信鸽产酸克雷伯菌GS-BY-GG的分离鉴定

目的 分离并鉴定鸽源产酸克雷伯菌,探究其生物学特性及致病性。方法 剖检甘肃某信鸽棚发病鸽,观察并采集病变组织,通过观察病菌形态、生化试验、16S rRNA PCR鉴定和序列分析实现对致病菌的分离鉴定,结合组织病理学观察、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行耐药性和致病性研究。结果 病鸽肝、肺、心等多器官出血,肝脏发黄且质地脆,肺脏发生化脓;从病鸽中成功分离到一株革兰氏阴性、短杆状菌株,麦康凯琼脂培养基上为粉红色光滑、湿润、圆形菌落,靛基质试验阳性;16S rRNA扩增序列与MN330093.1同源性达100.00%,表明病鸽感染产酸克雷伯菌,并命名为GS-BY-GG;产酸克雷伯菌GS-BY-GG对青霉素、氨苄西林和呋喃唑酮等10种药物耐药,对氟苯尼考、美罗培南和庆大霉素等5种药物敏感;组织病理学观察可见病鸽多器官出血,肝脏细胞排列不规则、多处可见棕黄色色素沉积,气管黏膜上皮广泛细胞坏死和脱落、黏膜层可见大量炎性细胞浸润;接种SPF雏鸡显示分离菌具有很强的致病性。结论 本研究成功分离了鸽源产酸克雷伯菌GS-BY-GG,研究结果为产酸克雷伯的临床诊断和防治提供数据支撑。

克雷伯菌P3生产灵菌红素的工艺研究

[目的]为了提高灵菌红素产率,对实验室分离保存的一株产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)P3产灵菌红素的发酵条件进行优化。[方法]利用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)分析提取物成分和相对分子质量,通过摇瓶培养对克雷伯菌P3的发酵条件(温度、pH、NaCl浓度、诱导糖)进行研究。[结果]发酵培养产生的红色素经过LC-MS分析证明为灵菌红素,相对分子质量为324.27。确定克雷伯菌P3产灵菌红素的最佳发酵条件为24℃、pH 7.2~8.0、NaCl浓度0.05%~0.10%,2%果糖诱导。[结论]克雷伯菌P3的发酵产物为灵菌红素,优化后灵菌红素的产量为90~130 mg/L。

羊源产酸克雷伯菌的分离鉴定及感染小鼠的转录组学研究

【目的】分离鉴定羊源产酸克雷伯菌,探讨产酸克雷伯菌对动物的致病机制。【方法】采集海南黑山羊肺脏组织样品进行细菌分离培养,通过生化试验及16S rRNA基因检测方法对分离株进行鉴定,并对分离菌进行药敏试验、小鼠致病性试验、RNA-Seq分析和差异表达基因(DEGs)分析。【结果】分离出1株革兰阴性短杆状细菌,胰蛋白胨大豆琼脂培养基上为光滑圆形的乳白色菌落。分离菌能分解葡萄糖、乳糖、蔗糖等几种碳水化合物,靛基质试验阳性。16S rRNA基因检测结果显示,分离株与已公布序列的相似性>99%,鉴定该分离菌为产酸克雷伯菌,命名为KOHN1。药敏试验结果显示,分离菌KOHN1对青霉素、苯唑青霉素、氨苄青霉素、羧苄青霉素、头孢氨苄、麦迪霉素、万古霉素和克林霉素具有耐药性,而对于其余21种抗菌药敏感。分离菌KOHN1攻毒小鼠后,肺脏组织病理学切片观察到小鼠肺部充血、水肿和渗出等急性炎症。DEGs富集分析显示,炎症细胞因子和趋化因子的DEGs在小鼠肺脏中大量表达。【结论】本试验成功分离出1株产酸克雷伯菌,分离株对小鼠致病性较强,免疫反应通路在病菌侵染过程中发挥着重要作用。该研究结果为后续产酸克雷伯菌的临床预防、诊疗及药物研发提供了参考依据。

