亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

目的探讨亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)、存活蛋白(survivin)在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响。方法选取77例胶质瘤患者,取其胶质瘤组织及相应的癌旁组织,采用免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况。随访3年,记录胶质瘤患者的预后情况,胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织,survivin阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,77例胶质瘤患者中死亡25例,生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者,survivin阳性表达率高于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达,survivin呈阳性表达,且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素,临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1、E-Cadherin和EGFR在胃癌中的表达和临床意义

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌中的表达和及其与临床病理特征的相关性。方法选取50例胃癌患者作为研究对象,并选取正常胃黏膜组织50例作为对照。用免疫组化方法检测两组患者卵巢组织中的LRIG1、E-Cadherin和EGFR的表达,分析LRIG1、E-Cadherin和EGFR的阳性表达率在胃癌患者不同临床病理特征中的差异。采用spearson秩相关分析LRIG1,E-Cadherin和EGFR的阳性表达率的相关性。结果胃癌组的LRIG1、E-Cadherin的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组,胃癌组的EGFR的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组。胃癌中LRIG1、E-Cadherin和EGFR阳性表达率与临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、组织学类型无关(P>0.05)。LRIG1、E-Cadherin和EGFR在胃癌患者中的阳性表达率具有相关性,共同调控参与胃癌的发生和发展。结论 LRIG1、E-Cadherin在胃癌中低表达和EGFR在胃癌中高表达,与胃癌的进展和转移相关。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选(英文)

背景:有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的LRIG1mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。目的:构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。方法:根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negativeshRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。结果与结论:构建的重组pGenesil2-LRIG1-shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2-LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2-LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negativeshRNA分别下降47.9%(P<0.01)和32.8%(P>0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响

目的运用基因芯片技术研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)对U251胶质瘤细胞基因表达的影响。方法提取正常U251细胞和转染了LRIG1的U251细胞的RNA,并反转录为cDNA,加用cy3、cy5染色标记后使用Roche-Nimble Gen人全基因组表达谱芯片检测LRIG1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响。结果转染LRIG1的U251细胞相对U251细胞,差异基因为808条,其中上调基因有397条,下调基因有411条,包括细胞骨架、细胞增殖、细胞凋亡、生长代谢等相关基因。结论基因芯片能够高效地初步检测差异基因表达,有助于揭示LRIG1作用于胶质瘤细胞的分子机制。

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1过表达对膀胱癌细胞免疫相关基因的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1（LRIG1）的膀胱癌细胞与对照组膀胱癌细胞间差异表达的免疫相关基因，探讨LRIG1对膀胱癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别提取转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87-LRIG1和未转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87的总核糖核酸（RNA），反转录成cDNA并标记后，同22K人类基因表达谱芯片杂交后筛选出与免疫相关的差异表达基因，并进一步使用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证。结果在21522条基因中，两组细胞间差异表达的免疫相关基因有9条，其中BIU87-LRIG1细胞中上调基因4条，下调基因5条。RT-PCR提示BIU87-LRIG1组的程序化死亡基因5（PDCD5）表达水平（1．22±0．04）较BIU87组（0．43±0．06）明显增高。结论使用基因芯片技术筛选出了LRIG1过表达可影响膀胱癌免疫功能的9种相关基因。

富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因过表达增强膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 探讨富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 （leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1）基因过表达对膀胱癌T24细胞顺铂（cis-diaminodichloroplatinum,CDDP）敏感性的影响及其机制.方法 2012年12月至2014年2月选取膀胱癌T24细胞株,将建立并鉴定的过表达LRIG1基因的T24细胞分为3组：实验组,转染Ad-Surp-LRIGl;对照组,转染Adeno-SP-EGFP;空白组,未转染.将3组细胞分别加入CDDP,构建为CDDP/Ad-Surp-LRIG1组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP组,与未加入CDDP的空白组共4组进行诱导凋亡实验.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后T24细胞中LRIG1和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达水平.蛋白质印迹法检测CDDP对T24细胞的总EGFR和核磷酸化EGFR表达的影响.采用CCK-8法检测各组细胞对CDDP的敏感性.流式细胞学检测各组细胞的凋亡率.结果 实验组、对照组和空白组的LRIG1 mRNA和EGFR mRNA的表达量分别为2.79±0.15和0.65±0.05、0.76±0.09和1.98±0.07、0.66±0.05和2.05±0.04,LRIG1蛋白和EGFR蛋白分别为1.98±0.12和0.92±0.05、0.88 ±0.07和2.51 ±0.07、1.00 ±0.08和2.42±0.09,实验组与对照组和空白组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的半数抑制浓度IC50值分别为（30.96±0.57）、（31.55 ±0.48）和（14.09±0.31） μg/ml,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的细胞凋亡率[（69.77±2.14）％]高于CDDP/Adeno-SP-EGFP组[（48.15±1.53）％]、CDDP组[（46.82±1.23）％]、空白组[（3.17±0.21）％],差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组和CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.空白组、CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的总EGFR和核磷酸化EGFR的表达量分别为2.52±0.11和1.76±0.08、1.22±0.05和2.75±0.15、1.25±0.05和2.82±0.13、0.32 ±0.02和1.08±0.04,CDDP组与空白组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组与CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 LRIG1通过下调EGFR和核磷酸化EGFR的表达促进CDDP诱导的T24细胞凋亡,提高T24细胞对CDDP的敏感性.

