亮甲酚蓝染色对牛未成熟卵母细胞体外成熟与体外受精的影响

为研究亮甲酚蓝（BCB）染色对牛未成熟卵母细胞体外成熟与体外受精（IVM-IVF）的影响，在牛卵母细胞成熟培养前用亮甲酚蓝进行染色选择，通过IVF检测选择效果。本试验以未进行染色处理的牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）作为对照组，在成熟培养前用26μmol／L亮甲酚蓝染色90min作为处理组，将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组（BCB＋）和无色组（BCB-）。成熟培养后进行体外受精，授精后48h统计卵裂率，7～8d后检查囊胚率。结果表明：（1）染色后着色的卵母细胞成熟率（80．83％）与对照组（60．20％）和无色组（51．92％）差异显著（P〈0．05）；（2）IVF后蓝色组囊胚率（32．99％）较对照组（17．64％）和无色组（3．57％）差异显著（P〈0．05）。由此可见，亮甲酚蓝对牛卵母细胞染色的选择被证明可以作为判断卵母细胞质量的一个标记。

亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟的影响

为了探讨不同浓度亮甲酚蓝对牛卵母细胞染色选择后对其体外成熟(IVM)的影响,本研究在牛卵母细胞成熟培养前直接用不同浓度梯度的亮甲酚蓝进行不同时间的染色。结果表明:①经过不同浓度的亮甲酚蓝染色后,所选择卵母细胞染色后着色的百分率及其成熟率是不同的。用26、39、52μmol/L的亮甲酚蓝染色后所得到的胞质蓝色组(27.7%、27.6%、31.9%)较13μmol/L的亮甲酚蓝染色后所得到的胞质蓝色组(2.1%)差异显著(P<0.05);②经过不同浓度的亮甲酚蓝染色后,胞质蓝色组(77.4%)较胞质无色组(51.3%)和对照组(60.2%)成熟率差异显著(P<0.05);③不同浓度亮甲酚蓝染色的胞质蓝色组间成熟率差异不显著(P>0.05);④不同浓度亮甲酚蓝染色组与对照组卵母细胞的成熟率差异不显著(P>0.05);⑤经过不同时间的亮甲酚蓝染色后,所选择卵母细胞着色的百分率是不同的。用26μmol/L的亮甲酚蓝染色90 min后所得到的胞质蓝色组(75%)较亮甲酚蓝染色60、30 min后所得到的胞质蓝色组(57.14%,40%)差异显著(P<0.05)。以亮甲酚蓝染色为基础的牛卵丘-卵母细胞复合体的区分可以用来有效的选择更具发育活力的牛卵母细胞。

利用亮甲酚蓝染色筛选优质猪卵母细胞

目的利用亮甲酚蓝（BCB）染色提高猪体外胚胎培养体系的效率。方法对猪卵丘卵母细胞复合体（COCs）进行BCB染色,观察染色后猪卵母细胞成熟率和早期胚胎发育能力并进行分析。结果着色组（BCB＋）猪卵母细胞达到减数分裂Ⅱ（MⅡ）期的比率（91.6%）显著高于未着色组（BCB-）（64.0%）和对照组猪卵母细胞（77.5%）（P〈0.05）;BCB＋孤雌猪胚胎的囊胚率（34.9%）显著高于BCB-（9.5%）和对照组（23.1%）（P〈0.05）;BCB＋核移植猪胚胎的囊胚率（23.0%）显著高于BCB-（5.0%）和对照组（14.1%）（P〈0.05）。结论BCB染色是一种有效筛选具有较强发育能力猪卵母细胞的方法。