产酸克雷伯菌核心基因组多位点序列分型方案

目的对产酸克雷伯菌进行核心基因组多位点序列分型(cgMLST)并探索产酸克雷伯菌克隆群(clonal groups,CGs)在国家或地区层面上的遗传多样性。方法chewBBACA被用作GbG(gene-by-gene)分析的生物信息学管道,从整个物种的基因组序列中进行集群识别,以构建和验证产酸克雷伯菌的cgMLST方案。公开获得的21个完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的创建,386个不完整的产酸克雷伯菌基因组序列用于cgMLST方案的验证。结果建立了一个针对3356个核心基因的cgMLST(简称3356-cgMLST)方案。提出的3356-cgMLST方案实现了针对98%以上(400/407)的产酸克雷伯菌分离株基因组序列的分型。根据提出的3356-cgMLST方案,最终纳入分型的400株产酸克雷伯菌基因组序列中共确定了130个CGs。基于3356-cgMLST方案获得的CGs分布情况可以看出产酸克雷伯菌呈现出明显的多国家多地区传播现象。结论本研究为产酸克雷伯菌提供一个公开的3356-cgMLST方案,并揭示产酸克雷伯菌基因组序列呈现高度的遗传多样性,CG26为优势克隆群。

羔羊粪便中产酸克雷伯菌的分离鉴定及药敏试验

研究旨在调查肠道产酸克雷伯菌是否具有致病性,从新疆某规模化羊场无菌采集患病绵羊粪便样品75份进行细菌分离培养、革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因测序,进一步进行小鼠致病试验、药物敏感试验、中药体外抑菌试验。结果显示:经分离培养、革兰氏镜检等共检出10株疑似产酸克雷伯菌,PCR扩增得到符合预期长度的条带。PCR产物测序鉴定结果显示,5株分离株为产酸克雷伯菌。产酸克雷伯菌具有一定致病性,对米诺环素、多西环素、四环素、庆大霉素、头孢哌酮、丁胺卡那、头孢曲松、呋喃唑酮、复方新诺明、氯霉素、环丙沙星、氧氟沙星高度敏感。由甘草、艾叶组成的中药方剂对产酸克雷伯菌具有抑菌作用。研究表明,患病羔羊粪便中存在产酸克雷伯菌且具有一定致病性。

一例红腹锦鸡产酸克雷伯氏菌病的诊断与防控

红腹锦鸡(Chrysolophus pictus),隶属于鸟纲鸡形目雉科,为我国特有的珍稀雉类,是国家Ⅱ级重点保护动物。以秦岭为中心,分布于陕西、青海东部、甘肃、四川南部,贵州、广西北部、湖北、湖南西部。红腹锦鸡凭借其重要的社会和科研价值,逐渐成为野生动物研究领域的重点研究物种[1-2]主要研究内容包括种群数量分布、栖息地选择与利用、分子遗传等方面[3]。

患病黄额闭壳龟中产酸克雷伯菌的分离与鉴定

从患病黄额闭壳龟(Cuora galbinifrons)肝脏中分离到一株致病菌HE01,经人工感染健康巴西龟,可复制与自然发病相同的症状,且从人工感染病龟体内再次分离到相同的病原菌。经Biolog微生物自动鉴定系统的鉴定,以及进一步的16 S rDNA基因序列和系统发育分析都表明,此致病菌为产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)。药物敏感性试验表明,该菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮等10种药物高度敏感。

肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因的研究

目的研究肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpCβ-内酰胺酶的存在形式及其基因类型和转移方式。方法利用CLSI纸片法确认实验和APB纸片增强试验分别检测ESBLs和AmpC酶,基因芯片技术和序列分析测定两种酶基因的类型,接合转移实验了解肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药基因转移方式。结果在对头孢西丁不敏感的72株肺炎克雷伯菌和20株产酸克雷伯菌中,以同时产生ESBLs和AmpC酶为主要形式,分别占54.2%和75.0%;单产ESBLs分别为22.2%和25.0%,肺炎克雷伯菌中单产AmpC酶占12.5%;肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中的AmpC酶基因绝大多数为DHA型(测得DHA-1型基因),ESBLs则以SHV型为主(测得SHV-12型),它们均能通过接合转移方式将其质粒携带的耐药性传递至受体菌。结论同时存在的ESBLs和AmpC酶是肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌耐药的主要原因,耐药基因的转移可导致耐药性的传播扩散。

产酸克雷伯氏菌的吸附固定及其产氢研究

利用曲霉(Aspergillus sp.XF101)所形成的菌丝球吸附产氢细菌产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca HP1),当曲霉培养时间为50 h,菌丝球直径为1.3～1.8 mm,菌悬液pH值为5.0～6.0,吸附温度为30℃,吸附时间为1.5 h时,可获得最佳吸附效果,吸附率可达99%以上.利用菌丝球固定产氢菌可进行连续产氢,其最大产氢速率为18 mmol/L·h,平均产氢速率为1.7 mmol/L·h,持续产氢时间为15 d.