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因3在肝癌细胞株中的表达及对细胞周期、侵袭性和凋亡的影响

目的观察富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基L大J3（LRIG3）在3种肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721中的表达，探讨LRIG3基因对肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721的细胞周期、侵袭能力和凋产的影响。方法将过表达的LRIG3质粒和空白质粒经脂质体法分别转染肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721中，相对廊分为实验组和对照组，采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测LRIG3表达水平变化，采用流式细胞仪、Transwell法及原佗末端转移酶标记（TUNEL）等方法对细胞株的生物学行为进干亍分析。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1在垂体瘤中的表达及其预后意义

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1（LRIGl）在垂体瘤中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测74例垂体瘤、20例正常脑组织中LRIG1的表达,分析其表达与患者预后的关系.结果 LRIG1在正常脑组织中的阳性表达率为100.0％,明显高于垂体瘤中的表达（54.1％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,LRIG1在非侵袭性垂体瘤中的阳性表达率为66.7％,明显高于在侵袭性垂体瘤中的表达（20.0％）.Kaplan-Meier生存分析表明LRIG1及垂体瘤类型与患者的预后明显相关（P＜0.05）.Cox多因素生存分析表明LRIGI可作为患者预后评估的独立因素.结论 LRIG1参与了垂体瘤的发生及发展,低表达患者预后较差.

信号转导和转录激活因子3信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1诱导U251细胞凋亡中的作用

目的探讨信号转导和转录激活因子3 （STAT3）信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白l（LRIGl）诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡中的作用及机制。方法传代培养U251细胞，随机分为对照组、空载体组及实验组，应用脂质体介导的基因转染技术分别将磷酸盐缓冲液（PBS）、PEGFP-N1质粒体、PEGFP-LRIG1质粒体转染入各组细胞，应用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞体外生长活性，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法经流式检测各组细胞凋亡率，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组细胞中STAT3的mRNA表达，Westernblot法测定各组细胞中STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、B淋巴细胞/白血病-2（ bcl-2）、bax的蛋白表达。结果成功转染LRIG1，实验组细胞中LRIG1基因表达明显上调（P〈0.05）;实验组细胞增殖显著受抑，48 h抑制率为（45. 12 ±0. 68）%，72h抑制率为（52. 24 ± 1. 77）%，总凋亡率由（2. 54 土0. 43）%增高至（22. 51 ±2. 12）%（P〈0. 05） ； RT-PCR检测显示实验组细胞中STAT3 mRNA表达明显降低;Western blot检测显示实验组细胞中STAT3蛋白表达及磷酸化水平明显降低，bcl-2表达明显降低，bax表达明显升高。结论LRIG1可促进U251细胞凋亡，其机制可能是通过下调STAT3信号通路，进而抑制STAT3激活的抗凋亡途径。

干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制

目的探讨干扰多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）基因表达促进人胶质母细胞瘤U251细胞株侵袭性的机制。方法用携带U6启动子的LRIG1特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG1-shRNA（siRNA）及含非特异shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-negativeshRNA（neg）转染U251细胞株，通过G418筛选，鉴定得到稳定转染细胞株。采用侵袭实验验证干扰LRIG1对U251侵袭性的影响，通过明胶酶谱实验检测基质金属蛋白激酶（MMP）-2、MMP-9的活性，Westernblot法检测表皮生长因子（EGFR）及其下游丝裂原激活蛋白激酶／细胞外信号调节激酶（MAPK／ERK）、磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（P13K／AKT）信号通路蛋白的表达差异。结果含U6启动子LRIG1shRNA序列的质粒转染干扰组LRIG1mRNA降低至对照组（35．3％～39．2％，P〈0．05）。干扰LRIG1表达组U251细胞侵袭数[（159±15）-（188±9）／视野]，较空白对照组细胞侵袭数[（28±9）／视野]明显增多（P〈0．05）；干扰LRIG1激活EGFR通路传导；干扰LRIG1后干扰组MMP-2较对照组活性增加（1．66±0．11～1．96±0．12，P〈0．01），MMP-9干扰组较对照组活性增加（4．82±0．27～4．47±0．29）。结论LRIG1表达下调后MMP-2、MMP-9活性增强，从而促进U251细胞的侵袭性，可能通过激活EGFR信号通路引起。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1基因表达对体外垂体瘤细胞株RC-4B／C生物学功能的影响