PDE3与亮甲酚蓝在绵羊卵母细胞体外培养中的应用研究

[目的]探讨磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone与亮甲酚蓝染色液(BCB)相结合在绵羊卵母细胞体外培养中的应用。[方法]比较了BCB对绵羊卵母细胞的筛选与传统的形态分级之间的差异,以及对胚胎后期发育的影响;研究了Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,并用于BCB-卵母细胞体外培养。[结果]A、B级卵母细胞中BCB+卵母细胞的比例为64.42%,极显著高于C级卵母细胞的17.00%;BCB+卵母细胞的成熟率(86.16%)、卵裂率(85.29%)、囊胚率(34.40%)分别极显著高于BCB-卵母细胞(50.94%、36.19%和6.73%);6 h是Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,该试验组体外培养效率显著高于其他组;Milrinone对BCB-卵母细胞抑制培养6 h,极显著提高了体外胚胎发育率。[结论]为提高绵羊卵母细胞体外培养效率提供了依据。

亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞对牛体细胞克隆胚体外发育的影响

为探索用亮甲酚蓝染色法筛选卵母细胞是否有利于牛体细胞克隆胚的体外发育,将采集的卵母细胞分成3组:对照组,采集后的卵母细胞直接放入成熟液培养,不用亮甲酚蓝处理;控制对照组,卵母细胞于PBS中放置90 min后放入成熟液中培养;试验组,将采集的卵母细胞在含有26μmol/L亮甲酚蓝的PBS中放置90 min。然后将处理过的卵母细胞根据着色情况分为两组,即BCB+(胞质呈蓝色,成熟卵母细胞)和BCB-(胞质未着色,生长期卵母细胞)。各组卵母细胞24 h体外成熟培养,统计各组卵母细胞成熟率。分别用成熟后的各组卵母细胞用于细胞核移植,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数。结果表明,BCB+组卵母细胞的成熟率明显高于BCB-组卵母细胞的成熟率(74.0%,53.4%),差异显著(P<0.05)。BCB+组的囊胚率(45.0%)与对照组、控制对照组和BCB-组的囊胚率(34.9%,36.4%和5.2%)相比差异显著(P<0.05)。另外BCB+组的囊胚细胞总数(114.5±7.5)较其他组差异显著(P<0.05)。表明通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率。

亮甲酚蓝筛选对广西巴马小型猪孤雌激活及克隆重构胚早期发育的影响

【目的】探讨亮甲酚蓝(BCB)染色是否可以筛选出发育潜能优秀的卵母细胞。【方法】猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用13μmol/LBCB染色,根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+,蓝色)和阴性组(BCB-,不着色),以在不含BCB的改良杜氏磷酸盐缓冲液(m-DPBS)中处理90min为控制对照组,直接培育作空白对照,体外成熟培养后统计各组卵母细胞的核成熟率及孤雌激活胚胎、克隆重构胚胎(供体细胞来自广西巴马小型猪)的早期发育率。【结果】BCB+组卵母细胞的核成熟率(80.8%)显著高于BCB-组(44.2%)和空白对照组(72.4%);BCB+组的孤雌囊胚形成率(32.9%)显著高于BCB-组(10.1%),但与对照组(25.8%)之间无显著差异;BCB+组显微操作核移植胚胎的囊胚发育率(14.1%)显著高于BCB-组(3.4%),但与对照组之间无显著差异;各组手工克隆胚胎发育率之间无显著差异。【结论】BCB染色筛选出的卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能,但未能显著改善广西巴马小型猪显微操作及手工克隆胚胎的早期发育。

亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟和凋亡的影响

为了探讨亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)对牛未成熟卵母细胞染色选择后对其体外成熟(IVM)和凋亡的影响,本研究在牛卵母细胞成熟培养前用26μmol/L BCB染色90min作为处理组,以未染色卵母细胞作为对照组;将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组(BCB+)和无色组(BCB-),成熟培养后检测卵子的发育能力。结果表明:1经BCB染色卵母细胞在成熟后,BCB+组卵母细胞成熟率(80.92%)较对照组(60.00%)和BCB-组(51.61%)差异显著(P<0.05);2BCB+组的凋亡率(6.50%)较对照组(28.21%)、BCB-组(39.06%)差异显著(P<0.05),随着卵母细胞发育潜能的升高其凋亡率逐渐降低。由此可见,以亮甲酚蓝染色为基础的牛卵丘-卵母细胞复合体的区分可以用来有效的选择更具发育活力的牛卵母细胞。

