中医药干预核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体防治类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性、全身性自身免疫性疾病,以软骨损伤、滑膜炎症等为主要病理特征。核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体是一种细胞内感应蛋白复合物,可感知内源性危险信号并鉴别外来病原体,从而释放白细胞介素-1β、白细胞介素-18等促炎因子,介导细胞凋亡。研究表明,NLRP3炎症小体可以诱发炎症级联反应,加速软骨破坏,与RA密切相关。中医药在防治RA方面已取得一定成果。多项研究证实,中医药可靶向干预NLRP3炎症小体介导RA的病变过程,但尚未有系统性的相关论述。该文论述NLRP3炎症小体参与RA的机制,总结归纳近几年中医药干预NLRP3炎症小体防治RA的研究进展,以期为RA靶向药物的研发与应用提供一定借鉴。

微小RNA-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤机制研究

目的:探究miR-195通过靶向抑制PH结构域富亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)表达参与香烟烟雾诱导急性肺损伤的机制。方法:选择90只健康小鼠,均分为A、B、C三组,使用香烟烟雾暴露建立小鼠急性肺损伤模型,A组为正常对照组,B组为低剂量干预组,C组为高剂量干预组,干预后检测三组小鼠肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-8(IL-8)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,对比三组小鼠肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数,对比三组小鼠肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)水平,最后检测三组小鼠肺组织中miR-195及PHLPP2蛋白表达量。结果:①肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8及MMP-9水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);②肺泡灌洗液中白细胞、中性粒细胞计数C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);③肺泡灌洗液中MPO、SOD、GSH水平C组>B组>A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05);④肺组织中miR-195表达C组>B组>A组,PHLPP2蛋白表达C组<B组<A组,组间对比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:香烟烟雾能够诱导小鼠肺组织出现炎性改变,其机制可能与miR-195过表达并抑制PHLPP2蛋白表达有关。

富含亮氨酸重复结构域蛋白3炎症小体在高血压大鼠主动脉夹层模型形成中的作用

目的建立高血压大鼠主动脉夹层(AD)模型,探讨富含亮氨酸重复结构域蛋白(NLRP)3炎症小体在高血压促AD形成中的作用及相关分子机制。方法 40只雌性SD大鼠(3周龄,体质量60g左右)随机分为4组,每组10只:对照组:正常喂食饮水;β-氨基丙腈(BAPN)组(AD模型组):0.25%BAPN喂食;醋酸去氧皮质酮(DOCA)组:0.25%BAPN喂食,并皮下注射DOCA油剂;左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME)组:0.25%BAPN喂食,饮含l-NAME水。记录各组大鼠饮水、体质量及血压;动物死亡后(对照组大鼠为处死,模型组为自然死亡)分离主动脉行Masson三色染色及EVG染色,分别观察主动脉内胶原纤维、弹力纤维的变化情况,行免疫组化染色观察主动脉中NLRP3炎症小体相关蛋白[NLRP3、Caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)]的表达情况,采用实时聚合酶链反应及Western blot法分别检测主动脉内NLRP3炎症小体相关蛋白的基因及蛋白表达情况。结果与对照组比较,BAPN喂养2周后大鼠体质量明显减轻,DOCA组大鼠饮水量明显增加。DOCA组、l-NAME组大鼠血压较BAPN组明显升高[干预第2周平均动脉压:(95.4±10.1)、(110.0±9.9)比(70.4±2.9)mm Hg;干预第3周平均动脉压:(128.4±13.8)、(118.5±8.1)比(76.4±5.3)mm Hg,均P<0.01]。Masson三色染色显示:DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中胶原纤维较BAPN组明显增多(均P<0.05)。EVG染色显示:DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中弹力纤维较BAPN组明显增多(均P<0.05),且排列更加紊乱,断裂情况更加严重。免疫组化显示:与BAPN组比较,DOCA组、l-NAME组大鼠主动脉中NLRP3炎症小体相关蛋白表达增加(NLRP3:6.63±0.51、6.78±0.47比3.32±0.39;Caspase-1:5.22±0.45、6.19±0.31比3.36±0.30;IL-1β:5.51±0.53、5.80±0.40比3.18±0.35;均P<0.05)。与BAPN组比较,DOCA组及l-NAME组大鼠主动脉内NLRP3炎症小体相关蛋白在基因水平、蛋白水平的表达显著增加(均P<0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与高血压促大鼠AD的形成。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。

亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

目的探讨亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)、存活蛋白(survivin)在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响。方法选取77例胶质瘤患者,取其胶质瘤组织及相应的癌旁组织,采用免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况。随访3年,记录胶质瘤患者的预后情况,胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织,survivin阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,77例胶质瘤患者中死亡25例,生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者,survivin阳性表达率高于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达,survivin呈阳性表达,且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素,临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。

富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因过表达增强膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 探讨富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 （leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1）基因过表达对膀胱癌T24细胞顺铂（cis-diaminodichloroplatinum,CDDP）敏感性的影响及其机制.方法 2012年12月至2014年2月选取膀胱癌T24细胞株,将建立并鉴定的过表达LRIG1基因的T24细胞分为3组：实验组,转染Ad-Surp-LRIGl;对照组,转染Adeno-SP-EGFP;空白组,未转染.将3组细胞分别加入CDDP,构建为CDDP/Ad-Surp-LRIG1组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP组,与未加入CDDP的空白组共4组进行诱导凋亡实验.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后T24细胞中LRIG1和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达水平.蛋白质印迹法检测CDDP对T24细胞的总EGFR和核磷酸化EGFR表达的影响.采用CCK-8法检测各组细胞对CDDP的敏感性.流式细胞学检测各组细胞的凋亡率.结果 实验组、对照组和空白组的LRIG1 mRNA和EGFR mRNA的表达量分别为2.79±0.15和0.65±0.05、0.76±0.09和1.98±0.07、0.66±0.05和2.05±0.04,LRIG1蛋白和EGFR蛋白分别为1.98±0.12和0.92±0.05、0.88 ±0.07和2.51 ±0.07、1.00 ±0.08和2.42±0.09,实验组与对照组和空白组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的半数抑制浓度IC50值分别为（30.96±0.57）、（31.55 ±0.48）和（14.09±0.31） μg/ml,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的细胞凋亡率[（69.77±2.14）％]高于CDDP/Adeno-SP-EGFP组[（48.15±1.53）％]、CDDP组[（46.82±1.23）％]、空白组[（3.17±0.21）％],差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组和CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.空白组、CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的总EGFR和核磷酸化EGFR的表达量分别为2.52±0.11和1.76±0.08、1.22±0.05和2.75±0.15、1.25±0.05和2.82±0.13、0.32 ±0.02和1.08±0.04,CDDP组与空白组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组与CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 LRIG1通过下调EGFR和核磷酸化EGFR的表达促进CDDP诱导的T24细胞凋亡,提高T24细胞对CDDP的敏感性.

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1过表达对膀胱癌细胞免疫相关基因的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1（LRIG1）的膀胱癌细胞与对照组膀胱癌细胞间差异表达的免疫相关基因，探讨LRIG1对膀胱癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别提取转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87-LRIG1和未转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87的总核糖核酸（RNA），反转录成cDNA并标记后，同22K人类基因表达谱芯片杂交后筛选出与免疫相关的差异表达基因，并进一步使用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证。结果在21522条基因中，两组细胞间差异表达的免疫相关基因有9条，其中BIU87-LRIG1细胞中上调基因4条，下调基因5条。RT-PCR提示BIU87-LRIG1组的程序化死亡基因5（PDCD5）表达水平（1．22±0．04）较BIU87组（0．43±0．06）明显增高。结论使用基因芯片技术筛选出了LRIG1过表达可影响膀胱癌免疫功能的9种相关基因。

