响应面法优化产黄青霉的培养条件

产黄青霉是一种遍布于土壤、腐烂物质等基物中的真菌,可产生酶类、青霉素及有机酸等物质,是工业上用于发酵生产青霉素的重要丝状真菌。产黄青霉的菌落生长和产孢量有一定的特点,在一定程度上受到外界培养条件的影响。为筛选出产黄青霉菌的最佳培养条件,本试验以产黄青霉为研究对象,研究培养温度、光周期、培养基初始pH对产黄青霉培养的影响,以菌落直径和产孢量为指标,通过单因素及响应面试验对产黄青霉的培养条件进行优化处理。结果表明,在温度24.1℃、pH 7.0、光周期24 L处理时产黄青霉菌落直径最大,产孢量也最大,最适合产黄青霉菌生长,并通过试验验证该条件为最佳培养条件。

产黄青霉原生质体制备和再生影响因子分析

产黄青霉原生质体制备过程中 ,菌丝体最佳酶解条件与原生质体释放最适条件不同 ,菌丝体培养基含有 0 .0 5 % L-天冬酰胺时 ,选取培养 48h的菌丝体 ,在裂解酶 (L ysing enzym e)浓度 15 mg/ ml,0 .7mol/ LKCl作为渗透压稳定剂的条件下酶解 ,可获得大量原生质体 ;同时 ,再生培养基中含有 2 5 mm ol/ L Ca2 +离子、上层琼脂浓度 1.1% 。

产黄青霉形态的显微图像分析研究

利用显微图像分析法对产黄青霉的菌丝形态进行了定量研究 ,并统计分析了青霉素发酵过程中菌丝形态的变化规律 ,具体对菌丝总长度、菌丝生长期的菌丝生长单位。

非生长产黄青霉吸附铅的研究

本文报道非生长产黄青霉对溶液中铅离子的吸附。菌体对铅的吸附依赖于溶液的ｐＨ值，在ｐＨ４－５范围内，其饱和吸附量（１１６ｍｇＰｂ＾２＋／ｇ干菌）高于活性炭及文献中所报道蕈状芽孢杆菌，小刺青霉及长木链霉等。当ｐＨ４．５时，产黄青霉对铅的选择性高于Ｚｎ＾２＋，Ｃｄ＾２＋，Ｃｕ＾２＋和Ａｓ＾３＋的存在对吸附无明显影响，Ｃｄ＾２＋的存在的使铅的吸附量有所提高，而Ｚｎ＾２＋的存在则使之降低。在小试规模下。

利用根瘤农杆菌LBA4404 Ti质粒介导高效转化产黄青霉及克隆vgb基因

通过根瘤农杆菌 (Agrobacterium tumefaciens) L BA4 4 0 4中 Ti-质粒的介导将含有透明颤菌血红蛋白 (Vitreoscilla Hemoglobin,VHb)基因 vgb和博来霉素 (bleomycin)抗性基因转移到产黄青霉 (Penicilliumchrysogenum)中 ;利用根瘤农杆菌介导转化产黄青霉孢子时需要有乙酰丁香酮诱导 ;转化菌丝体时乙酰丁香酮不是必要的 ,但一定浓度的乙酰丁香酮可提高转化率 ,与原生质体转化法相比可提高转化率 10倍左右。

产黄青霉发酵过程中菌体量测定的研究

对产黄青霉(Penicillium chrysogenum)发酵过程中菌丝量的测定方法进行研究,提出了一种新的基于超声波破碎细胞以及二苯胺显色法进行菌体量测定的方法,此方法与常规的测定菌体干重的方法比较,能很好地反映发酵过程中菌体量的变化情况。该方法重现性好、准确度和精密度较高,用于含固形物的发酵液中菌丝量的测定,得到了满意的结果。