一株苯酚降解产酸克雷伯菌的分离与鉴定(英文)

从活性污泥中分离出一降解苯酚菌株,经16s rRNA基因测序确定属于产酸克雷伯菌。研究了产酸克雷伯菌降解苯酚动力学行为,显示出该菌株具有显著的降解苯酚能力。

萝卜根内生产酸克雷伯克氏菌的分离鉴定及其促生长作用研究

采用组织分离法,从萝卜根部中分离到的菌株YN201309.经形态,生理生化及16S rRNA基因序列鉴定为产酸克雷伯氏菌（Klebsiella oxytoca）.平板试验表明,该菌株具有固氮功能;盆栽试验和田间试验结果表明,产酸克雷伯氏菌YN201309能明显促进白菜、油菜和玉米的生长.盆栽试验40 d后,浸种处理的白菜平均株高提高19.61％～33.00％,浇灌处理的玉米平均株高提高12.07％～20.74％.田间试验60 d后,以浓度108CFU/mL拌种油菜的株高增加了14.41％,根长增加了7.28％,以浓度108CFU/mL浇灌油菜的株高增加了8.34％,根长增加了4.28％.

产IMP-4型金属β-内酰胺酶多药耐药产酸克雷伯菌耐药基因分析

目的了解产IMP-4型获得性金属β-内酰胺酶产酸克雷伯菌耐药基因存在的状况。方法分别采用K-B法、双纸片增效法、Etest法、聚合酶链反应(PCR)及序列分析方法检测其产金属β-内酰胺酶(MBLs)表型及相关的耐药基因。结果多药耐药产酸克雷伯菌除对阿米卡星、多黏菌素B敏感外,对碳青酶烯类、三代、四代头孢菌素、头孢西丁、氟喹诺酮类、头孢哌酮/舒巴坦、复方新诺明、阿莫西林/克拉维酸、替卡西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、利福平等均耐药;金属β-内酰胺酶基因型别为IMP-4型(blaIMP-4)、intⅠ1、qacEΔ1-sul1、aadA1、AmpC(blaADC)、CTX-M-14基因阳性。结论产酸克雷伯菌的多药耐药与整合子相关,且携带有多种耐药基因。

产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素耐药机制的研究

目的分析产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的分子机制。方法收集福建医科大学附属协和医院2011年8月~2012年8月临床分离非重复耐碳青霉烯类抗生素的产酸克雷伯菌菌株5株,检测厄他培南(ETP)、亚胺培南(IPM)及美罗培南(MEM)的最低抑菌浓度(MIC)筛查菌株;采用改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型鉴定、琼脂稀释法测其药敏;聚合酶链反应(PCR)扩增超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、碳青霉烯酶耐药基因;对检出碳青霉烯类基因的产酸克雷伯菌进行接合试验。结果 5株产酸克雷伯菌对17种抗菌药物中耐药率≥80%的有9种,分别为头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、厄他培南、亚胺培南、庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、氨曲南。对替加环素、美罗培南、多黏菌素B和哌拉西林/他唑巴坦的耐药性较低。改良Hodge试验检出4例产碳青霉烯酶。2株携带碳青霉烯类耐药基因(1株仅IMP-4阳性,1株KPC-2和IMP-8同时阳性),3株检出β-内酰胺酶基因。结论福建医科大学附属协和医院产酸克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素耐药机制可能为携带IMP及KPC基因,并且发现了产酸克雷伯菌同时携带两种碳青霉烯类耐药基因的现象。

培养条件对产酸克雷伯氏菌SG-11生物合成IAA影响的研究

研究了产酸克雷伯氏菌 (Klebisellaoxytoca)SG 11菌株的培养条件对其IAA生物合成的影响 .结果表明 :该菌生长到稳定期时才开始大量产生IAA ;在基本培养基中 ,该菌对不同氮源的利用有别 ,在以 (NH4 ) 2 SO4为氮源时 ,IAA的产量最高 ,作为碳源的葡萄糖当加入浓度为 6g/L时 ,游离态IAA的产量最高 ;在LB培养基中 ,当p(O2 )由正常值降低 1/ 4时 ,IAA的产生量陡然下降 ,灭菌前 ,把LB培养基的pH调到 7.2时 ,接菌培养48h后pH降为 6 .5 ,此pH下 ,该菌能产生较高浓度的IAA .图 5参

