高效液相色谱和质谱法对产酸克雷伯氏菌SG-11生物合成吲哚-3-乙酸代谢途径的研究

产酸克雷伯氏菌 (Klebsiellaoxytoca)SG 1 1是从水稻根面分离的植物根际促生细菌 ,具有生物固氮能力。利用HPLC和GC MS对该菌的代谢产物进行了定性定量分析 ,结果表明该菌能产生较高浓度的吲哚 3 乙酸(IAA) ;对其代谢途径的研究结果证明 ,该菌以吲哚 3 丙酮酸代谢途径合成IAA。

产酸克雷伯氏菌SG-11生物合成吲哚-3-乙酸的检测

产酸克雷伯氏菌SG-11是从水稻根面分离的植物根际促生细菌,能有效的促进水稻植物的生长和发育,为探索其促生机理,通过色谱 -质谱联用、薄层色谱与高效液相色谱的定性和定量分析,证明了在产酸克雷伯氏菌SG-11的代谢产物中存在着较高浓度的植物生长素吲哚 -3-乙酸。

培养条件对产酸克雷伯氏菌SG-11生物合成IAA影响的研究

研究了产酸克雷伯氏菌 (Klebisellaoxytoca)SG 11菌株的培养条件对其IAA生物合成的影响 .结果表明 :该菌生长到稳定期时才开始大量产生IAA ;在基本培养基中 ,该菌对不同氮源的利用有别 ,在以 (NH4 ) 2 SO4为氮源时 ,IAA的产量最高 ,作为碳源的葡萄糖当加入浓度为 6g/L时 ,游离态IAA的产量最高 ;在LB培养基中 ,当p(O2 )由正常值降低 1/ 4时 ,IAA的产生量陡然下降 ,灭菌前 ,把LB培养基的pH调到 7.2时 ,接菌培养48h后pH降为 6 .5 ,此pH下 ,该菌能产生较高浓度的IAA .图 5参

一例红腹锦鸡产酸克雷伯氏菌病的诊断与防控

红腹锦鸡(Chrysolophus pictus),隶属于鸟纲鸡形目雉科,为我国特有的珍稀雉类,是国家Ⅱ级重点保护动物。以秦岭为中心,分布于陕西、青海东部、甘肃、四川南部,贵州、广西北部、湖北、湖南西部。红腹锦鸡凭借其重要的社会和科研价值,逐渐成为野生动物研究领域的重点研究物种[1-2]主要研究内容包括种群数量分布、栖息地选择与利用、分子遗传等方面[3]。

产酸克雷伯氏菌的吸附固定及其产氢研究

利用曲霉(Aspergillus sp.XF101)所形成的菌丝球吸附产氢细菌产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca HP1),当曲霉培养时间为50 h,菌丝球直径为1.3～1.8 mm,菌悬液pH值为5.0～6.0,吸附温度为30℃,吸附时间为1.5 h时,可获得最佳吸附效果,吸附率可达99%以上.利用菌丝球固定产氢菌可进行连续产氢,其最大产氢速率为18 mmol/L·h,平均产氢速率为1.7 mmol/L·h,持续产氢时间为15 d.

萝卜根内生产酸克雷伯克氏菌的分离鉴定及其促生长作用研究

采用组织分离法,从萝卜根部中分离到的菌株YN201309.经形态,生理生化及16S rRNA基因序列鉴定为产酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）.平板试验表明,该菌株具有固氮功能;盆栽试验和田间试验结果表明,产酸克雷伯氏菌YN201309能明显促进白菜、油菜和玉米的生长.盆栽试验40 d后,浸种处理的白菜平均株高提高19.61％～33.00％,浇灌处理的玉米平均株高提高12.07％～20.74％.田间试验60 d后,以浓度108CFU/mL拌种油菜的株高增加了14.41％,根长增加了7.28％,以浓度108CFU/mL浇灌油菜的株高增加了8.34％,根长增加了4.28％.

