豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌组成及产蛋白酶能力的影响

本试验通过对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌株进行分离和培养,并测定其产蛋白酶能力,来评价豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道好氧菌组成及产蛋白酶能力的影响。首先配制以脱脂鱼粉为主要蛋白质源的对照组(D1组)饲料,饲料中鱼粉添加量为55%;然后用豆粕替代对照组饲料中不同比例的鱼粉,配制2种试验组饲料,饲料中豆粕添加量分别为35%(D2组)和75%(D3组)。上述3种试验饲料分别投喂平均体重为(10.50±0.84)g的乌鳢幼鱼8周,每种试验饲料投喂3个重复,每个重复28尾鱼,试验在室内养殖系统中进行。结果显示:随着豆粕替代鱼粉比例的增加,乌鳢的终末体重、增重率和特定生长率显著降低(P<0.05)。从3组乌鳢肠道内共分离出21株产蛋白酶好氧菌,其中,D1组为16株,D2组为19株,D3组为20株。以水解圈直径与菌株直径之比值(R/r值)表示产蛋白酶能力,豆粕替代鱼粉显著降低了菌株P1004和P1018的R/r值(P<0.05),但显著增加了菌株P1009和P1012的R/r值(P<0.05)。随着豆粕替代鱼粉比例的增加,菌株P1018的R/r值显著下降(P<0.05)。对产蛋白酶能力最大的菌株P1009进行生理生化特征鉴定和16S r DNA序列分析,得出菌株P1009为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。本试验结果表明,乌鳢肠道内存在着丰富的产蛋白酶好氧菌,豆粕替代鱼粉对乌鳢肠道内产蛋白酶好氧菌数量和产蛋白酶能力产生了一定影响,乌鳢肠道内产蛋白酶能力最强的菌株P1009是铜绿假单胞菌,可以考虑将其作为益生菌开发的潜在菌种。

6株芽孢杆菌的分离鉴定和生物学特性

为了筛选适合渔用微生态制剂的益生菌,从池塘边发酵鱼肉汤中分离芽孢杆菌,结合形态学、生理生化特征、16S rRNA及gyrA、gyrB、rpoB和purH基因序列比对分析对其进行鉴定,并对其产淀粉酶、产蛋白酶能力及生长情况进行研究。结果表明,分离筛选的6株芽孢杆菌分属于4个种,1株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),1株为阿氏芽孢杆菌(B.aryabhattai),2株为贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis),2株为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens),6株菌在LB液体培养基中生长良好,均具有产蛋白酶能力,其中4株具有产淀粉酶能力。