产酸克雷伯氏菌降解氯氰菊酯农药发酵条件的优化

采用Plackett-Burman法考察了环境因素对产酸克雷伯氏菌降解氯氰菊酯的影响,并筛选出影响其降解效果的主要因素,即pH、温度和接种量。在此基础上,利用Box-Behnken实验设计和响应面分析法对其降解条件进行了优化。验证结果显示,当培养基中氯氰菊酯含量为200mg/L、pH为6.8、接种量(种子液OD6001.000)为5.8%(v/v)、250mL锥形瓶装液量为30mL、33℃培养120h时,产酸克雷伯氏菌对氯氰菊酯的降解率达到84.67%。

产酸克雷伯氏菌引起食物中毒15例报告

1 临床资料 患者15例,均为男性,年龄18～20岁.于2001年8月13日在同一食堂食用了有异味的生炒鸡块,4～24 h内发生了食物中毒性腹泻(就诊前4～10次),并伴有不同程度恶心、呕吐、发热、阵发性下腹部绞痛等症状.

携带wcaG毒力基因ST19产酸克雷伯菌致白血病患者死亡的分析

目的了解1例高黏液表型(HMV)产酸克雷伯菌致白血病患者的死亡原因。方法采用Vitek 2Compact全自动微生物仪进行菌株鉴定及药敏试验,黏液丝试验检测HMV表型,PCR方法及基因测序检测主要的高毒力荚膜血清型基因(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和毒力基因(rmpA、wcaG、allS、kfu、aerobactin、mrkD、fimH、uge、wabG、cf29a),多位点序列分析(MLST)对该菌株进行分子分型。结果白血病患者血液及肺组织分离株均为产酸克雷伯菌,MLST分型为同一型ST19,该菌株对所测药物均敏感,具有高黏液表型,只检测到wcaG毒力基因,其他毒力基因和所测荚膜血清型基因均阴性。结论携带wcaG毒力基因是ST19产酸克雷伯菌致白血病患者死亡的主要原因,应引起临床关注。

产酸克雷伯氏菌SG-11生物合成吲哚-3-乙酸的检测

产酸克雷伯氏菌SG-11是从水稻根面分离的植物根际促生细菌,能有效的促进水稻植物的生长和发育,为探索其促生机理,通过色谱 -质谱联用、薄层色谱与高效液相色谱的定性和定量分析,证明了在产酸克雷伯氏菌SG-11的代谢产物中存在着较高浓度的植物生长素吲哚 -3-乙酸。

产酸克雷伯氏菌耐氧产氢及其可溶性氢酶耐氧特性研究

目的:考察产酸克雷伯氏菌(Klebsielal oxytoca HP1)耐氧产氢特性及其可溶性氢酶的氧耐受特性。方法:研究K.oxytoca HP1在不同气相氧浓度条件下利用葡萄糖(1%,m/v)、丙酮酸钠(0.5%,m/v)及甲酸(0.1%,v/v)等底物产氢活性的以及K.oxyto-ca HP1可溶性氢酶在空气及氧饱和溶液中催化产氢活性。结果:K.oxytoca HP1在葡萄糖(1%,m/v)底物中具有较高耐氧产氢活性,6h内在气相氧浓度为5%、10%和21%条件下的氢产量分别为厌氧条件下的20.9%、13.7%、8.3%;K.oxytoca HP1可溶性氢酶在空气中孵育12h后,其活性残余85.4%,在氧饱和溶液中活性损失一半约3h。结论:试验结果提示K.oxytoca HP1具有耐氧产氢特性,其可溶性氢酶具有较高氧耐受性,在氢能源的开发中具有潜在的应用前景。

产酸克雷伯菌引起肝硬化患者败血症休克1例

肝硬化合并败血症在临床上并不少见，但合并产酸克雷伯菌引起的败血症休克后很快好转的肝硬化病例报道较少。现将我院治愈的产酸克雷伯菌引起的肝硬化患者败血症休克1例报道如下。1病例报告患者，女，39岁。2006年查体发现HBsAg阳性，2011年5月确诊为肝硬化，2012年4月因代偿期乙型肝炎肝硬化人我院，化验血常规未见异常，肝功能属Child-PughA级，淋巴细胞亚群测定提示CD8＋T淋巴细胞、自然杀伤细胞的绝对值及比值均低于正常值，淋巴细胞总数、CD4＋T淋巴细胞绝对值及B淋巴细胞绝对值均正常。