产酸克雷伯氏菌降解氯氰菊酯农药发酵条件的优化

采用Plackett-Burman法考察了环境因素对产酸克雷伯氏菌降解氯氰菊酯的影响,并筛选出影响其降解效果的主要因素,即pH、温度和接种量。在此基础上,利用Box-Behnken实验设计和响应面分析法对其降解条件进行了优化。验证结果显示,当培养基中氯氰菊酯含量为200mg/L、pH为6.8、接种量(种子液OD6001.000)为5.8%(v/v)、250mL锥形瓶装液量为30mL、33℃培养120h时,产酸克雷伯氏菌对氯氰菊酯的降解率达到84.67%。

时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的产酸克雷伯氏菌

从皮肤点状出血的日本鳗鲡中分离出产酸克雷伯氏菌菌株B12,经福尔马林灭活后,注射新西兰兔,制备免疫抗血清,G蛋白亲和层析纯化得到抗体(IgG),以固定于微孔板的IgG作为捕获抗体,Eu^(3+)螯合物标记的IgG作为检测抗体,建立了产酸克雷伯氏菌的夹心型时间分辨荧光免疫检测法(TRFIA),并研究了抗体浓度、免疫时间及离解时间对检测的影响。本方法检出限为5.0×10~3 cfu/mL;线性范围5.0×10~3～1.0×10~7 cfu/mL,相关系数达0.99以上。交叉反应表明其具有较高的特异性,板内和板间相对标准偏差分别为5.64%和2.27%。将本方法标准化后,检测了29份人工感染的日本鳗鲡样品,包括鳃、肾、肠、肝和肌肉组织,结果满意。

产酸克雷伯氏菌耐氧产氢及其可溶性氢酶耐氧特性研究

目的:考察产酸克雷伯氏菌(Klebsielal oxytoca HP1)耐氧产氢特性及其可溶性氢酶的氧耐受特性。方法:研究K.oxytoca HP1在不同气相氧浓度条件下利用葡萄糖(1%,m/v)、丙酮酸钠(0.5%,m/v)及甲酸(0.1%,v/v)等底物产氢活性的以及K.oxyto-ca HP1可溶性氢酶在空气及氧饱和溶液中催化产氢活性。结果:K.oxytoca HP1在葡萄糖(1%,m/v)底物中具有较高耐氧产氢活性,6h内在气相氧浓度为5%、10%和21%条件下的氢产量分别为厌氧条件下的20.9%、13.7%、8.3%;K.oxytoca HP1可溶性氢酶在空气中孵育12h后,其活性残余85.4%,在氧饱和溶液中活性损失一半约3h。结论:试验结果提示K.oxytoca HP1具有耐氧产氢特性,其可溶性氢酶具有较高氧耐受性,在氢能源的开发中具有潜在的应用前景。

呼吸机传播产酸克雷伯氏菌败血症一例

呼吸机传播产酸克雷伯氏菌败血症一例浙江医科大学附属第一医院细菌室孔海深，沈乃仙，朱建国浙江医科大学附属第一医院监护室马文江宁波市北仑宗瑞医院叶绪富１病例摘要患者，男性，６０岁，浙江海宁中丝三厂干部。因左上腹持续性腹痛伴呕吐２天于１９９３年３月１５日急...

一起孔雀产酸克雷伯氏菌病的诊疗

从病死的孔雀分离到一种革兰氏阴性的粗短杆菌，经细菌学、培养特性和血清学鉴定为产酸克雷伯氏菌。该菌在M．C．K和SS培养基上生长良好，能在pH6～11范围内生长，最适生长为pH6～8，在无盐至2％NaCl培养基上生长良好，6％NaCl抑制其生长；最适生长温度为37℃；可致死小白鼠。根据药敏试验，对发病孔雀进行卡那霉素与庆大霉素联合治疗，结果全部治愈。

孔雀产酸克雷伯氏菌的分离与鉴定

从病死的孔雀分离到一种革兰氏阴性的粗短杆菌。经细菌学、培养特性和血清学鉴定为产酸克雷伯氏菌。该菌在M．C．K和SS培养基上生长良好,能在pH6-11范围内生长,最适生长为pH 6- 8,在无盐至2％NaCl培养基上生长良好,6％NaCl抑制其生长;最适生长温度为37℃;可致死小白鼠。对卡那霉素庆大霉素等药物高敏,而对青霉素、四环素等药物具有耐药性。