目的观察多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIGI）基因表达对体外垂体瘤细胞株RC-4B／C的增殖凋亡和生物学功能的影响。方法应用基因转录方法检测LRIG1基因表达射体外垂体瘤细胞株RC-4B／C的抗增殖作用和生物学功能的影响；通过免疫组织化学法和Western blot技术检测LRIGI蛋白在RC-4B／C细胞中的表达水平，反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）测定转染后RC-4B／C细胞中Ras、Raf、蛋白激酶B（Akt）和细胞外信号调节激酶（ERK）mRNA表达变化，并通过噻唑蓝（MTF）法、划痕实验、苏木素-伊红（HE）染色、显微镜等观察比较转染LRIG1基因的RC-4B／C细胞的的迁移能力、增殖凋亡和形态学改变。结果Western blot和免疫组织化学法证实转染后RC-4B／C细胞中LRIG1稳定表达；RT—PCR证实转染后RC-4B／C细胞中Ras、Raf和AktmRNA水平显著降低（P〈0．01），分别为0．87±0．17、0．46±0．11、0．92±0．25。MTT法结果表明随着LRIG1与RC-4B／C细胞效靶比增加及作用时间延长，抑制率明显增强（P〈0．01）。划痕实验结果显示：LRIG1转染的RC-4B／C细胞迁移能力低于正常RC-4B／C细胞。LRIGI作用于垂体瘤细胞24h后，形态学观察垂体瘤细胞发生凋亡或坏死。结论LRIGI基因转染对体外垂体瘤细胞株RC-4B／C细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用，其可能是通过抑制表皮生长因子受体（EGFR）和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体（EGFRvm）信号传导通路中的磷酸肌醇3激酶（P13K）／Akt和Ras／Rat／ERK两条重要信号通路分子的活性来发挥作用。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1与胶质瘤细胞株化疗敏感性之间的关系

目的探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）与胶质瘤细胞化疗敏感性的相关性。方法替莫唑胺诱导构建多药耐药细胞株U251／TR，细胞计数试剂盒（CCK-8）检测该细胞株的多药耐药性，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LRIG1在U251和U251／TR中的表达变化。转染LRIG1质粒体进入多药耐药细胞株，检测其对化疗药物敏感性变化。结果成功构建多药耐药细胞株U251／TR，替莫唑胺、阿霉素、环磷酰胺、依托泊苷、硫酸长春新碱对U251的抑制率分别为：（19．30±0．04）％、（39．90±0．13）％、（28．10±0．09）％、（66．20±0．02）％、（26．30±0．11）％。而对U251／TR的抑制率分别为：（3．20±0．03）％、（15．30±0．09）％、（4．10±0．03）％、（45．60±0．10）％、（10．80±0．04）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。其LRIG1的表达明显降低，将LRIG1质粒体转入耐药细胞株后，TMZ、VP16、硫酸长春新碱、环磷酰胺、阿霉素对空白组（耐药细胞株）的抑制率为（2．60±0．02）％、（3．30±0．02）％、（9．50±0．06）％、（2．20±0．05）％、（2．90±0．03）％，而对转染组的抑制率为（19．10±0．34）％、（38．20±0．53）％、（29．10±0．25）％、（15．20±0．55）％、（17．40±0．41）％，耐药性被逆转，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LRIG1与肿瘤的化疗敏感性相关，LRIG1可能与肿瘤的多药耐药有关。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2基因全长及胞外段慢病毒表达载体的构建及对胶质瘤细胞增殖的影响

