测定;通过室内防病试验和生理生化测定分析菌株WZ10的防病效果;并利用透明圈法对其解磷、解钾能力进行测定。结果表明,枯草芽胞杆菌WZ10具有产IAA和解无机磷能力,并对马铃薯植株的生长有明显的促生作用,与对照植株相比,接种菌株WZ10后马铃薯植株的株高、根长和鲜重均显著增加,分别提高了14.34%、19.75%和77.07%,马铃薯植株的PPO、POD、SOD酶活性和可溶性蛋白含量显著升高。同时,菌株WZ10对马铃薯枯萎病的室内防治效果达80.65%,显著高于30%甲霜·噁霉灵水剂处理。菌株WZ10具有较强的促生能力,且对马铃薯枯萎病具有显著的防治效果,该研究可为后续菌株WZ10功能开发和枯萎病病害防治奠定基础。 展开更多
关键词 草芽杆菌 马铃薯萎病 促生 防治效果
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