棉花多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因克隆、序列及表达谱分析

植物的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIPs)在植物的抵抗疾病机制中起着重要作用,能够高效、专一的结合病原体侵染时分泌的多聚半乳糖醛酸酶,抑制其活性。克隆了棉花(苏棉9号)的一段长993bpPGIP基因,命名为GhPGIP1,它能够编码一段长330个氨基酸残基,分子量与等电点分别为37.0kDa与8.30的蛋白质。核酸和蛋白质序列与其他9个物种的同源性分别为65.6%～70.3%和63.4%～68.6%。蛋白GhPGIP1有10个N端、C端半胱氨酸残基,6个可能的N糖基化位点和5个保守的亮氨酸重复结构域(LRR)。在所有的保守LRR域中,L是高度保守的。半定量RT-PCR试验结果显示,GhPGIP1在棉花的根、茎、叶中均表达,其中以叶中表达量最多。

维甲酸对脑出血大鼠LINGO-1表达的影响

目的观察脑出血后LINGO-1表达的变化,探讨维甲酸对脑出血后LINGO-1表达的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和维甲酸治疗组,选取造模后1d、3d、7d和14d为观察点。制备脑出血模型,Longa评分法评价神经功能缺损程度,RT-PCR法检测LINGO-1 m RNA的表达,Western blot法检测LINGO-1蛋白的表达。结果模型组Longa评分7d最高,14d出现下降;LONG-1 m RNA 3d表达最高,7~14d出现下降;LONG-1蛋白7d到高峰,14d出现下降。维甲酸治疗组在14d Longa评分较模型组下降(P<0.05);在7d和14d LINGO-1m RNA表达较模型组下降(P<0.05);在14d LINGO-1蛋白表达较模型组下降(P<0.05)。结论脑出血后LINGO-1表达明显上调,呈先上升后下降的变化规律。维甲酸可以降低LINGO-1 m RNA和蛋白的表达及神经功能评分。

NLRP3炎症小体在肺癌中的研究进展

核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(nucleotide-binding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containing receptor 3,NLRP3)炎症小体是重要的炎症反应调节因子,可诱导炎症级联反应,参与细胞凋亡。炎症与肿瘤发生发展存在某种关联。本文对NLRP3炎症小体的研究进展及其在肺癌发生发展和治疗方面的相关研究成果进行综述,旨在为肺癌的临床预后及治疗方案的选择提供一定参考。

沉默海马LINGO-1对小鼠学习记忆以及有髓神经纤维的影响

目的:研究沉默海马含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的蛋白-1(LINGO-1)对APP/PS1小鼠空间学习和记忆能力以及海马有髓神经纤维的影响。方法:随机选取18只雄性APP/PS1小鼠,随机分为对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组,通过海马立体定位注射表达LINGO-1-shRNA的重组腺相关病毒rAAV-LINGO-1-shRNA,运用Morris水迷宫方法测试小鼠的空间学习和记忆能力;运用免疫荧光染色和real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1表达水平;运用real time RT-PCR分析小鼠海马内LINGO-1下游分子RhoA和ROCK的表达水平;运用无偏体视学方法结合透射电子显微镜技术对小鼠海马(CA1~3和齿状回)的体积,海马内有髓神经纤维的长度、髓鞘体积及其损伤情况进行定量研究。结果:与对照组小鼠相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组小鼠的逃避潜伏期显著性缩短,穿台次数显著增多,而目标象限游泳时间及目标象限游泳路程比无显著性改变;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内LINGO-1显著下调,同时其下游RhoA和ROCK的表达水平降低;对照组和rAAV-LINGO-1-shRNA组海马体积无显著性差异;与对照组相比,rAAV-LINGO-1-shRNA组海马内有髓神经纤维的长度和正常髓鞘的体积显著性增加,受损的有髓神经纤维占比和受损的髓鞘占比均显著降低。结论:沉默海马LINGO-1能够有效改善APP/PS1小鼠海马依赖的空间学习和记忆能力,抑制RhoA/ROCK的表达,减轻海马内有髓神经纤维及其髓鞘的损伤,这将为阿尔茨海默病的发病及治疗提供新的方向。