目的构建富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段的慢病毒表达载体并转染人胶质瘤细胞株，观察其对胶质瘤细胞增殖的影响。方法运用基因重组技术将LRIG2基因全长（LRIG2）和胞外段（LRIG2ecto）片段分别插入慢病毒载体pLVX—Puro-3×Flag：然后用pLVX—Puro-3×Flag-LRIG2和pLVX。Puro-3×Flag—LRIG2ecto分别转染胶质瘤细胞株U87；荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot分别检测LRIG2及LRIG2ecto的mRNA和蛋白表达；细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测转染后细胞的增殖；流式细胞术检测细胞周期。结果West-ernblot鉴定Flag标签蛋白表达成功；LRIG2及LRIG2ecto过表达组mRNA表达分别是对照组的8．42和29．58倍（P〈0．01）；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖率明显高于对照组；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖指数（PI）分别为（50．63±1．29）％和（48．61±0．55）％，明显高于对照组（42．48±0．72）％（P〈0．01）。结论成功建立稳定表达外源性LRIG2基因全长及胞外段的人胶质瘤细胞株，且证实均促进胶质瘤细胞增殖。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1及表皮生长因子受体在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义

目的 研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIGl）及表皮生长因子受体（EGFR）在子宫颈腺癌中的表达,并探讨LRIG1与预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测子宫颈腺癌47例、子宫颈腺上皮内瘤变（CGIN） 24例和正常子宫颈组织60例中LRIG1及EGFR的表达情况,并对二者相关性进行分析.结果 LRIG1蛋白在子宫颈腺癌组织、CGIN、正常子宫颈组织的阳性表达率分别为21.28 ％（10/47）、29.17％（7/24）和83.33％（50/60）,差异有统计学意义（P＜0.05）;EGFR蛋白在子宫颈腺癌组织、CGIN、正常子宫颈组织的阳性表达率分别为82.98％（39/47）、45.83％（11/24）、5.00％（3/60）.不同年龄分层患者LRIG1的阳性表达率差异无统计学意义（P＞0.05）,而不同组织学分级、淋巴结转移及临床分期分层间,LRIG1的阳性表达率差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.LRIG1蛋白阳性表达患者生存率高于阴性表达者,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 LRIG1可能作为子宫颈腺癌的预后因素之一,对子宫颈腺癌的临床转归具有一定预测意义,其机制可能与抑制EGFR的信号转导有关.

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制

目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG2-shRNA（siRNA）及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-scramble—shRNA（set）转染胶质瘤细胞系GL15、G418（600mg/L）筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westemblot法检测LRIG2和表皮生长因子受体（EGFR）表达的改变。噻唑蓝（MTT）比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖，流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变。结果实验组细胞LRIG2mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68．6％和62．3％，EGFR蛋白水平下降了32．6％。MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组。细胞周期分析表明对照组G0／G1期为（26．72±2．10）％，实验组为（36．58±3．29）％（P〈0．05），LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0／G1期。结论GL15细胞经RNA干扰基因表达后，LRIG2mRNA和蛋白水平明显降低，同时EGFR蛋白水平下降，从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0／G1期。LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2调控血小板源性生长因子受体β信号通路促进胶质母细胞瘤细胞周期进展

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)调控血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)信号通路促进胶质母细胞瘤(GBM)细胞周期进展的机制。方法免疫组织化学法检测肿瘤组织中蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期进展;裸鼠皮下移植瘤模型检测细胞在体成瘤能力;免疫荧光共聚焦及免疫共沉淀检测蛋白结合;Western blot检测信号通路蛋白表达。结果人GBM组织中LRIG2与PDGFRβ蛋白表达呈正相关(χ^2=6.411,P<0.05)。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组S期及G2/M期细胞百分比均明显高于对照组[(22.74±1.23)%比(11.60±0.82)%,t=13.052,P<0.05;(19.06±1.04)%比(9.36±0.65)%,t=13.699,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤LRIG2过表达组肿瘤体积明显高于对照组[(1 372.56±167.88) mm3比(413.34±76.79) mm3,t=11.619,P<0.05]。GBM细胞中LRIG2蛋白与PDGFRβ蛋白存在共表达,且存在物理性结合。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组U87细胞中PDGFRβ、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3),细胞周期蛋白(Cyclin) B1和Cyclin D1表达水平均明显高于对照组。结论LRIG2通过调控PDGFRβ信号通路促进GBM细胞周期进展。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对人肝癌细胞株Hep—G2恶性表型的影响及其作用机制

