血清亮氨酸氨基肽酶和γ-谷氨酰转肽酶在酒精性肝病诊断中的应用

目的探讨亮氨酸氨基肽酶(LAP)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)在酒精性肝病患者诊断和治疗中的意义。方法使用全自动生化分析仪对382例不同临床分型的酒精性肝病患者和100例正常人血清LAP和GGT进行检测,对检测结果进行统计学分析。结果酒精性肝病患者血清LAP和GGT均有不同程度的增高,以酒精性肝炎组增高最为显著,酒精性肝炎组LAP和GGT的曲线下面积(AUC)分别为0.874和0.715,阳性率分别为87.0%和82.9%。结论血清LAP和GGT对诊断酒精性肝炎具有较高应用价值,二者呈正相关。

猪后腿肉中亮氨酰氨肽酶的纯化与酶学特性研究

通过匀浆、硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶过滤和Phenyl-Sepharose HP疏水层析,从猪后腿肉中分离纯化了一种亮氨酰氨肽酶,并对其部分生化特性进行了研究。结果表明:亮氨酰氨肽酶的得率为12.14%,纯化了77.62倍;亮氨酰氨肽酶的最适温度为40℃左右,最适pH为7.0左右,Mg2+对酶活性有激活作用,Zn2+、Cu2+、Co2+、EDTA和EGTA对酶活性有抑制作用;Ca2+、Fe2+和Mn2+对亮氨酰氨肽酶活性的影响取决于离子浓度,浓度为0.5 mmol·L-1时对酶具有激活作用,而浓度为1.0 mmol·L-1时则表现为抑制作用。

血清亮氨酸氨肽酶在肝胆疾病与肿瘤诊断中意义

目的 探讨血清亮氨酸氨肽酶 (LAP)在肝胆疾病与肿瘤诊断中的应用价值。方法 对 82 2例临床标本采用亮氨酸对硝基酚胺法测定LAP活力。结果 肝胆系统疾病患者血清LAP活力为 64 .3± 3 9.2u/L ,与胃肠系统、血液、脑部和泌尿系统疾病均存在显著性差异。肿瘤患者LAP活力与其它疾病LAP活力存在着显著性差异 (P <0 .0 0 1) ;肝胆胰肿瘤组为 66.1± 3 5 .66u/L ,明显高于胃肠血液肿瘤组 3 5 .5 5± 2 4.3 3u/L ,P <0 .0 2有显著性差异。结论 血清亮氨酸氨肽酶与胆汁郁积的病理有关。血清亮氨酸氨肽酶活力可作为诊断肝胆系统疾病、肿瘤的一个新的辅助指标。

亮氨酸氨肽酶的种类及临床应用

亮氨酸氨肽酶是一大类能水解以亮氨酸残基为氨基末端的蛋白质或多肽的酶类,在肝胆疾病及正常妊娠时,其血清浓度升高;当肾小管刷状缘受损时尿液中排泄增加;另外它还可能参与血压调节、主要组织相容性复合物(MHC)抗原递呈等,对亮氨酸氨肽酶及其抑制剂的深入研究对临床有实际应用价值。

多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶抗原表位的生物信息学预测

目的分析鉴定多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶(Echinococcus multilocularis leucyl aminopeptidase,EmLAP)蛋白质二级结构并预测其优势抗原表位。方法从GenBank中获得多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶氨基酸序列,并通过生物信息学软件SOPMA分析多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶的蛋白质二级结构特征。进一步通过生物信息学软件IEDB、Syfpeithi、Bcepred、ABCpred预测分析多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶潜在的T细胞及B细胞抗原表位。结果分析出多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶的蛋白质二级结构中α螺旋占比为45.42%、β折叠占比为16.57%、β转角占比为8.58%、无规则卷曲占比为29.43%。预测出亮氨酰氨肽酶具有9个T细胞潜在优势抗原表位,分别为L65-73、L75-84、L174-186、L233-240、L301-308、L333-343、L392-400、L445-454、L482-490;预测出多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶具有20个B细胞潜在优势抗原表位,分别为L13-22、L39-47、L75-84、L98-110、L146-154、L174-186、L183-191、L233-240、L247-254、L281-288、L295-306、L319-328、L330-337、L339-347、L392-400、L397-410、L421-428、L464-473、L493-504、L504-512。结论通过使用生物信息学软件预测出多房棘球绦虫亮氨酰氨肽酶存在有潜在的优势抗原表位,分别为9个T细胞抗原表位和20个B细胞抗原表位,为后续多房棘球绦虫相关亮氨酰氨肽酶的抗原性研究和多表位疫苗的研制奠定了基础。