白色念珠菌经组织蛋白酶B途径诱导小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达

目的探讨含热蛋白结构域3富含亮氨酸重复序列的核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP3)在白色念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及其激活途径。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为空白对照组、CA-074Me组、白色念珠菌组、白色念珠菌+10-6mol·L-1CA-074Me组和白色念珠菌+10-5mol·L-1CA-074Me组。实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内NLRP3 mRNA表达,Western blot检测细胞内溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B)和胱天蛋白酶-1(caspase-1)p20蛋白质水平,酶联免疫吸附试验测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果白色念珠菌组细胞内NLRP3 mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白表达、细胞培养上清液中IL-1β水平均显著高于空白对照组(P<0.01)。加入10-5mol·L-1CA-074Me干预后,细胞内NLRP3mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β水平与白色念珠菌组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白色念珠菌通过活化cathepsin B诱导巨噬细胞NLRP3的表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。

LRIG1在卵巢浆液性囊腺癌细胞对依托泊苷敏感性中的作用研究

目的探讨亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域基因-1(LRIG1)在卵巢浆液性囊腺癌(SKOV3)细胞株中对依托泊苷敏感性的可能机制。方法噻唑蓝比色法(MMT)检测不同浓度VP16干预下48 h的SKOV3细胞组、siRNA LRIG1转染SKOV3细胞组、SKOV3/VP16细胞组和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的增殖。平板克隆检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测LRIG1mRNA表达。结果半抑制浓度(IC50)分别为62.90、115.49、156.50和195.42μg/L,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16的耐药指数分别为1.8、2.5和3.1。SKOV3、siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞组的克隆率(F=39.338,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA(F=63.095,P=0.000)和凋亡细胞(F=230.046,P=0.000)明显不同,与SKOV3比较,siRNA LRIG1转染SKOV3、SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.026、0.0710和0.125,P=0.042、0.000和0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.130、0.525和0.825,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=12.350、35.506和44.412,均P=0.000),与siRNA LRIG1转染SKOV3比较,SKOV3/VP16和siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.044和0.099,P=0.001和0.000),LRIG1 mRNA降低(t=0.395和0.695,均P=0.000),凋亡细胞减少(t=23.156和32063,均P<0.05),与SKOV3/VP16比较,siRNA LRIG1转染SKOV3/VP16细胞的克隆率增加(t=0.055,P=0.000),细胞的LRIG1 mRNA降低(t=0.300,P=0.000),凋亡细胞减少(t=8.906,P=0.000)。结论 LRIG1 mRNA影响SKOV3细胞对药物的敏感性,沉默LRIG1的耐药细胞可抑制SKOV3细胞凋亡。

LRIG1基因过表达慢病毒载体的构建和鉴定

目的探讨构建人类富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)基因过表达慢病毒表达载体并转染胶质瘤细胞系U87细胞的技术方法,为研究LRIG1的功能提供帮助。方法用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切LRIG1基因和plvxDsRed-monomer-n1慢病毒载体,琼脂糖凝电泳回收LRIG1片段和载体片段;通过T4连接酶将LRIG1基因连接至慢病毒载体上;按Lenti-XHT慢病毒包装试剂盒说明包装慢病毒;用EcoRⅠ及BamHⅠ双酶切法鉴定重组慢病毒载体;然后用plvxDsRed-monomer-n1和plvxDsRed-monomer-n1-3×flagLRIG1分别转染293T细胞和胶质瘤细胞系U87细胞,荧光定量PCR和western blot检测LRIG1 m RNA和蛋白表达。结果 U87细胞感染病毒载体后经嘌呤霉素筛选显示细胞红色荧光较空载体感染细胞减弱;实时PCR结果显示LRIG1 m RNA过表达组较对照明显升高;提取感染后细胞蛋白,Western blot鉴定flag标签蛋白表达成功。结论 LRIG1基因慢病毒表达载体能感染胶质瘤细胞系U87细胞,可使外源基因获得稳定表达。