产黄青霉、扣囊复膜孢酵母替代部分大曲提高食醋原料利用率

从分离自山西老陈醋大曲中高产糖化酶和纤维素酶的菌株中筛选优良菌株,制成麸曲与大曲共发酵,采用混料回归设计确定最佳原料配比并检测食醋质量。结果表明,以菌株AS3.4309(M0)为对照菌株,筛选出产黄青霉(M4)和扣囊复膜孢酵母(M8),大曲与麸曲的最佳总添加量为主料的40%,其中大曲25.10%,M8麸曲6.81%,M4麸曲8.09%,安琪酵母0.06%,料水比1∶3(g∶m L),此时酒精度为11.2%vol。制成麸曲与大曲共发酵后酒精度显著高于菌株M0(P<0.05),与大曲单独发酵相比,麸曲M4+M8+大曲共酵提高原料利用率提高了31.81%,减少大曲用量37.25%,且食醋各项质量指标均符合国家标准。

一种快速提取丝状真菌产黄青霉DNA的方法

介绍一种快速有效的提取丝状真菌产黄青霉染色体DNA的方法。该方法以100mm o l/L T ris、100mm o l/L N aC l、50mm o l/L EDTA-N a2和2%SDS(pH 9.0)为提取液,经石英砂研磨破壁,获得了较高质量的染色体DNA,该法较酶解法和氯化苄法廉价、快速、安全,且不影响其后续的分子生物学操作。

产黄青霉vgb转化菌PTH-1嗜盐新特性研究

利用 Ca Cl2 /PEG介导的原生质体转化法获得一株有产抗能力的产黄青霉 vgb转化菌 PTH- 1。该转化菌具有嗜盐性 ,必须在含有高浓度 KCl的培养基中才能生长。在该盐条件下转化菌 PTH - 1对博莱霉素抗性稳定 ,具有摄氧率高、易自溶、细胞壁脆弱等特性。在高盐发酵试验中 ,PTH - 1产抗比对照株提高 14%。

利用产黄青霉培养液的上清液生物合成纳米银影响因素的研究

[目的]对利用产黄青霉培养液的上清液生物合成纳米银的影响因素进行研究。[方法]利用紫外-可见光谱和投射电镜研究硝酸银起始浓度、pH值、光照和微波辐照等条件对合成反应速率及合成纳米银粒径的影响。[结果]硝酸银的最佳起始浓度为2 mmol/L;随着反应体系pH值的升高,反应速率随之加快,合成纳米银粒子的粒径变小;光照和微波辐照均能有效促进纳米银的合成。[结论]该研究为实现纳米银的可控合成提供了试验基础。

产黄青霉菌株39B分离培养及其白藜芦醇代谢积累条件研究

在虎杖组织培养过程中获得1株产黄青霉菌株(Penicillum chrysogenum,39B)菌株,其发酵液经TLC和HPLC检测含白藜芦醇,对其培养条件及白藜芦醇积累特性进行了研究,通过正交优化试验得到该菌最佳培养条件:20g/L葡萄糖,2g/L硝酸铵,pH值7.0,28℃,100r/min。3mmol/L苯丙氨酸、Mg2+、Zn2+能促进其生长和白藜芦醇的积累,其白藜芦醇含量达8.6617μg/100mL。

产黄青霉谷胱甘肽S-转移酶基因PcgstA的克隆与鉴定(英文)

从青霉素工业生产菌产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)中首次克隆了一个谷胱甘肽S-转移酶(GST)基因,定名为PcgstA.该基因的开放阅读框长840bp,含有两个内含子,编码一个238氨基酸残基的蛋白质.其推断的氨基酸序列与一些已经鉴定的丝状真菌GST具有50%左右的序列一致性.PcgstA的完整编码区经RT-PCR扩增、验证,插入原核表达载体pET11a,转化大肠杆菌BL21(DE3)-RP菌株,表达得到重组PcGSTA蛋白.酶活测定证实,重组PcGSTA具有GST活性,其对底物CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene)的比活为(0.159±0.031)μmol/(min·mg).利用TaqMan探针法,对PcgstA的表达情况进行了比较.结果表明,在添加了侧链前体苯乙酸的青霉素生产培养基中,PcgstA的表达水平和在不含苯乙酸培养基中的表达相比明显下调,显示了该基因与苯乙酸代谢的关系.