血清前白蛋白和血清亮氨酸氨肽酶检测对肝病诊断的意义

血清前白蛋白（PA）是由肝脏合成的一种糖蛋白，由4个相同的亚基组成相对分予最为54kD的蛋白质，其半寿期很短，仅约12小时［1］。是反映肝脏蛋白质合成的敏感指标，对肝脏疾病的早期诊断有重要的临床意义。血清亮氮酸氨肽酶（LAP）是一种蛋白酶．肝、胆内含量很丰富，当这些组织发生病变时，可导致血清亮氨酸氨肽酶增高。为进一步探讨血清前白蛋白和血清亮氯酸氨肽酶检测对肝病诊断的临床意义，本文分析和比较了315例肝病患者以及92例正常血清标本，具体如下。

血清丙氨酸氨基肽酶和亮氨酸氨基肽酶的临床应用

目的 探讨血清丙氨酸氨基肽酶(AAP)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)在肝胆疾病诊断中的应用价值。方法 采用速率法同时检测159例肝胆疾病患者血清AAP、LAP活性。结果 各种肝胆疾病患者血清AAP、LAP活性多有不同程度升高,升高幅度依次为:急性胆道疾病>原发性肝癌>急性黄疸性肝炎>肝硬化>转移性肝癌>慢性乙型肝炎,两者显著相关,相关系数r为0.976 2,P<0.01。与常见的三种肝酶ALT、ALP、GGT相比,AAP、LAP与ALP、GGT呈正相关,与ALT没有相关关系。结论 AAP和LAP在肝胆疾病诊断中的临床意义十分相似,为鉴别肝胆疾病类型提供了新的、有效的诊断依据。

血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶对肝癌诊断价值的探讨

目的检测血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)并探讨其对肝癌的诊断价值。方法采用连续监测法分别对30例原发性肝癌、胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及15例胃癌患者血清GPDA进行测定。结果原发性肝癌患者的GPDA活性和阳性率比胆石症、肺癌、肝硬化、慢性肝炎及胃癌患者显著增高(P<0.01)。结论血清GPDA活性测定对原发性肝癌有一定辅助诊断价值。

异柠檬酸脱氢酶及亮氨酸氨基肽酶在肝病中的应用

2003-01～2004-01我们对不同肝病136例血清中异柠檬酸脱氢酶(ICDH),亮氨酸氨基肽酶(LAP)进行了检测,结果分析如下. 1对象和方法 1.1对象本组男81例,女55例.其中急性黄疸性肝炎39例,慢性活动性肝炎22例,肝硬化22例,脂肪肝24例,酒精肝21例,肝癌8例.正常对照组为本院健康查体合格者30例,两组年龄均在20～70岁.平均年龄58.8岁.

血清胱抑素C和γ-谷氨酰转移酶在糖尿病早期肾损伤的诊断价值

目的:探讨血清胱抑素C和γ-谷氨酰转移酶联合检测在糖尿病早期肾损伤的诊断价值及两者的相关性。方法:测定2型糖尿病组与正常对照组的血清胱抑素C(CysC)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、尿素(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)的结果进行两独立样本t检验,将2型糖尿病患者的CysC和γ-GT结果进行相关分析,早期肾损伤的阳性检出率为计数资料采用χ2检验。结果:2型糖尿病组各检测指标高于正常对照组且随病程延长CysC和γ-GT值升高,差异有统计学意义,CysC和γ-GT的检测比常规肾功能检测能够更早发现糖尿病早期肾损伤,差异有统计学意义,CysC和γ-GT在2型糖尿病患者呈正相关。结论:CysC和γ-GT的联合检测在糖尿病早期肾损伤的诊断中优于常规肾功能检测,CysC和γ-GT两者密切相关,且随病程进展检测值升高。

L-亮氨酰对硝基苯胺的合成

L-亮氨酰对硝基苯胺是多种氨肽酶家族成员活性测试的底物,但其合成工艺鲜有文献报道。经过实验方法研究,以低毒的三光气作为关键试剂,替代文献报道的光气。并在此基础上对反应溶剂、反应温度和三光气的用量等因素进行了考察,优化了反应条件。目标化合物结构通过熔点和核磁共振等手段进行了确证。