胃腺癌组织中LRIG1蛋白的表达及意义

目的探讨富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)在人体胃腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学En Vision二步法检测LRIG1蛋白在116例胃腺癌及其相应癌旁正常胃组织中的表达情况,并分析其表达与临床病理参数的关系。结果 LRIG1在胃腺癌组织中的阳性表达率(63.8%,74/116)低于癌旁正常胃组织(81.9%,95/116),差异具有统计学意义(P<0.05)。LRIG1蛋白的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期密切相关(P<0.05),而与患者年龄、性别及肿瘤大小无关(P>0.05)。结论 LRIG1在胃腺癌组织中的表达较相应癌旁正常胃组织低,而且随着肿瘤恶性程度的增加LRIG1蛋白的表达逐渐降低,可能作为抑癌基因参与了胃腺癌的发生、发展。

炎症小体NLRP3调控LPS诱导的前列腺癌增殖和侵袭的机制研究

目的探讨炎症小体NLRP3对LPS诱导的前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法体外培养人前列腺癌细胞系PC-3和DU-145,加入LPS刺激或转染siNC及NLRP3 siRNAs,用CCK-8实验检测细胞增殖活性,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用实时荧光定量PCR实验及Western blot实验检测NLPR3表达水平,用生物信息学手段分析NLRP3表达水平与炎症细胞浸润的相关性。结果与Control组相比,LPS处理组前列腺癌细胞增殖活性升高,侵袭能力增强,NLRP3表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);敲低NLRP3抑制前列腺癌细胞的增殖活性和侵袭能力,以及细胞分泌的IL-18水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中NLRP3与多种炎症细胞浸润呈正相关。结论LPS诱导前列腺癌细胞中NLRP3表达水平升高,增强细胞增殖、侵袭能力及炎症因子的分泌,促进炎症细胞浸润。

原发性肝癌患者癌组织NLRP3炎性小体表达状况研究

目的研究原发性肝癌患者癌组织核苷酸结合寡聚化结构域富含脓素亮氨酸重复序列结构域3(NLRP3)炎性小体表达情况。方法2017年1月~2018年1月我院诊治的原发性肝癌(PLC)患者34例和同期因肝胆管结石切除的肝组织标本30份,采用免疫组织化学法检测肝组织NLRP3炎性小体表达,采用RT-PCR法检测肝组织NLRP3 mRNA水平,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平,采用蛋白印记法检测肝组织NLRP3炎性小体、细胞钙依粘连蛋白、波形蛋白和半胱氨酸蛋白酶-1表达。结果肝癌组织细胞NLRP3炎性小体阳性率为76.5%,显著高于正常对照组的23.3%(P<0.05);肝癌组织NLRP3 mRNA水平为(-2.58±0.35),显著高于正常肝组织[(0.00±0.24),P<0.05];PLC患者血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平分别为(17.25±3.36)pg/ml、(60.32±8.14)pg/ml和(24.68±3.58)pg/ml,显著高于对照组[(10.35±1.25)pg/ml、(33.21±4.20)pg/ml和(10.36±2.54)pg/ml,P<0.05];正常对照组肝组织钙依粘连蛋白水平为(1.2±0.15),显著高于肝癌组[(0.41±0.04),P<0.05],而半胱氨酸蛋白酶-1和波形蛋白水平为(0.21±0.03)和(0.42±0.06),显著低于肝癌组[(1.49±0.12)和(1.51±0.14),P<0.05]。结论原发性肝癌患者癌组织NLRP3炎性小体呈现高表达,可能会导致炎症反应并促进肝癌细胞的迁移。

Lingo-1及其相关传导通路在神经系统修复中的研究进展

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白结构域的Nogo受体作用蛋白-1（Lingo-1）在神经元与少突胶质细胞修复、神经突延长、轴突再生等过程中，通过NgR/p75/Lingo-1或NgR/TROY/Lingo-1、WNK1、Myt1与Myt1l等通路发挥明确的负性调节作用，阻断Lingo-1及其通路可促进损伤的中枢神经系统再生，提示Lingo-1有可能成为治疗神经精神系统疾病的新靶点。