亮甲酚蓝染色对水牛卵母细胞体外受精和孤雌激活胚胎发育的影响

[目的]探讨亮甲酚蓝(BCB)染色对水牛卵母细胞体外受精及孤雌激活胚胎发育的影响。[方法]卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用浓度26μmol/L的亮甲酚蓝染色90 min,然后根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+,蓝色)和阴性组(BCB-,不着色)。以未经染色处理的COCs为对照组,控制对照组卵母细胞在含0.4%牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS)中孵育90 min。体外成熟培养后统计各组的成熟率、体外受精和孤雌激活后的发育率。[结果]BCB+组的成熟率(65.70%)显著高于对照组(59.86%)、控制对照组(58.42%)和BCB-组(48.86%)。在体外受精后的囊胚发育率方面,BCB+组(27.08%)和对照组(25.49%)差异不显著,但显著高于控制对照组(20.50%)和BCB-组(8.45%)。在孤雌激活后的囊胚发育率方面,BCB-组显著低于其他各组,但BCB+组、对照组以及控制对照组之间无显著差异。[结论]亮甲酚蓝染色筛选出的阳性卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能,但并不能显著提高卵母细胞体外受精及孤雌激活后的胚胎发育率。

亮甲酚蓝染色对牛卵母细胞体外成熟的影响

研究旨在观察亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)对牛卵母细胞的染色效果及体外成熟的影响,从而筛选出更高质量的卵母细胞用于胚胎工程研究。从本地屠宰场收集牛卵巢后采用抽吸法获取卵泡液,在体视显微镜下选择卵丘完整、胞质均匀的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机分组,分别进行BCB染色时间和不同浓度BCB染色的试验。结果表明,染色90 min后卵母细胞着色率为68.1%,显著高于30、60 min组(P<0.05),辨识难度为"中";39μmol/L组着色率显著高于13μmol/L组(P<0.05),与26、52μmol/L组差异不显著(P>0.05),成熟数最高(62),成熟率显著高于52μmol/L组,与其它组差异不显著(P>0.05);BCB+组和BCB-组的成熟率与对照组比较差异均不显著(P>0.05)。结果提示,39μmol/L BCB染色90 min能有效筛选牛COCs用于IVM,但是并不能显著提高牛卵母细胞的成熟率。

PDE3与亮甲酚蓝在绵羊卵母细胞体外培养中的应用研究(英文)

[目的]探讨磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone与亮甲酚蓝染色液(BCB)相结合在绵羊卵母细胞体外培养中的应用。[方法]比较了BCB对绵羊卵母细胞的筛选与传统的形态分级之间的差异,以及对胚胎后期发育的影响;研究了Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,并用于BCB-卵母细胞体外培养。[结果]A、B级卵母细胞中BCB+卵母细胞的比例为64.42%,极显著高于C级卵母细胞的17.00%; BCB+卵母细胞的成熟率(86.16%)、卵裂率(85.29%)、囊胚率(34.40%)分别极显著高于BCB-卵母细胞(50.94%、36.19%和6.73%);6 h是Milrinone对绵羊卵母细胞的最佳抑制时间,该试验组体外培养效率显著高于其他组;Milrinone对BCB-卵母细胞抑制培养6 h,极显著提高了体外胚胎发育率。[结论]为提高绵羊卵母细胞体外培养效率提供了依据。

亮甲酚蓝染色法评价斑马鱼卵母细胞体外成熟度的实验研究

通过不同浓度亮甲酚蓝(BCB)对斑马鱼卵母细胞进行染色,探讨该方法用于判断鱼类卵母细胞成熟度的可行性,并利用该法对孕酮促斑马鱼卵母细胞体外成熟实验中的卵母细胞成熟情况进行了判断和分析。结果表明:(1)BCB染色法用于判断鱼类卵母细胞成熟度是可行的。(2)低浓度(1 nmol/L和10 nmol/L)孕酮处理6 h,对斑马鱼卵母细胞的成熟并无明显促进作用,高浓度的孕酮(100 nmol/L和1000 nmol/L)不利于卵母细胞的成熟。(3)浓度为100 nmol/L的孕酮处理12 h,对卵母细胞成熟的促进作用显著。