Cr2O3-TiO2吸附产酸克雷伯氏菌HP1氢酶的可见光光解水产氢研究

以钛酸四丁酯和重铬酸铵为原料,采用溶胶凝胶法制备了Cr2O3-TiO2,利用浸渍吸附法将产酸克雷伯氏菌氢酶与Cr2O3-TiO2偶联。研究了搅拌速率、pH、温度等条件对Cr2O3-TiO2吸附氢酶的影响。结果表明,Cr2O3-TiO2在270、440和600 nm附近有明显的吸收峰。Cr2O3-TiO2吸附氢酶的最佳条件为温度37℃,pH7.0,搅拌速率100 r/min,该条件下氢酶的吸附率达到80%以上。在氢酶负载量为10%(W/W)、60 W白炽灯光源光照度条件下,Cr2O3-TiO2-氢酶催化光解水产氢速率为10μL/min.g,是Cr2O3-TiO2催化光解水产氢速率(3μL/min.g)的3.33倍,反应体系中加入终浓度为0.05 mmol/L的甲基紫晶(methylviologen,MV)及0.05 mmol/L Na2S2O4可显著提高Cr2O3-TiO2-氢酶光催化产氢速率,达110μL/min.g。在相同条件下,P25型TiO2仅有微量氢产生。结果表明,Cr2O3-TiO2能利用可见光光解水产氢,氢酶与Cr2O3-TiO2偶联可显著提高可见光光解水产氢活性。

肠道细菌弗氏柠檬酸杆菌和产酸克雷伯氏菌对斑翅果蝇生长发育和物质代谢的影响

【目的】明确弗氏柠檬酸杆菌Citrobacter freundi和产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca两种肠道共生细菌对斑翅果蝇Drosophila suzukii生长发育和物质代谢的影响。【方法】以正常饲养条件下的斑翅果蝇、构建的斑翅果蝇无菌品系以及弗氏柠檬酸杆菌和产酸克雷伯氏菌单一共生菌感染的斑翅果蝇品系为材料,检测不同品系间斑翅果蝇的卵孵化率、3龄幼虫体重和化蛹率;测定不同斑翅果蝇品系3龄幼虫体内蛋白质、氨基酸、糖原和游离脂肪酸等代谢物的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活力。【结果】正常饲养条件下的斑翅果蝇卵孵化率、3龄幼虫体重、化蛹率及3龄幼虫体内蛋白质的含量均高于其他斑翅果蝇品系,且无菌品系中的最低。弗氏柠檬酸杆菌和产酸克雷伯氏菌感染的斑翅果蝇品系3龄幼虫中的氨基酸和糖原含量均低于斑翅果蝇无菌品系和正常品系。弗氏柠檬酸杆菌感染斑翅果蝇品系3龄幼虫体内游离脂肪酸的含量较其他品系的也降到最低。弗氏柠檬酸杆菌和产酸克雷伯氏菌感染斑翅果蝇品系3龄幼虫体内POD活力显著高于无菌品系和正常品系,而CAT活力显著低于无菌品系。【结论】斑翅果蝇肠道中无肠道共生细菌时生长发育迟缓,在食物中分别添加弗氏柠檬酸杆菌和产酸克雷伯氏菌后可一定程度上促进斑翅果蝇的发育,这与添加肠道共生菌后斑翅果蝇体内代谢物的变化密切相关。

产酸克雷伯氏菌基因组文库的构建及鉴定

为了给基因功能研究提供基础,以pWEB^(TM)质粒构建产酸克雷伯氏菌KO108基因组文库,克隆数目为1 329个。通过EcoRⅠ酶切分析随机挑取的20个文库克隆的重组质粒,结果显示所有质粒均有8.2kb载体条带同时含有外源DNA,且外源DNA的带型并不相同,这表明所构建的KO108基因组文库中插入的外源DNA随机性较好。分析外源DNA电泳条带的大小,结果显示克隆的外源DNA片段最小约为25kb,最大约为50kb,平均大小估算为40kb,文库克隆容量约52Mb,证明该基因组文库包含基因组任意一个基因的概率为99.8%,是KO108基因组覆盖率的5倍。该文库的构建为产酸克雷伯氏菌功能基因克隆和比较基因组学研究奠定了基础。