参照CLSI EP方案评价亮氨酸氨基肽酶试剂性能

目的参照CLSI EP方案对自主研发的亮氨酸氨基肽酶(LAP)试剂分析性能进行评价,了解其是否满足临床需求。方法参照文件测定试剂空白吸光度、检测限、分析灵敏度、精密度、准确度、线性范围、干扰试验和稳定性等技术指标。结果试剂空白吸光度为0.05,检测限为0.065U/L,分析灵敏度为0.015,高、低值血清批内变异系数分别为0.07%和0.08%,方法比对实验结果Y=1.006 4 X+1.851 4,r2=0.999 6;线性范围为0～300U/L,0.855mmol/L结合胆红素,0.855mmol/L非结合胆红素,0.3g/L维生素C,9.4g/L血红蛋白浓度,14 500FTU乳糜对检测结果无干扰,试剂稳定。结论该试剂分析性能可满足临床实验室的需要。

尿γ-谷氨酰转移酶和亮氨酸氨基肽酶检测在唑来膦酸致肾损伤早期诊断中的作用

目的探讨尿γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）和亮氨酸氨基肽酶（LAP）检测在唑来膦酸致肾损伤早期诊断中的作用。方法研究对象为2012年2月至2014年7月在沈阳军区总医院应用唑来膦酸治疗的恶性肿瘤骨转移患者。患者接受唑来膦酸注射液4mg静脉滴注，1次／25—35d，30min滴完，连续应用3次。每次用药前和用药次日留取患者清晨尿液及静脉血，检测并比较尿γ-GT、LAP和血清肌酐（Scr）水平。结果100例患者纳入研究，男48例，女52例，年龄25—82岁，平均（604-11）岁。第1次应用唑来膦酸前、后尿γ-GT、LAP和Scr分别为（7±5）、（84-5）U／L，（3324-110）、（375±113）nmol·s-1·L-1和（52±12）、（54±12）mol／L；第2次用药前、后分别为（10±4）、（12±5）U／L，（407±104）、（460±126）nmol·S-1·L-1和（51±13）、（53±13）μmol／L；第3次用药前、后分别为（16±8）、（19±9）U／L，（549±159）、（662±199）nmol·S-1·L-1和（52±15）、（53±14）umol／L，3次用药前、后比较尿γ-GT、LAP水平差异均有统计学意义（均P〈0．05），而Scr水平差异均无统计学意义（均P〉0．05）。3次用药后尿γ-GT、LAP水平两两比较差异均有统计学意义（均P〈0．05），Scr水平差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论唑来膦酸致肾损伤患者尿γ-GT、LAP水平变化早于Scr；尿γ-GT、LAP可作为。肾损伤的早期诊断指标。

亮氨酰氨肽酶基因的阻断对刺糖多孢菌生长及次级代谢产物合成的影响

【目的】构建亮氨酰氨肽酶基因(pep A)被阻断的刺糖多孢菌工程菌株,并鉴定该基因对刺糖多孢菌菌丝形态、生物量、菌体全蛋白表达水平及产多杀菌素能力的影响,探究该基因调控多杀菌素合成的可能机制。【方法】利用PCR扩增刺糖多孢菌中的pep A基因同源片段,经酶切连接技术构建敲除载体p OJ260-pep A;通过接合转移和单交换同源重组将该载体整合至刺糖多孢菌染色体中,获得工程菌株S.sp-△pep A;利用培养特征、形态学、高效液相色谱、SDS-PAGE等方法对菌株进行研究分析。【结果】工程菌株S.sp-△pep A菌丝片段化程度加剧,生长态势被延缓且生物量降低,但有效促进了多杀菌素的生物合成。阻断亮氨酰胺肽酶基因的表达使刺糖多孢菌菌体全蛋白表达情况发生明显改变,找到表达水平显著上调的差异蛋白核糖体蛋白亚基和醛基脱氢酶,核糖体蛋白亚基通过影响蛋白质代谢对菌体生长产生影响;醛基脱氢酶则可与乙醇脱氢酶、乙酰辅酶A的合成酶相互作用影响辅酶A合成,而辅酶A是合成多杀菌素的重要底物。【结论】在刺糖多孢菌合成多杀菌素的次级代谢过程中,pep A基因作为负调控因子发挥作用。