下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用

目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、 PHLPP1的共表达以确定PHLPP1在足细胞的定位;在正常葡萄糖(NG)及高糖(HG)培养液中培养足细胞,实时荧光定量PCR检测细胞PHLPP1 mRNA表达。采用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默PHLPP1的小干扰RNA(si-PHLPP1)转染入足细胞,实时定量PCR检测转染效率;按足细胞处理方式的不同将细胞分为NG组(正常葡萄糖浓度的培养液进行培养的足细胞)、 HG组(高糖培养液培养的足细胞)、 HG联合si-PHLPP1组(高糖培养液培养转染si-PHLPP1后的足细胞组)、羟氯喹(HCQ)处理的HG组(用自噬抑制剂HCQ与HG培养液联合处理的足细胞)。透射电镜观察各组足细胞中自噬小体的形成, Western blot法检测微管相关蛋白1轻涟3(LC3)、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、蛋白激酶B (AKT)及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PHLPP1在DN患者肾组织中高表达,且主要表达于肾小球足细胞内。HG培养液能够促进足细胞中PHLPP1 mRNA表达,并具有时间依赖性;与NG组相比, HG组、 HG联合si-PHLPP1组及HG联合HCQ组的足细胞自噬水平、 PI3K蛋白表达与mTOR的磷酸化水平均显著减低,细胞凋亡率、 c-caspase-3蛋白表达水平均显著增加,但HG联合si-PHLPP1组细胞的AKT磷酸化水平明显升高,其余两组AKT磷酸化水平显著降低;与HG组相比, HG联合si-PHLPP1组细胞的凋亡率、c-caspase-3蛋白表达均明显降低,而自噬水平, PI3K蛋白表达与mTOR和AKT蛋白的磷酸化水平均显著增加, HG联合HCQ组细胞的自噬水平明显降低,凋亡率与c-caspase-3蛋白表达均显著增加,其他指标无明显变化。结论 PHLPP1在DN肾组织显著高表达,下调足细胞PHLPP1的表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路促进足细胞自噬水平,减少足细胞的凋亡。

FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血／再灌注后Akt磷酸化及海马神经元损伤的影响

目的探讨FKBP51·PHLPP·Akt信号模块对大鼠脑缺血／再灌注（I／R）后Akt磷酸化及海马CAl区迟发性神经元损伤的影响。方法采用Pulsinelli-Brierley法制作全脑缺血损伤模型，每亚组6只动物，缺血前连续3d侧脑室注射PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝／苏氨酸蛋白磷酸酶2（PHdo．mainand Leucinerichrepeat Protein Phosphatases，PHLPP2）反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotides，ASODN）后缺血15rain，再灌注6h，应用免疫共沉淀及免疫印记分别检测PHLPP2、FK506连接蛋白5（FK506bindingprotein5，FKBP51）和蛋白激酶B（ProteinkinaseB，Akt）三者两两结合、检测Akt及其磷酸化的表达情况。再灌注5d，断头取脑，石蜡切片，苏木精一伊红染色，图像分析测定单位面积内染色细胞面积总和。I／R＋ASODN组分别与I／R组及I／R＋错义寡核苷酸（missense0ligodeoxynucleotides，MSODN）组比较，进行统计学分析。结果单因素方差分析结果显示：与I／R＋PHLPP2MSODN组（1．24＋0．24）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（1．06±0．01）PHLPP2与Akt间的两两结合水平明显受到抑制（P〈0．05）；与I／R＋PHLPP2MSODN组（1．68±0．11）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（1．04±0．13）FKBP51与Akt间的两两结合水平明显受到抑制（P〈0．05）；与I／R＋PHLPP2MSODN组（0．58±0．01）比较，I／R＋PHLPP2ASODN组（0．76±0．02），P-Akt表达水平明显增加（P〈0．05），而Akt总蛋白表达无明显变化（P〉0．05）；I／R5d＋PHLPP2ASODN组[（88-3±2．7）个]与I／R＋PHLPP2MSODN组[（20．1±2．5）个]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论FKBP51·PHLPP·Akt模块可能通过Akt信号通路参与脑缺血再灌注损伤，促进海马CAl区神经元的迟发性损伤。