工业用产黄青霉菌基因组的RAPD多态性研究

为寻找高产菌株的分子标记,尝试利用RAPD(random amplified polymorphic DNA)技术,对青霉素生产菌株进行基因组多态性分析,分别以9株不同产量的产黄青霉菌基因组DNA为模版,筛选引物23条,并且对一条高产菌株特异条带进行了克隆与杂交验证.

基于NCBI核酸数据库资源的产黄青霉微卫星序列的筛选

利用生物信息学方法在产黄青霉基因组中筛选微卫星序列,并对其基因组中微卫星数量和丰度进行了研究.利用SSRHunter1.3软件在长度为30 090 464 bp的产黄青霉基因组中共找到163个微卫星序列.其中以两碱基重复类型数目最多,为133个,占重复序列总数目的 81.60%;其次是三碱基重复为29个,占17.79%;最后是四碱基1个,占0.61%.在两碱基重复序列中,AT(44.79%)重复类别最多,其次是AG(23.92%).在三碱基重复序列中,共发现9种重复类别,其中以AAG和ACT重复类型最多,为6个(3.68%),其次是ACC(2.45%),最少的是AGC(0.61%).四碱基重复中,只有1种重复类别,为ATGT(0.61%).同时选取二碱基的重复次数在7以上和三碱基的重复次数在6以上的微卫星序列,利用Primer Premier 5.0软件设计了引物,共得到30对引物.本研究不仅为后续产黄青霉微卫星标记的筛选奠定了基础,也丰富了其基因组学资源,对产黄青霉的种群遗传结构分析、分子标记选育和遗传多样性有重要意义.

产黄青霉对根皮素微生物转化研究

通过形态学观察并结合ITS序列鉴定的方法对真菌菌株产黄青霉AS3.521进行确认,并利用其对根皮素进行转化研究。在28℃、160 r/min与根皮素共同培养3天后,利用水饱和正丁醇溶液萃取发酵液获得转化产物,通过多种柱色谱对转化产物进行分离,运用核磁共振波谱技术(1H-NMR、13C-NMR)结合文献数据鉴定转化产物的结构。结果显示菌株产黄青霉AS3.521可以对根皮素进行转化,且获得了3个小分子转化产物,结构分别为对羟基苯丙酸、对羟基苯甲酸、茴香酸,并推测了转化路径,为化合物合成提供了依据。

产黄青霉抗真菌几丁质酶的纯化及特性分析

为实现抗真菌性能的耐热新型几丁质酶在食品防腐及生物防治方面的应用,从产黄青霉Xch23中分离纯化几丁质酶(Chi-Pc76)并研究其应用特性。通过硫酸铵沉淀、DEAE-Cellulose A52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析纯化得到均一的Chi-Pc76。最终得到Chi-Pc76纯化倍数17.1倍,回收率21.6%,比活力为584.8 U/mg。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得Chi-Pc76分子质量61 kDa。纯化后的Chi-Pc76最佳反应条件为pH 6.0、温度55℃。Chi-Pc76在宽泛的pH 4.0~10.0之间稳定性强,其显著的热稳定性可达到70℃。ChiPc76对底物胶体几丁质具有高的底物特异性,对乙二醇几丁质、α-几丁质、β-几丁质有中等活性,而对其他受试底物无活性或痕量活性。以胶体几丁质为底物K_(m)和V_(max)值分别为0.25 mg/mL和20μmol/(min·mg)。金属离子Ca^(2+)、Ba^(2+)、K^(+)、Na^(+)对酶有明显激活作用;十二烷基硫酸钠、吐温80、苯甲基磺酰氟和尿素对酶活力基本无影响,但Mn^(2+)、Co^(2+)、Fe^(2+)、Ag+、Cu^(2+)、Zn^(2+)、Pb^(2+)、Hg^(2+)和β-巯基乙醇、二硫苏糖醇均对酶活力有抑制作用。Chi-Pc76对黑曲霉、黄曲霉、尖孢镰刀菌和橘青霉均有显著的抗真菌活性,对比文献为产黄青霉抗真菌几丁质酶。鉴于Chi-Pc76纯化简便、热稳定性好、宽广的pH值稳定性、高效降解几丁质和抗真菌等特点,产黄青霉Xch23几丁质酶在几丁质废料综合利用、生物转化药理活性产品、食品保鲜以及植物病原性真菌和昆虫幼虫生物防治等方面具有潜在价值。