一株产酸克雷伯氏菌的分离鉴定及其药敏检测

采集崇左市江门林场10年桉树林地土壤并从中分离自生固氮菌,通过常规细菌鉴定、16SrRNA基因可变区（V1～V3区）序列测序及Biolog自动微生物鉴定系统确定其种属,并利用药敏纸片琼脂扩散法（K-B法）测定其耐药性,结果表明：从所采土壤中分离得到1株自生固氮菌KO108,提交到Genbank获得登陆号为KM460926.1,与GenBank中产酸克雷伯氏菌基因序列相似性达到99%以上;Biolog自动微生物鉴定系统相似值分别为0.509和0.610,大于0.5,因此鉴定该菌株为革兰氏阴性产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca,属于肠杆菌科Enterbateriaceae克雷伯氏菌属Klebsiella;药敏实验结果显示该菌对呋喃妥因、链霉素、头孢曲松、卡那霉素、氧氟沙星、强力霉素、环丙沙星、氯霉素敏感;对复方新诺明中度敏感;对多粘菌素、青霉素G、四环素、红霉素耐药。本实验所获得菌株可作为基因改造的工程菌,为林业生产中的固氮微生物的改造和利用提供了实验依据。

产酸克雷伯氏菌氢酶分离提纯与特性的初步研究

采用硫酸铵沉淀和柱层析(DEAE-Sepharose F.F.,Sephacryl S-200,TSK-DEAE)初步分离纯化了产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HP1可溶性氢酶,研究了温度、pH值、电子载体等对氢酶催化放氢活性的影响.研究表明,可溶性氢酶催化放氢的最适温度为30℃,催化放氢的最适pH值为7.5,甲基紫晶(MV)是氢酶催化放氢的最适人工电子载体,氧对氢酶催化活性有较大的抑制作用.

固定产酸克雷伯氏菌产氢的研究

为了保持菌体固有的生物活性,使其重复使用,将产酸克雷伯氏菌(HP1,Klebsiella oxytoca)包埋在凝胶中,采用注滴法制备海藻酸钙凝胶球来固定产酸克雷伯氏菌HP1,达到截留菌体产氢的目的.结果表明,选择培养6～8 h的菌体作为海藻酸钙凝胶球包埋的菌体,Tris做培养基中的缓冲盐,当体积质量为5 g/L时,最佳产氢初始pH值为9.0,温度为37℃,采用柱反应器连续产氢7 d,平均产氢速率为3.38×10-2 moL(/L.h)-1.

肠道细菌产酸克雷伯氏菌及其挥发性物质对斑翅果蝇成虫的引诱效果

【目的】明确肠道细菌产酸克雷伯氏菌Klebsiella oxytoca对斑翅果蝇Drosophila suzukii的引诱效果,并鉴定和验证该菌挥发性物质对斑翅果蝇成虫的引诱效果。【方法】在无寄主植物和有寄主植物(巨蜂葡萄)的条件下,测定并分析产酸克雷伯氏菌和NB培养基(对照)的上清液对斑翅果蝇成虫的诱集比例以及被引诱成虫的雌雄性比;利用气相色谱质谱联用法(HS-SPME-GC-MS)分别鉴定产酸克雷伯氏菌和NB培养基(对照)上清液中的挥发性物质,并检测浓度较高的4种产酸克雷伯氏菌挥发性物质对斑翅果蝇成虫的引诱效果。【结果】产酸克雷伯氏菌上清液对斑翅果蝇成虫具有引诱作用。其中,无寄主植物条件下,产酸克雷伯氏菌上清液对雄虫引诱作用强于对雌虫,但是在有寄主植物条件下产酸克雷伯氏菌上清液诱集的雌雄成虫数量差异不显著。在产酸克雷伯氏菌上清液中检测到21种挥发性物质,其中浓度较高的为3-甲基-1-丁醇、2-苯乙醇、乙酸异戊酯和吲哚,斑翅果蝇成虫对3-甲基-1-丁醇、2-苯乙醇和吲哚具有趋向性,而对乙酸异戊酯则有趋避性,且3-甲基-1-丁醇可吸引更多的雄虫。【结论】肠道微生物产酸克雷伯氏菌上清液可用于引诱斑翅果蝇成虫,3-甲基-1-丁醇是产酸克雷伯氏菌代谢物中引诱雄虫的重要物质。本研究为斑翅果蝇的防治提供了参考依据。