亮甲酚蓝对猪卵母细胞体外成熟及核移植胚胎发育能力的影响

试验旨在研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色对卵母细胞体外成熟及后期胚胎发育潜力的影响。本研究利用13、26、39、52μmol/L BCB对成熟培养前的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes,COCs)染色90min,比较各组卵母细胞的着色率、成熟率及孤雌激活胚胎和核移植胚胎的发育情况。结果表明,随着BCB浓度的增加,COCs着色率依次增加(20.00%、46.39%、51.66%和59.03%),但猪卵母细胞体外成熟率逐渐降低(74.03%、72.16%、70.53%和48.61%);不同浓度BCB染色后所得BCB+组卵的成熟率均明显高于BCB-组。试验结果发现,BCB浓度在26μmol/L时,经染色的COCs既有较高的着色率,且不影响其体外成熟的效率。基于此,研究选取26μmol/L BCB作为最佳浓度对猪卵母细胞进行染色筛选,然后进行体外培养、孤雌激活及核移植试验。结果显示,筛选的BCB+组卵母细胞的孤雌胚和核移植胚的卵裂率和囊胚率均显著高于BCB-组(P<0.05),而与对照组间无显著差异(P>0.05)。胚胎移植试验挑选BCB+组中发育较好的1-2细胞期重组胚对5头代孕母猪进行了移植,其中2头怀孕,1头顺利产下了6头健康胎儿。综合以上试验结果表明,利用BCB染色可作为一种有效的方法筛选体外成熟质量较高的猪卵母细胞,同时提高胚胎体外生产效率。

在OP存在下亮甲酚蓝吸光光度法间接测定铵的研究

用氢氧化钠碱解蒸馏分离出氨,以亮甲酚蓝为显色剂,采用吸光光度法进行了铵的间接测定,非离子表面活性剂OP具有胶束增溶作用;方法的检测波长为520nm,检出限和线性范围分别为0.05μg·ml^(-1)和0.05～1.3μg·ml^(-1).将方法分别用于土壤及水样中铵的测定,结果令人满意.

亮甲酚蓝优选哺乳动物卵母细胞技术研究进展

随着动物胚胎工程技术的不断发展,卵母细胞的需求量不断增大。卵母细胞的质量决定植入前早期胚胎发育的效率,为此筛选出优质卵母细胞对于提高后续胚胎的发育起着决定性的作用。本文就亮甲酚蓝染色筛选成熟培养前的卵母细胞,对于卵母细胞质量、后续胚胎发育效率和早期胚胎发育相关基因表达的影响方面的研究予以综述,期望对于同行有一定的借鉴意义。

亮甲酚蓝染色对牛核移植胚胎体外发育的影响

为研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色选择卵母细胞对牛核移植体系的影响,本实验以未进行染色处理的牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)作为对照组,在成熟培养前用26μmol/L亮甲酚蓝染色90 min作为处理组,将处理组依照胞质的颜色分为蓝色组(BCB+)和无色组(BCB-),分别在成熟培养后作为受体,经胞质内注射法构建牛体细胞核移植胚胎,统计体细胞核移植的卵裂数、囊胚数和囊胚细胞数来评价其发育潜能。结果表明:BCB+组的成熟率(80.9%)与对照组(60.2%)和BCB-组(51.9%)差异显著(P<0.05);BCB+组的囊胚率(32.26%)与对照组(21.49%)和BCB-组(5.95%)差异显著(P<0.05),另外BCB+组的囊胚细胞总数(132.5)显著高于其他组(P<0.05)。结果显示,通过亮甲酚蓝染色法筛选出成熟的高质量牛卵母细胞用于体细胞核移植,可以获得更高的克隆囊胚率。