N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸(fMLP)三肽的合成

目的合成N-甲酰-L-甲硫氨酰-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸三肽(fMLP)。方法以L-亮氨酸、L-苯丙氨酸为原料,采用环酸酐法(NCA)合成二肽L-亮氨酰-L-苯丙氨酸;又以DCC、HOBT为偶联剂,与N-甲酰-L-甲硫氨酸进行偶联,在0.5mol.L-1的NaOH溶液中水解得到fMLP三肽。结果与结论合成的三肽fMLP总收率为44.0%。其结构经IR、1H-NMR、MS确证。

BOC2抑制N-甲酰肽/甲酰肽受体信号通路减轻SAP炎症损伤的机制研究

目的观察BOC-Phe-Leu-Phe-Leu-Phe(BOC2)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血中6种线粒体N-甲酰肽(NFPs)及胰腺组织中2种甲酰肽受体(FPRs)表达的影响,探讨其减轻SAP炎症损伤的机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组,模型组,BOC2低、高剂量组(分别为0.1、0.2 mg/kg),每组10只。后3组以胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠(50 mg/kg)制备SAP模型。造模结束后0.5 h腹腔注射相应剂量药物,4 h取材。苏木精-伊红染色观察胰腺病理改变;蛋白免疫印迹法检测血浆中NFPs的表达;免疫组化法检测胰腺FPRs表达;酶联免疫吸附试验检测血浆中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测胰腺局部组织炎性因子的表达。结果与模型组比较,BOC2低、高剂量组胰腺出血、腺泡细胞坏死、炎性细胞浸润、水肿等病理现象均改善;胰腺病理评分,血浆线粒体NADH-泛素氧化还原酶链(MT-ND)1、MT-ND2、MT-ND3、MT-ND5、MT-ND6表达,胰腺FPRs表达,血浆及胰腺组织中3种炎性因子表达均下降(P<0.05)。结论BOC2可通过拮抗线粒体NFPs/FPRs信号通路减少炎性因子产生,减轻SAP炎症损伤。

FMLP刺激的HL-60中p38 MAPK对NADPH氧化酶p47^(phox)成分的磷酸化作用

为了解p38促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)参与NADPH氧化酶激活的机理 ,利用p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80 ,在甲酰甲硫氨酰 亮氨酰 苯丙氨酸 (FMLP)刺激的分化为中性粒细胞样的HL 6 0细胞中研究p38MAPK对O·2 产生和NADPH氧化酶胞浆成分p4 7phox 的磷酸化作用 .实验发现 ,p38MAPK的激活过程与NADPH氧化酶的激活过程一致 .5 0 μmol LSB2 0 35 80抑制 5 0 % O·2 产生 ,完全抑制p38MAPK激活和部分抑制p4 7phox 体外磷酸化 .结果表明 ,在FMLP刺激的HL 6 0细胞中 ,p38MAPK可以通过磷酸化p4 7phox而参与NADPH氧化酶激活 .

fMLP、PMA、LTB_4对大鼠吞噬细胞能力的影响

目的观测fMLP、PMA、LTB4对大鼠吞噬细胞能力的影响。方法通过密度梯度离心法分离大鼠腹腔吞噬细胞,对分离后得到的巨噬细胞及中性粒细胞使用fMLP、PMA、LTB4诱导后,通过荧光显微镜观察其对荧光微球的吞噬能力,进行相关判断。结果静息状态下,大鼠腹腔巨噬细胞对荧光微球的吞噬能力显著大于中性粒细胞;经fMLP、PMA、LTB4诱导后,巨噬细胞及中性粒细胞对荧光微球的吞噬能力增强。结论大鼠腹腔中性粒细胞吞噬能力小于巨噬细胞;fMLP、PMA、LTB4可致大鼠中性粒细胞、巨噬细胞的的吞噬能力提高。

同位素稀释质谱法测定多肽含量

利用Leu-Phe作为模型肽,建立了水解后同位素稀释质谱测定多肽含量的方法。在实验中优化了酸水解的时间,采用高效液相色谱法和质谱法证明模型肽已完全水解。水解后的氨基酸经过HPLC分离,质谱检测采用选择离子监测模式,分别检测苯丙氨酸(m/z=166)和标记苯丙氨酸(m/z=174)的离子。根据苯丙氨酸的含量计算模型肽的含量,并评定了测定结果的不确定度。

中性粒细胞激活及其与内皮细胞粘附的关系

本文利用不同浓度的趋化物质N-甲酰甲硫亮氨酰苯丙氨酸(fMLP)处理中性粒细胞,并采用硝基蓝四唑(NBT)还原法检测中性粒细胞激活率,结合流室系统定量地研究了在不同切应力作用下不同激活状态的中性粒细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)粘附的关系。通过显微镜观察、计数及统计分析,结果表明:随着fMLP浓度的增加,中性粒细胞激活率显著增加,二者有着明显的量效关系。同时本实验还表明:中性粒细胞经fMLP处理后,与对照组一样,随着切应力增加,中性粒细胞与内皮细胞粘附率按指数曲线下降;中性粒细胞激活率的增加可以引起中性粒细胞-内皮细胞粘附显著增加,当切应力由小变大时,这种作用有减缓的趋势。以上结果揭示:(1)体内血流产生的切应力可能是阻止中性粒细胞—内皮细胞粘附的重要因素,中性粒细胞粘附随切应力增加而减少有利于体内正常血液循环的维持;(2)中性粒细胞激活可以增加其对内皮细胞的粘附,心脑血管疾病过程中,中性粒细胞激活率增加的病理生理意义可能在于其对内皮细胞粘附的增加,从而引发一系列病理过程。

中性粒细胞极性化过程中定向和侧足形成的方法学模式

背景:中性粒细胞极性是其趋化和产生防御功能的基础,而极性化过程中定向能力和侧足形成是重要的环节,目前相关研究的报道还很少。目的:观察均匀浓度、陡峭浓度梯度、平缓浓度梯度3种实验模式下细胞极性过程中片足的方向和侧足的形成情况,试图找出研究中性粒细胞极性的方法学模式。方法:①采用密度梯度离心法,成功急性分离人中性粒细胞。②均匀浓度、陡峭浓度梯度和平缓浓度梯度甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸对细胞进行趋化刺激。③倒置显微镜下观察细胞极性变化情况,判断细胞移动方向。④对细胞进行荧光双标,激光共聚焦显微镜下观察F-actin聚合情况。结果与结论:①均匀浓度下,中性粒细胞极性化方向和移动轨迹随机分布。②陡峭梯度浓度下,41%的细胞呈现电极向心性分布。③平缓梯度下,68%的细胞表现为沿着甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸浓度的分布,χ2检验提示平缓浓度梯度实验模式存在较好的定向性。④三者均有明显的侧足形成,以均匀浓度为高,这与定向性呈现为相反的结果。结果显示平缓浓度梯度实验模式在研究细胞定向机制方面相对较好,另一方面对细胞定向的干扰可能来源于细胞侧足的形成。

fMLP受体研究进展

fMLP作为第一个被发现的白细胞趋性肽 ,能迅速激活吞噬细胞 ,发挥强大的趋化活性。FPR ,FPRL1和FPRL2是迄今发现的仅有的三个fMLP的体内受体。除了FPRL2 ,另两种受体所拥有的体内外配体却远远不止fMLP。它们通过与不同的配体相互作用 ,参与机体的天然免疫、炎症反应 ,并通过与一些来源于HIV 1表面蛋白的人工肽相互结合 ,下调细胞表面其它趋化性受体的表达 ,产生“失敏反应”。