目的观察多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1（LRIG1）基因过表达对人肝癌细胞株Hep—G2恶性表型的影响并探讨其作用机制。方法LRIG1基因重组过表达载体（pEGFP—N1-LRIG1）转染Hep．G2细胞，分别于转染后24、48、72h用细胞计数试剂盒（CCK．8）法检测其对Hep—G2细胞增殖的作用；Transwell侵袭实验检测其对细胞侵袭能力的影响；应用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）及Westernblot方法检测转染后LRIG1与细胞膜上表皮生长因子受体（EGFR）的mRNA与蛋白水平的变化。结果CCK-8结果显示，在24、48、72h作用时间时pEGFP—N1空载体组的细胞存活率分别为92．4％、86．4％、80．3％；而pEGFP—N1-LRIG1质粒组的细胞存活率分别为55．2％、50．9％、46．5％，与空载体组比较，LRIG1对Hep—G2细胞有明显的抑制效应（P〈0．01）；细胞侵袭实验结果表明，LRIG1过表达组、未处理及空载体组侵袭实验侵袭细胞比率分别为33．24％、100．00％、92．85％，与空载体组比较，LRIG1能显著抑制Hep-G2细胞的侵袭能力（P〈0．05）；Real．timePCR及Westernblot实验结果显示，LRIG1过表达组能显著抑制EGFR在Hep—G2细胞中mRNA和蛋白水平的表达（P〈0．05）。结论LRIG1可能通过抑制EGFR的表达来抑制Hep—G2细胞的增殖。

微小RNA-4295靶向调控多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化的影响

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-4295靶向调控多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法选取2018年6月到2020年4月经手术切除的120例脑胶质瘤及癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析胶质瘤组织和癌旁组织中miR-4295表达水平。采用慢病毒在脑胶质瘤细胞系U251建立miR-4295沉默细胞系(实验组)和对照细胞系(对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力;采用Transwell分析细胞侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析对照组和实验组EMT标志物表达变化。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-4295基因,并分析对照组和实验组细胞靶蛋白表达水平。组间数据比较采用t检验。结果与癌旁组织(1.29±0.20)比较,脑胶质瘤组织中miR-4295表达水平(2.81±0.19)显著增加,差异有统计学意义(t=2.809,P<0.05)。与对照组(1.07±0.15)比较,实验组细胞miR-4295表达水平(0.38±0.11)显著下调,差异有统计学意义(t=2.441,P<0.05)。与对照组细胞48 h吸光度(A)值(1.61±0.25)比较,实验组细胞48 h A值(1.22±0.18)显著下降,差异有统计学意义(t=2.091,P<0.05)。与对照组细胞[(89.27±9.10)个]比较,实验组侵袭细胞数量[(32.49±5.94)个]显著下降,差异有统计学意义(t=4.109,P<0.05)。与对照组细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平(1.13±0.13、1.20±0.19)比较,实验组细胞N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平(0.30±0.11、0.37±0.12)显著下调,差异有统计学意义(t=3.091、2.861,P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示LRIG1是miR-4295靶基因。癌旁组织中LRIG1相对表达水平(1.05±0.22)比较,肿瘤组织LRIG1相对表达水平(0.23±0.11)显著下调,差异有统计学意义(t=3.021,P<0.05)。与对照组细胞LRIG1相对表达水平(0.35±0.13)比较,实验组细胞LRIG1相对表达水平(0.89±0.17)显著增加,差异有统计学意义(t=2.198,P<0.05)。结论miR-4295通过靶向LRIG1调控着脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和EMT。

过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制

目的:探讨过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基培养U373细胞,分为对照组和LRIG1组,对照组采用对照慢病毒感染,LRIG1组采用过表达LRIG1慢病毒感染,48 h后筛选阳性细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖;采用流式细胞术分析两组细胞凋亡;采用Transwell分析两组细胞侵袭;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析凋亡和侵袭相关蛋白表达水平。计量资料比较采用t检验。结果:与对照组细胞(1.24±0.21)比较,LRIG1组细胞中LRIG1蛋白表达水平(2.81±0.30)显著增加,差异有统计学意义(t=3.015,P<0.05)。与对照组细胞(1.74±0.25)比较,LRIG1组细胞吸光度值(1.12±0.18)显著下降,差异有统计学意义(t=3.641,P<0.05)。与对照组细胞[(78.65±10.58)%]比较,LRIG1组细胞EdU阳性率[(34.02±8.01)%]明显下降,差异有统计学意义(t=4.387,P<0.05)。与对照组细胞[(5.02±1.81)%]比较,LRIG1组细胞凋亡率[(25.49±6.89)%]明显增加,差异有统计学意义(t=6.914,P<0.05)。与对照组细胞[(88.14±9.28)个]比较,LRIG1组细胞侵袭数量[(39.48±5.81)个]明显下降,差异有统计学意义(t=5.498,P<0.05)。与对照组细胞(0.58±0.10)比较,LRIG1组细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(1.16±0.13)显著增加,差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。与对照组细胞(1.18±0.18)比较,LRIG1组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平(0.44±0.11)显著下调,差异有统计学意义(t=3.482,P<0.05)。结论:过表达LRIG1可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖和侵袭,促进肿瘤细胞凋亡。