亮氨酸氨基肽酶在胆道梗阻性疾病中的应用

目的 探讨亮氨酸氨基肽酶(LAP)在胆道梗阻性疾病中的作用,评估LAP及其联合碱性磷酸酶(AKP)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)以及5′-核苷酸酶(5′-NT)对胆道梗阻性疾病的诊治价值.方法 收集中南大学湘雅医院2016年10月至2017年3月健康体检者、无症状HBV携带者、肝炎患者、胆道梗阻患者、肝硬化患者及原发性肝癌患者样本共181例,分别采用相应试剂盒检测LAP、AKP、GGT及5′-NT,并进行统计学分析.结果 LAP水平在胆道梗阻患者中最高,与其他各组差异均具有统计学意义(P<0.05);在胆道梗阻性疾病组中,LAP与AKP、GGT及5′-NT均呈正相关(r=0.690,P<0.01;r=0.864,P<0.01;r=0.735,P<0.01);LAP、5′-NT、GGT及AKP单独诊断胆道梗阻性疾病的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.945,0.942,0.916和0.898,LAP联合5′-NT,GGT及AKP的AUC为0.966,LAP联合5′-NT的AUC为0.968.结论 LAP可以作为胆道梗阻性疾病的一项初步鉴别诊断指标,联合5′-NT后其诊断价值进一步提高,具有较好的临床诊断价值.

^1H磁共振波谱在脑多发性硬化诊断中的价值

目的 结合MRI探讨1H磁共振波谱(1HMRS)在脑多发性硬化(MS)诊断中的临床应用价值。方法 选择32例经临床确诊为MS患者进行MR及1HMRS检查,同时与同期同年龄组MRI显示正常者进行对照研究,通过计算峰下面积,对代谢产物氮乙酰天门冬氨酸(NAA)、肌酸(Cr)、胆碱复合物(Cho)及乳酸(LAC)的浓度进行定量并观察NAA/(Cr+Cho)、Cho/Cr及LAC/Cr等各参数的变化。结果 病变组病例NAA/(Cr+Cho)、Cho/Cr及LAC/Cr值分别为0. 53、1. 47及0. 23,对照组分别为0. 75、1. 19及3. 35。MS病人NAA/(Cr+Cho)值下降,差异有显著性(t值为4. 76,P<0.05),Cho/Cr、LAC/Cr值升高,差异有显著性(t值分别为2. 36、4. 11,P均<0. 05)。结论 1HMRS和MRI互相补充有利于提高MS的诊断。

四项生化指标联合检测在糖尿病早期肾损伤诊断中的临床价值

目的探讨血清胱抑素C（CysC），视黄醇结合蛋白（RBP）和尿液N-乙酰-B氨基葡萄糖苷酶（NAG），β-半乳糖苷酶（GAL）联合检测，对糖尿病患者早期肾功能损伤的诊断价值。方法使用AU2700全自动生化分析仪用免疫比浊法测定血清CysC，RBP。速率法测定尿NAG，GAL。酶法测定血肌酐，NAG、GAL用肌酐比值法报告。结果100例糖尿病患者4项指标均值都明显高于正常对照组（P〈0．05）。以单项血清CysC、RBP异常为诊断标准，早期肾损伤检出率分别为60％、56％，而联合检测血清CysC、RBP和尿NAG、GAL，早期。肾损伤的检出率可达到85％，联合检查诊断率高于单项诊断率（X2=15．62～25．23，P〈0．01）。结论四项生化指标联合检测大大提高糖尿病早期肾功能损伤的诊断率。

甘胆酸在常见肝脏疾病中的应用

目的观察甘胆酸(CG)在肝脏疾病中的变化情况,评估CG联合总胆汁酸(TBA)及亮氨酸氨基肽酶(LAP)对各类肝病的诊断价值。方法收集本院2016年10月至2017年3月健康体检者、无症状HBV携带者、肝炎患者、胆道梗阻患者、肝硬化患者及原发性肝癌患者血清样本共210例,分别采用相应试剂盒检测CG及LAP,同时收录患者肝功能、凝血功能等指标,并进行统计学分析。结果 CG水平在各肝病组中均有升高,与正常组及无症状HBV携带组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);CG与LAP呈正相关(r=0.380,P<0.01);在肝功能指标中,CG与TB、DB、TBA及AKP等存在相关;在凝血常规中与Fib、TT等相关;多元线性回归分析CG的影响因素,最终引入的变量为LAP及TBA,回归方程为Y=-0.835+0.157X_1+0.312X_2(X_1:LAP;X_2:TBA,R^2=0.685);ROC曲线分析表明CG联合LAP诊断各组肝病的能力最强。结论 CG水平的变化在各种肝病中均具有重要意义,联合LAP诊断各组肝病的能力最强,具有较好的临床应用价值。