产黄青霉原生质体融合及融合子初步分析

目的以青霉素工业生产菌株产黄青霉为研究对象,对丝状真菌原生质体融合及其融合子进行了初步的研究。方法通过紫外线诱变和基因转化筛选出具有不同遗传标记的2株亲本菌株,对供体亲本菌株原生质体热灭活后进行原生质体融合,并对融合子进行了分离及传代分离。结果在选择性培养基上筛选到5株融合子,融合率为2.97×10-5,融合子分离和传代分离后产生亲本菌株分离子和异核体。结论 5株融合子均为异核体,在自然条件下融合子很难形成杂合二倍体和重组子。

利用产黄青霉制备高活力蔗糖转化酶

利用产黄青霉发酵法制备具蔗糖转化酶活力的生物催化剂，制备工艺简单，无需特殊提纯手段。该酶制剂经研究表明：以10％蔗糖为底物，于37℃，pH7．0±0．5条件下，经6h连续转化可将10％蔗糖溶液完全转化为转化糖浆，其转化率达到100％。

产黄青霉发酵鸭肉制品食用品质、微观结构及物理化学特性变化

为探讨产黄青霉(Penicillium chrysogenum)发酵鸭肉制品的食用品质、微观结构及物理化学特性变化,将产黄青霉接入高温灭菌后的鸭肉中,(27±1)℃下前发酵7 d、30℃下后发酵14 d得到发酵鸭肉制品。采用质构仪、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、拉曼光谱仪、低场核磁共振仪和气相色谱(gas chromatography,GC)-质谱(mass spectrometry,MS)联用仪分别分析产黄青霉发酵鸭肉制品的质地、微观结构、蛋白质构象、水分分布和挥发性物质的变化情况。结果表明,产黄青霉发酵鸭肉的硬度和弹性明显降低,黏性明显增加。扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察到经产黄青霉发酵的鸭肉无完整肌原纤维,呈无序排列并黏连的颗粒状。拉曼光谱表明,产黄青霉发酵鸭肉蛋白质二级结构中α-螺旋相对含量减少,β-折叠相对含量增加,β-转角和无规卷曲相对含量变化不明显;色氨酸、酪氨酸残基微环境疏水性显著增强(P<0.05)。低场核磁共振研究发现结合水和不易流动水相对含量显著降低(P<0.05)。GC-MS分析表明未发酵鸭肉制品挥发性物质为29种,而产黄青霉发酵鸭肉制品挥发性物质为48种,其中酮类、酯类和酸类是新产生的挥发性物质。产黄青霉可用于生产特定风味和质地的发酵肉制品,为开发可安全食用的发酵鸭肉制品提供了一种新思路。

透明颤菌血红蛋白基因在产黄青霉中的克隆与表达

将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆至质粒载体pMK4中,构建成表达载体pMK4-LV,并将表达载体pMK4-LV转化青霉素生产菌株———产黄青霉的原生质体,获得转化子。经发酵实验表明,vgb的表达可以使产黄青霉的生物量提高9.76%,青霉素的产量提高9.68%。